Multiplex osRT-PCR was carried out

Multiplex osRT-PCR was carried out using the One-Step RT-PCR Kit (QIAGEN, Valencia, CA) in the volume of 50 _l in a 0.2 ml microtest tube.Briefly, 1 _l of viral RNA (10−2 dilution) was added to a tube with reaction mixture containing all three pairs of primers (Table 1) at the final concentrations of 0.4 _M for each primer. PCR was performed using a 9700 GeneAmp® PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA) at the following thermal cycling conditions: 30 min at 50 ◦C, 15 min at 95 ◦C, followed by 40 cycles consisting of 15 s at 94 ◦C, 30 s at 50 ◦C, and 50 s at 72 ◦C, and finally incubated for 10 min at 72 ◦C. 5 _l of the amplified PCR product was analyzed by electrophoresis in 3% agarose gels.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ต่าง ๆ ๅ osRT-PCR ถูกดำเนินโดยใช้ชุด RT-PCR ขั้นตอนเดียว (QIAGEN, Valencia, CA) ในปริมาณ 50 _l ในหลอด microtest 0.2 ml สั้น ๆ _l 1 ของอาร์เอ็นเอไวรัส (10−2 เจือจาง) ถูกเพิ่มเข้าไปหลอด มีส่วนผสมของปฏิกิริยาที่ประกอบด้วยทั้งหมด 3 คู่ไพรเมอร์ (ตารางที่ 1) ที่ความเข้มข้นสุดท้ายของ _M 0.4 สำหรับแต่ละพื้น ทำ PCR ใช้ 9700 GeneAmp ® PCR ระบบ (Biosystems ใช้ ฟอสเตอร์ซิตี้ CA) ที่ความร้อนขี่สภาพ: 30 นาทีที่ 50 ◦C, 15 นาทีที่ 95 ◦C ตามรอบ 40 ประกอบด้วย 15 s ที่ 94 ◦C, 30 s ที่ 50 ◦C และ 50 s ที่ 72 ◦C และในที่สุด incubated ใน 10 นาทีที่ 72 ◦C _l 5 ผลิตภัณฑ์ PCR เอาต์ถูกวิเคราะห์ โดย electrophoresis ใน 3% agarose เจ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Multiplex osRT-PCR ได้ดำเนินการโดยใช้ขั้นตอนเดียว RT-PCR Kit (QIAGEN, วาเลนเซีย, CA) ในปริมาณ 50 _L ใน 0.2 มล. MICROTEST tube.Briefly 1 _L ของอาร์เอ็นเอไวรัส (10-2 เจือจาง) เป็น เพิ่มลงในหลอดที่มีส่วนผสมปฏิกิริยาที่มีทั้งหมดสามคู่ไพรเมอร์ (ตารางที่ 1) ที่ความเข้มข้นสุดท้ายของ 0.4 _M สำหรับแต่ละไพรเมอร์ PCR ได้รับการดำเนินการโดยใช้วิธี PCR 9700 GeneAmp®ระบบ (Applied Biosystems, ฟอสเตอร์ซิตี, แคลิฟอร์เนีย) ที่ต่อไปนี้เงื่อนไขความร้อน: 30 นาทีที่ 50 ◦C, 15 นาทีที่ 95 ◦Cตามด้วย 40 รอบซึ่งประกอบด้วย 15 วินาทีที่ 94 ◦C, 30 วินาทีที่ 50 ◦Cและ 50 ที่ 72 ◦Cและบ่มในที่สุดก็เป็นเวลา 10 นาทีที่ 72 ◦C 5 _L ของผลิตภัณฑ์ PCR ขยายได้รับการวิเคราะห์โดย electrophoresis ใน 3% agarose เจล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

osrt multiplex PCR คือการใช้หนึ่งในขั้นตอนที่ 4 ชุด ( เพิ่ม , Valencia , CA ) ในปริมาตร 50 _l ใน 0.2 มล. microtest หลอด สั้น 1 _l ของไวรัส RNA ( 10 − 2 ( ) คือการเพิ่มท่อกับปฏิกิริยาของส่วนผสมที่มีทั้งหมด 3 คู่ไพรเมอร์ ( ตารางที่ 1 ) ส่วนสุดท้ายของแต่ละช่วง _m รองพื้น โดยการใช้ 9700 geneamp ® ( Applied Biosystems ) , ระบบฟอสเตอร์ ซิตี้ , แคลิฟอร์เนีย ) ที่เงื่อนไขการขี่จักรยานการระบายความร้อนต่อไปนี้ : 30 นาทีที่ 50 ◦ C , 15 นาทีที่ 95 ◦ C ตามด้วย 40 รอบประกอบด้วย 15 s ที่ 94 ◦ C 30 เป็น 50 ◦ C , และ 50 s 72 ◦ C และในที่สุดบ่มเป็นเวลา 10 นาทีที่ 72 ◦ C 5 _l ของแถบดีเอ็นเอผลิตภัณฑ์โดยใช้ electrophoresis 3 % เจลโรส .