Nucleic acid applicationsSpectropho

Nucleic acid applications
Spectrophotometry can be used to estimate DNA or RNA concentration and to analyze the
purity of the preparation. Typical wavelengths for measurement are 260 nm and 280 nm.
In addition measurements at 230 nm and 320 nm can provide further information.
Purines and pyrimidines in nucleic acids naturally absorb light at 260 nm. For pure samples
it is well documented that for a pathlength of 10 mm, an absorption of 1A unit is equal to a
concentration of 50 µg/ml DNA and 40 µg/ml for RNA. For oligonucleotides the concentration
is around 33 µg/ml but this may vary with length and base sequence.
So for DNA: Concentration (µg/ml) = Abs260 × 50.
These values are known as conversion factors.
A number of other substances which also absorb light at 260 nm could interfere with DNA values,
artificially increasing the result calculated from the absorption readings. To compensate for
this a selection of ratios and background corrections have been developed to help eliminate
false readings.
0.0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 350 360 370 380 390 400
×
X: 300
Y: 0.063
Absorbance
Wavelength (nm)
Fig 4. A typical wavelength scan for a pure DNA sample.
7
There is a wide absorbance peak around 260 nm preceded by a ‘dip’ at 230 nm. Therefore
to measure the DNA absorption, the 260 nm DNA peak must be distinguishable from the
230 nm reading.
If the readings at 230 nm are too similar to those at 260 nm, DNA cannot be measured
accurately. Higher 230 nm readings can indicate contaminants in the sample. There should
also be a rapid tail-off from 260 nm down to 320 nm. For this reason, 320 nm is often used
to measure background (see background correction).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แอปพลิเคชันของกรดนิวคลีอิกSpectrophotometry สามารถใช้ใน การประเมินความเข้มข้นของดีเอ็นเอหรืออาร์เอ็นเอ และ การวิเคราะห์การความบริสุทธิ์ของการเตรียมการ ความยาวคลื่นโดยทั่วไปสำหรับการวัด 260 นาโนเมตรและ 280 นาโนเมตรในวัดนี้ที่ 230 nm และ 320 nm สามารถให้ข้อมูลเพิ่มเติมสัญญาณและ pyrimidines ในกรดนิวคลีอิกธรรมชาติดูดซับแสงที่ 260 nm ตัวอย่างบริสุทธิ์มันเป็นเอกสารที่ดีสำหรับ pathlength 10 มม. การดูดซึมของหน่วย 1A เท่ากับการเข้มข้น 50 µg/ml ดีเอ็นเอและ 40 µg/ml สำหรับ RNA สำหรับ oligonucleotides ความเข้มข้นมีประมาณ 33 µg/ml แต่นี้อาจแตกต่างกันกับความยาวและฐานลำดับเพื่อให้ได้ดีเอ็นเอ: ความเข้มข้น (µg/ml) = Abs260 × 50ค่าเหล่านี้จะเป็นตัวแปลงจำนวนของสารอื่น ๆ ซึ่งยัง ดูดซับแสงที่ 260 nm อาจรบกวนค่าดีเอ็นเอเทียมเพิ่มผลคำนวณค่าการดูดซึม เพื่อชดเชยนี้อัตราส่วนและการแก้ไขพื้นหลังได้รับการพัฒนาเพื่อช่วยขจัดการอ่านค่าที่ผิดพลาด0.00.10.20.30.40.50.60.70.80.9200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 350 360 370 380 390 400×X: 300Y: 0.063Absorbanceความยาวคลื่น (nm)รูปที่ 4 การสแกนคลื่นทั่วไปสำหรับตัวอย่างดีเอ็นเอบริสุทธิ์7มีช่วงกว้าง absorbance ประมาณ 260 nm ก่อนหน้า โดย 'แช่' ที่ 230 nm ดังนั้นการวัดการดูดซึมดีเอ็นเอ ดีเอ็นเอสูง 260 ของ nm ต้องแตกต่างจากการอ่าน 230 nmถ้าอ่านที่ 230 nm จะคล้ายกับที่ 260 nm ดีเอ็นเอไม่สามารถวัดอย่างถูกต้อง สูง 230 nm อ่านสามารถบ่งชี้สิ่งปนเปื้อนในตัวอย่าง ควรมียัง เป็นการเร็วหางออกจาก 260 nm ลงไป 320 nm ด้วยเหตุนี้ 320 nm มักใช้วัดพื้นหลัง (โปรดดูการแก้ไขพื้นหลัง)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การประยุกต์ใช้กรดนิวคลี
Spectrophotometry
สามารถนำมาใช้ในการประเมินความเข้มข้นของดีเอ็นเอหรืออาร์เอ็นเอและวิเคราะห์ความบริสุทธิ์ของการเตรียมความพร้อม ความยาวคลื่นทั่วไปสำหรับการตรวจวัดเป็น 260 นาโนเมตรและ 280 นาโนเมตร.
ในวัดนอกจากนี้ที่ 230 นาโนเมตรและ 320 นาโนเมตรสามารถให้ข้อมูลเพิ่มเติม.
