Many well-diverged hybrids of P. ar

Many well-diverged hybrids of P. armeniacum, P. micranthum
and P. delenatii currently exist in the slipper orchid market worldwide.
These hybrids are morphologically similar in some cases
(Fig. 1), particularly in vegetative parts, and are very difficult to identify accurately. The rDNA-ITS region have been used in phylogenetic
analysis in plants at generic and intrageneric levels. The
length and sequences of ITS regions of ribosomal RNA gene repeats
are believed to be fast evolving and therefore may vary. Universal
PCR primers designed from highly conserved regions flanking
the ITS, relatively small size of the ITS region and high copy number enable easy amplification of ITS region (Dubouzet and Shinoda,
1999). These advantages have made rDNA-ITS region as preferred
choice for molecular typing. Thus, many studies in recent years
have employed ITS sequences as genetic markers for various species
(Zhang et al., 2007; Choo et al., 2009; Gulbitti-Onarici et al., 2009).
In this study, the sequence of rDNA-ITS region and SCAR (sequence
characterized amplified regions) markers were used as genetic
markers for distinguishing P. armeniacum, P. micranthum, P. delenatii
and their hybrid progenies.
To develop the SCAR markers for the identification of tested
Paphiopedilum species, the rDNA-ITS regions in 31 Paphiopedilum
species were amplified using Pap-18SF and Pap-ITS2R
primers (Table 1). An 890 bp DNA fragment was detectable in
all the tested Paphiopedilum species (Table 2). These rDNAITS
fragments collected from the genomic DNA samples of P.
armeniacum, P. micranthum and P. delenatii were sequenced
(Fig. 2). The identified nucleotide sequences for the tested three species were similar to that of the sequences listed in GenBank
(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). The identified sequences were
further compared to each other to find species-specific primer
regions. As a result, the species-specific regions were obtained
by comparing three entire rDNA-ITS sequences (Fig. 2). These
specifics-specific regions were used for developing species-specific
SCAR markers.
As shown in Table 1, three SCAR primers SCAR-600armF/Pap-
ITS2R, SCAR-300delF/Pap-ITS2R and SCAR-700micF/Pap-ITS2R
were developed for discriminating P. armeniacum, P. micranthum,
P. delenatii and their respective hybrids. SCAR-600armF/Pap-ITS2R
gave a 600 bpproduct only with P. armeniacum and its hybrid progenies
(Tables 2 and 3). On the other hand, SCAR-300delF/Pap-ITS2R
gave a 300 bp product only with genomic DNA samples of P. delenatii
and its hybrid progenies (Tables 2 and 3), while, only for
P. micranthum and its hybrid progenies, SCAR-700micF/Pap-ITS2R
gave a 700 bp product (Tables 2 and 3). These results indicate that

