Radical scavenging activity of the seven extracts
was measured using the stable radical DPPH. The
procedure followed was according to Brand-Williams,
Cuvelier, and Berset (1995) with some variations.
For each extract, different concentrations were tested.
At least 5 dilutions of each extract were prepared in
methanol using a 10 ml volumetric flask (methanol
for the control). Concentrations ranged from 48 to
1.51 mg/ml for less active extracts and from 10 to
0.33 mg/ml for more active ones. An aliquot of methanol
(0.1 ml) solution containing different concentrations
of orange peel extracts was added to 3.9 ml of
DPPH (104 M). Absorbance was measured at 515
nm until the reaction reached a plateau (each measurement
repeated twice). After preliminary experiments,
the plateau was fixed at 4 h for all the extracts due
to the slow kinetics of certain extracts. The absorbance
of the DPPH solution, was measured daily. The
DPPH concentration in the reaction medium was calculated
from the following calibration curve, determined
by linear regression:
Að515 nmÞ ¼ 26:501½DPPHT 0:0244;
where [DPPH]T as mg/ml and r2 = 0.9992.
The percentage of remaining DPPH was calculated as
follows:
% DPPHREM ¼ ½DPPHT =½DPPHT ¼ 0:
The percentage of the % remaining DPPH against
mg dry extract/mg DPPH was plotted to obtain the
amount of antioxidant necessary to decrease the initial
DPPH concentration by 50% ( EC50), using the exponential
model: ln[% DPPH rem] = b[mg antioxidant/
mg DPPH] + a, where b is the slope and a is the intercept.
For each of the extracts, the Antiradical Efficiency,
1/EC50was calculated. Values were also obtained for the
three standards.
2.8. Hydroxyl radical scavenging activity
Co (II)/EDTA-induced luminol chemiluminescence
measurements were carried out on a model 6200 Fluorimeter,
JENWAY (Jenway Gransmore Green Felsted
Dunmow Essex CM6 3 LB), keeping the lamp off and
using only the photo multiplier of the apparatus. The
procedure used is the one described by Parejo, Codina,
Petrakis, and Kefalas (2000) with some variations.
1 ml boric acid buffer solution (0.05 M, adjusted to
pH 9 with NaOH 1 M) containing 1 mg/ml EDTA
and 0.2 mg/ml CoCl2 Æ 6H2O was vortexed for 15 s with
100 ll of luminol solution (5.6 · 104 M) in boric acid
(0.05 M, adjusted to pH 9 with 1 M NaOH). Then, 25
ll of H2O2 aqueous solution (5.4 · 10 3 M) were added
and the mixture was vortexed again for 30 s and fast taken
into a glass cuvette. The CL intensity (I0) was recorded
when the plateau was reached (the lifetime of
the plateau is 30 s). Immediately afterwards, 25 ll of
the sample solution were added with a Pasteur pipette
for thorough mixing and the instantaneous decrease of
the plateau was recorded (I) (each measurement repeated
three times).
The instantaneous reduction in luminol intensity elicited
by the addition of the sample extract was symbolized
as I. The light intensity in the absence of the
sample was symbolized as I0.
The ratio I0/I was plotted against lg dry extract/ml
and a linear regression was established I0/I = a[lg dry
extract/ml] + b, where a is the slope and b is the intercept,
in order to calculate the IC50, which is the amount
of sample necessary to decrease by 50% the initial CL
intensity. Again, the Antiradical Efficiency was calculated
which is the 1/IC50.
Comparison was made with the three standards,
which have already been mentioned in the DPPH test.
2.9. Statistical analysis
Values shown in tables and graphs was the mean of at
least two determinations ± SD. Discrepancies among
determinations of each sample was tested with the
Radical scavenging activity of the seven extracts
was measured using the stable radical DPPH. The
procedure followed was according to Brand-Williams,
Cuvelier, and Berset (1995) with some variations.
For each extract, different concentrations were tested.
At least 5 dilutions of each extract were prepared in
methanol using a 10 ml volumetric flask (methanol
for the control). Concentrations ranged from 48 to
1.51 mg/ml for less active extracts and from 10 to
0.33 mg/ml for more active ones. An aliquot of methanol
(0.1 ml) solution containing different concentrations
of orange peel extracts was added to 3.9 ml of
DPPH (104 M). Absorbance was measured at 515
nm until the reaction reached a plateau (each measurement
repeated twice). After preliminary experiments,
the plateau was fixed at 4 h for all the extracts due
to the slow kinetics of certain extracts. The absorbance
of the DPPH solution, was measured daily. The
DPPH concentration in the reaction medium was calculated
from the following calibration curve, determined
by linear regression:
Að515 nmÞ ¼ 26:501½DPPHT 0:0244;
where [DPPH]T as mg/ml and r2 = 0.9992.