พิวรีนและไซกรดนิวคลีอิกธรรมชาติดูดซับแสงที่ 260 นาโนเมตร สำหรับตัวอย่างบริสุทธิ์มันเป็นเอกสารที่ดีที่ยาวทางเดิน 10 มมการดูดซึมของหน่วย 1A เป็นเท่ากับความเข้มข้น50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรดีเอ็นเอและ 40 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรอาร์เอ็นเอ สำหรับ oligonucleotides ความเข้มข้นอยู่ที่ประมาณ33 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร แต่อาจแตกต่างกันมีความยาวและลำดับฐาน. ดังนั้นสำหรับดีเอ็นเอเข้มข้น (ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) = Abs260 × 50. ค่าเหล่านี้เป็นที่รู้จักกันเป็นปัจจัยการแปลงจำนวนของสารอื่น ๆ ซึ่งยัง ดูดซับแสงที่ 260 นาโนเมตรสามารถยุ่งเกี่ยวกับค่าดีเอ็นเอเทียมเพิ่มขึ้นผลที่ได้คำนวณจากการอ่านการดูดซึม เพื่อชดเชยการนี้การเลือกของอัตราส่วนและการแก้ไขพื้นหลังได้รับการพัฒนาที่จะช่วยขจัดอ่านเท็จ. 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 350 360 370 380 390 400 × X: 300 Y: 0.063 ดูดกลืนแสงความยาวคลื่น (นาโนเมตร) รูปที่ 4. สแกนความยาวคลื่นปกติสำหรับตัวอย่างดีเอ็นเอบริสุทธิ์. 7 มียอดการดูดกลืนแสงกว้างรอบ 260 นาโนเมตรนำหน้าด้วย 'กรมทรัพย์สินทางปัญญา' ที่ 230 นาโนเมตรเป็น ดังนั้นในการวัดการดูดซึมดีเอ็นเอยอดดีเอ็นเอนาโนเมตร 260 จะต้องมีความแตกต่างจากการอ่าน230 นาโนเมตร. ถ้าอ่านที่ 230 นาโนเมตรจะคล้ายกันมากเกินไปให้กับผู้ที่ 260 นาโนเมตรดีเอ็นเอไม่สามารถวัดได้อย่างถูกต้อง อ่าน 230 นาโนเมตรที่สูงขึ้นสามารถบ่งบอกถึงสารปนเปื้อนในตัวอย่าง ควรนอกจากนี้ยังจะเป็นหางอย่างรวดเร็วจาก 260 นาโนเมตรลงไปที่ 320 นาโนเมตร ด้วยเหตุนี้ 320 นาโนเมตรมักจะใช้ในการวัดพื้นหลัง(ดูการแก้ไขพื้นหลัง)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

โปรแกรมกรดนิวคลีอิกวิธีสามารถใช้ในการประมาณการปริมาณ DNA หรือ RNA เพื่อวิเคราะห์ความบริสุทธิ์ของการเตรียมการ โดยทั่วไปสำหรับการวัดความยาวคลื่น 260 nm และ 280 nm .นอกจากนี้ในการวัดที่ 230 nm และ 320 nm สามารถให้ข้อมูลเพิ่มเติมไพริมิดีนเบสพิวรีนในกรดนิวคลีอิกและธรรมชาติดูดซับแสงที่ 260 นาโนเมตร อย่างบริสุทธิ์มันเป็นเอกสารที่ดีสำหรับ pathlength 10 มิลลิเมตร มีการดูดซึมของหน่วย ซึ่งเท่ากับเป็นความเข้มข้น 50 µ g / ml ดีเอ็นเอและ 40 µ g / ml RNA โอลิโกนิวคลีโอไทด์ความเข้มข้นสำหรับประมาณ 33 µ g / ml แต่ทั้งนี้ขึ้นอยู่กับความยาวและลำดับเบสดังนั้น สำหรับดีเอ็นเอ : สมาธิ ( µกรัม / มิลลิลิตร ) = abs260 × 50ค่าเหล่านี้เป็นที่รู้จักกันเป็นปัจจัยการแปลงจำนวนของสารอื่น ๆซึ่งยังดูดซับแสงที่ 260 นาโนเมตร สามารถแทรกแซงกับดีเอ็นเอของค่านิยมช่วยเพิ่มผลที่คำนวณจากการทำนาย เพื่อชดเชยสำหรับนี้การเลือกอัตราส่วนและการแก้ไขพื้นหลังได้ถูกพัฒนาขึ้นเพื่อช่วยขจัดอ่านผิด0.00.10.20.30.40.50.60.70.80.9200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 350 360 370 380 390 400×X : 300Y : 0.063การดูดกลืนแสงความยาวคลื่น ( nm )รูปที่ 4 ความยาวคลื่นทั่วไปสแกนบริสุทธิ์ดีเอ็นเอตัวอย่าง7 .มีพีคการดูดกลืนแสงกว้างประมาณ 260 nm นำหน้าโดย ' จิ้ม ' ที่ 230 nm . ดังนั้นการวัดการดูดซึมดีเอ็นเอ , 260 nm ดีเอ็นเอสูงสุดต้องแยกแยะจาก230 nm อ่านถ้าอ่านใน 230 nm ก็คล้ายกับที่ 260 นาโนเมตร ไม่สามารถตรวจวัดถูกต้อง สูงกว่า 230 nm ค่าสามารถพบสิ่งปนเปื้อนในตัวอย่าง มี ควรมีหางออกอย่างรวดเร็วจาก 260 nm ลง 320 nm . ด้วยเหตุนี้ , 320 nm จะใช้บ่อยๆวัด ( ดูแก้ไขพื้นหลังพื้นหลัง )