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ลูกผสมแห่ง diverged หลายของ P. armeniacum, P. micranthumและ P. delenatii อยู่ในตลาดรองเท้าแตะกล้วยไม้ทั่วโลกลูกผสมเหล่านี้จะคล้าย morphologically ในบางกรณี(Fig. 1), โดยเฉพาะอย่างยิ่งในส่วนผักเรื้อรัง และยากที่จะระบุได้อย่างถูกต้องไม่ ใช้ใน phylogenetic rDNA เป็นภูมิภาควิเคราะห์ในพืชในระดับทั่วไป และ intrageneric ที่ความยาวและลำดับของภูมิภาคของ ribosomal อาร์เอ็นเอยีนซ้ำเชื่อว่าจะพัฒนาอย่างรวดเร็ว และดังนั้น อาจเปลี่ยนแปลง สากลไพรเมอร์ PCR มาจากภูมิภาคสูงนำ flankingของ ขยายกลายเป็นภูมิภาค (Dubouzet และชิโนดะ เปิดใช้งานขนาดเล็กของภูมิภาคและจำนวนสำเนาสูง1999) ข้อดีเหล่านี้ทำ rDNA เป็นภูมิภาคที่ต้องการทางเลือกสำหรับการพิมพ์ระดับโมเลกุล ดังนั้น ในศึกษาในปีที่ผ่านมามีลูกจ้างเป็นลำดับเป็นเครื่องหมายพันธุในชนิดต่าง ๆ(Zhang et al., 2007 ชู้ et al., 2009 Gulbitti-Onarici et al., 2009)ในการศึกษานี้ ลำดับของ rDNA เป็นภูมิภาคและรอยแผลเป็น (ลำดับเครื่องหมายลักษณะภูมิภาคเอาต์) ใช้เป็นพันธุกรรมเครื่องหมายสำหรับการแยกแยะ P. armeniacum, P. micranthum, P. delenatiiและ progenies ของไฮบริดการพัฒนาเครื่องหมายรอยสำหรับรหัสของทดสอบพันธุ์รองเท้านารี ภูมิภาค rDNA เป็นในรองเท้านารี 31พันธุ์ได้ขยายการใช้ 18SF บบ ITS2Rไพรเมอร์ (ตาราง 1) 890 bp ดีเอ็นเอส่วนสามารถตรวจสอบได้ในทั้งหมดการทดสอบรองเท้านารีพันธุ์ (ตารางที่ 2) RDNAITS เหล่านี้แยกส่วนจากตัวอย่าง DNA genomic ของพีarmeniacum, P. micranthum และ P. delenatii ถูกเรียงลำดับ(Fig. 2) ลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ระบุสำหรับชนิดสามทดสอบได้ลำดับที่แสดงใน GenBank(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) ลำดับที่ระบุได้เปรียบเทียบอีก เพื่อค้นหารองพื้น species-specificขอบเขตการ ดังนั้น ได้รับพื้นที่ species-specificโดยการเปรียบเทียบลำดับ rDNA เป็นสามทั้งหมด (Fig. 2) เหล่านี้ใช้สำหรับการพัฒนา species-specific ภูมิภาคเฉพาะประเภทเครื่องหมายรอยแผลเป็นดังแสดงในตารางที่ 1 ไพรเมอร์แผล 3 แผล-600armF/บ-ITS2R รอยแผลเป็น-300delF/บ-ITS2R และรอยแผลเป็น-700micF/บ-ITS2Rได้รับการพัฒนาสำหรับเหยียดพวกผิว P. armeniacum, P. micranthumP. delenatii และลูกผสมของพวกเขาเกี่ยวข้อง รอยแผลเป็น-600armF/บ-ITS2Rให้ bpproduct 600 เท่ากับ P. armeniacum และ progenies ของไฮบริด(ตารางที่ 2 และ 3) ในทางกลับกัน แผล-300delF/บ-ITS2Rให้ผลิตภัณฑ์ bp 300 ด้วย genomic DNA อย่างของ P. delenatiiและของ progenies ไฮบริด (ตารางที่ 2 และ 3), ขณะที่ สำหรับP. micranthum และของไฮบริ progenies รอยแผลเป็น-700micF/บ-ITS2Rให้ผลิตภัณฑ์ bp 700 (ตารางที่ 2 และ 3) ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