The percentage of remaining DPPH was calculated as
follows:
% DPPHREM ¼ ½DPPHT =½DPPHT ¼ 0:
The percentage of the % remaining DPPH against
mg dry extract/mg DPPH was plotted to obtain the
amount of antioxidant necessary to decrease the initial
DPPH concentration by 50% ( EC50), using the exponential
model: ln[% DPPH rem] = b[mg antioxidant/
mg DPPH] + a, where b is the slope and a is the intercept.
For each of the extracts, the Antiradical Efficiency,
1/EC50was calculated. Values were also obtained for the
three standards.
2.8. Hydroxyl radical scavenging activity
Co (II)/EDTA-induced luminol chemiluminescence
measurements were carried out on a model 6200 Fluorimeter,
JENWAY (Jenway Gransmore Green Felsted
Dunmow Essex CM6 3 LB), keeping the lamp off and
using only the photo multiplier of the apparatus. The
procedure used is the one described by Parejo, Codina,
Petrakis, and Kefalas (2000) with some variations.
1 ml boric acid buffer solution (0.05 M, adjusted to
pH 9 with NaOH 1 M) containing 1 mg/ml EDTA
and 0.2 mg/ml CoCl2 Æ 6H2O was vortexed for 15 s with
100 ll of luminol solution (5.6 · 104 M) in boric acid
(0.05 M, adjusted to pH 9 with 1 M NaOH). Then, 25
ll of H2O2 aqueous solution (5.4 · 10 3 M) were added
and the mixture was vortexed again for 30 s and fast taken
into a glass cuvette. The CL intensity (I0) was recorded
when the plateau was reached (the lifetime of
the plateau is 30 s). Immediately afterwards, 25 ll of
the sample solution were added with a Pasteur pipette
for thorough mixing and the instantaneous decrease of
the plateau was recorded (I) (each measurement repeated
three times).
The instantaneous reduction in luminol intensity elicited
by the addition of the sample extract was symbolized
as I. The light intensity in the absence of the
sample was symbolized as I0.
The ratio I0/I was plotted against lg dry extract/ml
and a linear regression was established I0/I = a[lg dry
extract/ml] + b, where a is the slope and b is the intercept,
in order to calculate the IC50, which is the amount
of sample necessary to decrease by 50% the initial CL
intensity. Again, the Antiradical Efficiency was calculated
which is the 1/IC50.
Comparison was made with the three standards,
which have already been mentioned in the DPPH test.
2.9. Statistical analysis
Values shown in tables and graphs was the mean of at
least two determinations ± SD. Discrepancies among
determinations of each sample was tested with the
การแปล กรุณารอสักครู่..

เป็นตัวเร่งปฏิกิริยากิจกรรมของเจ็ดแยก
การวัดเสถียรภาพ dpph หัวรุนแรง
ขั้นตอนตามมีตามยี่ห้อ Williams
คว เลอร์ และ berset ( 1995 ) ด้วยรูปแบบบาง .
สำหรับแต่ละสารสกัดความเข้มข้นต่าง ๆทดสอบ .
อย่างน้อย 5 วิธีการของแต่ละสารสกัดเมทานอลโดยใช้เตรียม
10 ปริมาตรขวดมิลลิลิตร ( เมทานอล
เพื่อควบคุม )ความเข้มข้นอยู่ระหว่าง 48
30 mg / ml สารสกัดที่ใช้งานน้อยและ 10
0.33 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรสำหรับการใช้งานเพิ่มเติมที่ เป็นส่วนลงตัวของเมทานอล
( 0.1 ml ) สารละลายที่มีความเข้มข้นแตกต่างกันของสารสกัดจากเปลือกส้มเพิ่ม
dpph 3.9 กรัม ( 10 4 M ) วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 515
nm จนกระทั่งปฏิกิริยาถึงที่ราบสูง ( แต่ละวัด
ซ้ำครั้ง ) หลังจากการทดลองเบื้องต้น
ที่ราบสูงหรือที่ 4 ชั่วโมง สารสกัดทั้งหมดเนื่องจาก
กับจลนศาสตร์ช้า จากหนึ่ง น
ของ dpph โซลูชั่น , วัดทุกวัน
dpph ความเข้มข้นในปฏิกิริยาปานกลางมีค่า
จากรูปโค้งตามที่กำหนดโดยการถดถอยเชิงเส้น :
เป็นð 515 nm Þ¼ 26:501 ½ dpph T 0:0244 ;
ที่ไหน [ dpph ] t เป็น mg / ml และ R2 =
0.9992 .เปอร์เซ็นต์ที่เหลือ dpph คำนวณเป็นดังนี้ :
%
dpphrem ¼½ dpph T = T ½ dpph ¼ 0 :
% ที่เหลือร้อยละ dpph กับ
มิลลิกรัมบริการสกัด / มก. dpph กำลังวางแผนที่จะได้รับปริมาณของสารต้านอนุมูลอิสระที่จำเป็นเพื่อลด
dpph เริ่มต้น ความเข้มข้น 50% ( ec50 ) โดยใช้สมการ exponential
: [ % dpph REM ] = b [ mg สารต้านอนุมูลอิสระ /
มิลลิกรัม dpph ] ,ที่ B คือ ความชัน และเป็นการสกัดกั้น
ทั้งสารสกัดประสิทธิภาพอนุภาคขนาดเล็กพิเศษ
1 / ec50was , การคำนวณ ค่าก็รับได้
สามมาตรฐาน 2.8 . เอชทีทีพีการกิจกรรม
Co ( 2 ) / EDTA และการวัดนโยบายแรงงาน
ลูมินอล ได้ดำเนินการในรูปแบบ fluorimeter 6200 , jenway
( jenway gransmore สีเขียว felsted
dunmow เอสเซ็กซ์ cm6 3 ปอนด์ )การรักษาไฟปิด และใช้เฉพาะภาพคูณ
ของเครื่อง
ขั้นตอนที่ใช้เป็นหนึ่งที่อธิบายโดย parejo codina
, , petrakis และ kefalas ( 2000 ) ด้วยรูปแบบบาง .
1 มล. กรดสารละลายบัฟเฟอร์ ( 0.05 M ปรับ pH ด้วย NaOH 9
1 M ) มี 1 มก. / มล. และ 0.2 มล. มิลลิกรัม EDTA
cocl2 กู้ 6h2o คือ vortexed สำหรับ 15 กับ
100 จะของสารละลายลูมินอล ( 5.6 ด้วย 10 4 M ) กรดบอริก (
005 M ปรับพีเอช 9 กับ 1 M NaOH ) แล้ว 25
ll ของ H2O2 สารละลาย ( 5.4 ด้วย 10 3 m ) เพิ่ม
และส่วนผสม vortexed อีก 30 และรวดเร็วถ่าย
เป็นคิวเวตต์แก้ว ความเข้มของ CL ( i ) บันทึก
เมื่อมาถึงที่ราบสูง ( อายุ
ที่ราบสูงคือ 30 วินาที ) ทันทีหลังจากนั้น 25 จะ
โซลูชันตัวอย่างเพิ่มด้วย
เปตปาสเตอร์ให้ละเอียดผสมและลดลงทันทีของ
ที่ราบสูงถูกบันทึกไว้ ( ฉัน ) ( แต่ละวัดซ้ำ 3 ครั้ง
) ลดทันทีในลูมินอลความรุนแรงโดยใช้
โดยนอกเหนือจากตัวอย่างแยกเป็นสัญลักษณ์
ฉันความเข้มแสงในการขาดงานของ
ตัวอย่างสัญลักษณ์เป็น i .
อัตราส่วน ได้ / ผมงัดข้อกับ LG บริการสกัด / ml
และการถดถอยเชิงเส้นก่อตั้งขึ้นได้ / ฉัน = [ LG บริการ
สกัด / ml ] B , A คือความลาดชันและ B คือ สกัดกั้น
เพื่อคำนวณ ic50 ซึ่งเป็นปริมาณของตัวอย่างที่จำเป็น
จะลดลง 50% แรก C1
ความเข้ม อีกครั้ง , ประสิทธิภาพอนุภาคขนาดเล็กพิเศษคำนวณ
ซึ่งเป็น 1 / ic50 .
เปรียบเทียบได้กับสามมาตรฐาน
ที่ได้รับการกล่าวถึงใน dpph ทดสอบ .
2.9 . สถิติวิเคราะห์
ค่าแสดงเป็นตารางและกราฟเป็นค่าเฉลี่ยที่
อย่างน้อยสอง ร้อยละ± SD ความแตกต่างระหว่าง
determinations ของแต่ละตัวอย่างที่ทดสอบกับ
การแปล กรุณารอสักครู่..