หลายลูกผสมดีแยกของพี armeniacum, P. micranthum
และพี delenatii อยู่ในขณะนี้ในตลาดกล้วยไม้รองเท้าทั่วโลก.
ลูกผสมเหล่านี้มีสัณฐานคล้ายกันในบางกรณี
(รูปที่ 1). โดยเฉพาะอย่างยิ่งในส่วนของพืชและเป็นเรื่องยากมากที่จะ ระบุถูกต้อง ภูมิภาค rDNA ของมันได้ถูกนำมาใช้ในสายวิวัฒนาการ
การวิเคราะห์ในพืชในระดับทั่วไปและ intrageneric
ระยะเวลาและลำดับของภูมิภาคของซ้ำยีน RNA โซมอล
เชื่อว่าจะเป็นไปอย่างรวดเร็วการพัฒนาและดังนั้นจึงอาจแตกต่างกันไป ยูนิเวอร์แซ
ไพร PCR ออกแบบมาจากภูมิภาคอนุรักษ์สูงขนาบข้าง
ของขนาดที่ค่อนข้างเล็กของภูมิภาคและจำนวนสำเนาสูงช่วยให้การขยายง่ายของภูมิภาค ITS (Dubouzet และชิโนดะ,
1999) ข้อได้เปรียบเหล่านี้ได้ทำให้ rDNA-ITS ภูมิภาคเป็นที่ต้องการ
ทางเลือกสำหรับการพิมพ์ในระดับโมเลกุล ดังนั้นการศึกษาจำนวนมากในปีที่ผ่านมา
มีการจ้างงานลำดับของมันเป็นเครื่องหมายทางพันธุกรรมชนิดต่างๆ
(Zhang et al, 2007;. Choo et al, 2009;. Gulbitti-Onarici et al, 2009.).
ในการศึกษานี้ลำดับของ rDNA ภูมิภาค -Its และ SCAR (ลำดับ
ลักษณะภูมิภาคขยาย) เครื่องหมายถูกใช้เป็นทางพันธุกรรม
เครื่องหมายสำหรับลักษณะ armeniacum พีพี micranthum, P. delenatii
และลูกไฮบริดของพวกเขา.
เพื่อพัฒนาเครื่องหมาย SCAR เพื่อระบุตัวตนของการทดสอบ
สายพันธุ์รองเท้านารี, rDNA ภูมิภาค -Its ในวันที่ 31 รองเท้านารี
สายพันธุ์ที่ถูกขยายโดยใช้ Pap-18SF และ Pap-ITS2R
ไพร (ตารางที่ 1) ชิ้นดีเอ็นเอ bp 890 เป็นที่ตรวจพบใน
ทุกสายพันธุ์รองเท้านารีทดสอบ (ตารางที่ 2) เหล่านี้ rDNAITS
ชิ้นส่วนที่เก็บได้จากตัวอย่างดีเอ็นเอจีโนมของพี
armeniacum, P. micranthum และพี delenatii มีลำดับขั้นตอน
(รูปที่ 2). ระบุลำดับเบสสำหรับการทดสอบสามชนิดมีความคล้ายคลึงกับที่ของลำดับที่ระบุไว้ใน GenBank
(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) ระบุลำดับที่ถูก
เมื่อเทียบต่อไปแต่ละอื่น ๆ เพื่อหารองพื้นสายพันธุ์เฉพาะ
ภูมิภาค เป็นผลให้พื้นที่เฉพาะสายพันธุ์ที่ได้รับ
โดยการเปรียบเทียบทั้งสาม rDNA-ITS ลำดับ (รูปที่ 2). เหล่านี้
เฉพาะภูมิภาคเฉพาะถูกนำมาใช้ในการพัฒนาสายพันธุ์เฉพาะ
เครื่องหมาย SCAR.
ดังแสดงในตารางที่ 1 สามไพร SCAR SCAR-600armF / Pap-
ITS2R, SCAR-300delF / Pap-ITS2R และ SCAR-700micF / Pap-ITS2R
ได้รับการพัฒนาสำหรับ แบ่งแยก P. armeniacum, P. micranthum,
P. delenatii และลูกผสมของตน SCAR-600armF / Pap-ITS2R
ให้ 600 BPProduct เฉพาะกับ armeniacum P. และลูกไฮบริด
(ตารางที่ 2 และ 3) ในทางตรงกันข้าม, SCAR-300delF / Pap-ITS2R
ให้สินค้า 300 bp เฉพาะกับตัวอย่างดีเอ็นเอของ delenatii P.
และลูกไฮบริด (ตารางที่ 2 และ 3) ในขณะที่เพียงเพื่อ
P. micranthum และลูกไฮบริด, SCAR-700micF / Pap-ITS2R
ให้ผลิตภัณฑ์ bp 700 (ตารางที่ 2 และ 3) ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่า

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

หลายดีแยกออกลูกผสมของหน้าเมเนียคุ่ม , หน้าไมแครนตุ้ม
, เดเลนาติอี้อยู่ในขณะนี้ในกล้วยไม้รองเท้าตลาดทั่วโลก .
พวกลูกผสมเหมือนกันจากในบางกรณี
( รูปที่ 1 ) โดยเฉพาะอย่างยิ่งในส่วนที่เป็นผัก และยากมากที่จะระบุได้อย่างแม่นยำ โดย rDNA ภูมิภาคของ บริษัท มีการใช้ในการวิเคราะห์ phylogenetic
ในพืชในระดับทั่วไปและ intrageneric .
ความยาวและลำดับของภูมิภาคของยีนไรโบโซมอล อาร์เอ็นเอซ้ำ
เชื่อว่าได้รับการพัฒนาอย่างรวดเร็วและดังนั้นจึงอาจแตกต่างกัน ไพรเมอร์ที่ออกแบบมาจากเทคนิคสากล

จสูงบริเวณอนุรักษ์ของขนาดที่ค่อนข้างเล็กของภูมิภาคและคัดลอกตัวเลขสูงช่วยขยายง่ายของภูมิภาค ( dubouzet ชิโนดะ
และ , 1999 ) ข้อดีเหล่านี้ทำให้เขตของที่ต้องการ
rDNAทางเลือกสำหรับโมเลกุลพิมพ์ ดังนั้น การศึกษาในหลายปีที่ผ่านมามีการลำดับ
ใช้เป็นเครื่องหมายพันธุกรรมชนิดต่างๆ
( Zhang et al . , 2007 ; Choo et al . , 2009 ; gulbitti onarici et al . , 2009 ) .
ในการศึกษานี้ ลำดับของ rDNA ของภูมิภาคและแผลเป็น ( ลำดับ
ลักษณะแถบภูมิภาค ) เครื่องหมาย ใช้เป็นเครื่องหมายพันธุกรรม
สําหรับการแยกหน้าเมเนียคุ่ม , หน้าไมแครนตุ้ม , หน้าเดเลนาติอี้

ลูกและไฮบริดของพวกเขา การพัฒนาเครื่องหมายแผลเป็นเพื่อการจำแนกทดสอบ
กล้วยไม้รองเท้านารีสายพันธุ์ , ชนิดภูมิภาคใน 31 นารี
ชนิดขยายและใช้ pap-18sf pap-its2r
ชนิด ( ตารางที่ 1 ) เป็นผู้ถูกตรวจพบใน BP ดีเอ็นเอ
ทั้งหมดทดสอบนารีชนิด ( ตารางที่ 2 ) เหล่านี้ rdnaits
เศษที่รวบรวมจากตัวอย่างดีเอ็นเอของ P .
จีโนมเมเนียคุ่ม , หน้าไมแครนตุ้ม , เดเลนาติอี้เป็นลำดับ
( รูปที่ 2 ) ระบุลำดับนิวคลีโอไทด์โดยสามชนิดคือคล้ายกับที่ของลำดับรายการบริเวณ
( http : / / www.ncbi . nlm . NIH . gov / ) ระบุลำดับถูก
เพิ่มเติมเมื่อเทียบกับแต่ละอื่น ๆ เพื่อหาแนวทาง
ภูมิภาคเฉพาะ - ขยายพันธุ์ . เป็นผลให้พื้นที่เฉพาะ - ขยายพันธุ์ได้
โดยการเปรียบเทียบทั้งสามชนิดของลำดับ ( รูปที่ 2 ) ภูมิภาคที่เฉพาะเจาะจงเฉพาะเหล่านี้ถูกใช้เพื่อพัฒนาเผ่าพันธุ์ - เฉพาะ

รอยแผลเป็นเครื่องหมาย
ดังแสดงในตารางที่ 1 สามแผลเป็นชนิด scar-600armf / PAP -
its2r scar-300delf / , และ / pap-its2r scar-700micf pap-its2r
ถูกพัฒนาเพื่อจำแนกหน้าเมเนียคุ่ม , หน้าไมแครนตุ้ม
หน้าเดเลนาติอี้ของตน , และลูกผสม scar-600armf / pap-its2r
ให้ 600 bpproduct เท่านั้นที่มีหน้าเมเนียคุ่มและ
ลูก ( ตารางที่ 2 และ 3 ของไฮบริด ) บนมืออื่น ๆ , scar-300delf / pap-its2r
ให้ผลิตภัณฑ์ 300 BP เฉพาะกับจีโนมดีเอ็นเอของลูกผสมของใบหน้าและเดเลนาติอี้
( ตารางที่ 2 และ 3 ) ในขณะที่เพียง
หน้าไมแครนตุ้มใบและลูกผสมของ scar-700micf / pap-its2r
ให้ผลิตภัณฑ์ 700 BP ( ตารางที่ 2 และ 3 ) ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า