Page 172 Vol. 31, 2013, No. 1: 72–8

Page 1
72 Vol. 31, 2013, No. 1: 72–80 Czech J. Food Sci. Investigating the Effect of High Hydrostatic Pressure Processing on Anthocyanins Composition of Mulberry ( Morus moraceae ) Juice Narku Felix ENGMANN, Yong-Kun Ma, Xu YING and Ye QING School of Food and Biological Engineering, Jiangsu University, Zhenjiang, PR China Abstract Engmann NF, Ma Y.-K., Ying X., Qing Y. (2013): Investigating the effect of high hydrostatic pressure processing on anthocyanins composition of mulberry ( Morus moraceae ) juice . Czech J. Food Sci., 31 : 72–80. Anthocyanins are potent natural antioxidants with acclaimed health benefits and are also used as industrial colourants. These functions are based on the types and amounts of anthocyanins present in the food material. We identified and characterised mulberry fruit anthocyanins before and after high hydrostatic pressure (HHP) treatment. Three separate samples were differently treated at 200, 400, and 600 MPa for 20 min, respectively. Anthocyanins were identified and characterised using high-performance liquid chromatography (HPLC), electrospray ionisation mass spectrometry (ESI/ MS), and the literature data. Cyanidin-3- O -glucopyranoside (55.56%) and cyanidin-3- O -coumaroylglucoside (44.44%) were detected in the untreated sample, while two new anthocyanins [pelargonidin-3- O -coumaroylglucoside (0.46%) and delphinidin-3- O -coumaroylglucoside (5.8%)] were identified in the sample treated at 200 MPa for 20 minutes. One new anthocyanin, delphinidin-3- O -coumaroylglucoside (5.38%), was detected in the juice treated at 400 MPa for 20 minutes. At 600 MPa for 20 min, no new anthocyanins were detected. Keywords : mulberry fruit; antioxidants; health benefits; HPLC-ESI-MS Processing foods using high hydrostatic pressure (HHP) has lethal effect on microorganisms, inac- tivates enzymes, and in some cases modification takes place in biomolecules like protein leading to the development of new products (Ahmed et al . 2003; Rodriguez et al . 2004). Because covalent bonds are not destroyed during HHP treatment, organoleptic properties of food are largely pre- served (Cheftel 1992). It has been found that mulberry fruit extract has anti-oxidative, antimi- crobial, and anti-inflammatory properties (Tsai et al . 2005; Sadiq Butt et al . 2008), and exhibits also antioxidant/antiradical properties (Suh et al . 2004). These health benefits have been attributed to anthocyanins reported to be potent antioxidants and also improve visual acuity (Mazza & Minia- ti 1993). Anthocyanins have also been observed to possess antineoplastic, radiation-protective, vasotonic, vasoprotective, anti-inflammatory, and chemo- and hepato-protective activities (Kamei et al. 1998; Smith et al. 2000; Wang et al . 2000). All these properties depend on the type and amount of anthocyanins present (Stintzing et al . 2002; Liu 2003; Matsumoto et al . 2003). Specifically, mulberry anthocyanin extract has been reported to have antimetastasis activity in inhibiting the migration of B16-F1 cells (Huang et al . 2008). Mulberry fruits contain higher amounts of an- thocyanins than other well-known fruits such as elderberry and blackberry (Song et al . 2009). Anthocyanins are known to be affected by factors such as pH, temperature, salts and other chemicals, and possibly pressure (Türker & Erdoğdu 2006). In spite of the increasing commercial use of HHP in processing a variety of food materials, research into its effect on the anthocyanin content of fruit
Page 2
73 Czech J. Food Sci. Vol. 31, 2013, No. 1: 72–80 juice, particularly mulberry fruits, is not extensive. The objective of this study was to identify and characterise mulberry fruit anthocyanins before and after various HHP treatments. MATERIAL AND METHODS Reagents . The reagents used were of analytical or HPLC grade and were purchased from Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. (Shanghai, China). Deionised water was used throughout. Sample preparation . Ripe mulberry fruits were harvested in farms along the Yangtze River basin in the Jiangsu Province of PR China. They were washed with potable water and frozen at –8°C before being used. Sampled frozen fruits were thawed and homogenised using a kitchen blender. Pigment extraction . Anthocyanin pigment ex- traction was done using the method described by Giusti and Wrolstad (1996) with a few modifica- tions. To 10 g of the homogenised mulberry fruit in a beaker, 40 ml acetone (1:4 w/v) was added. The mixture was sonicated whilst being stirred continuously for 10 min before vacuum filtration through a Büchner funnel with No. 1 Whatman filter paper. The residue was washed with 70% acetone. The extract (45 ml) was transferred to a separating funnel and 90 ml of trichloromethane was added, and 10 min was allowed for the phases to separate. The pigmented extract containing an- thocyanins was collected for further purification. Extract purification . The extract was purified as described by Rodriguez-Saona and Wrolstad (2001) using the solid phase extraction method with Sep-Pak C 18 cartridge (Waters Co., Milford, USA) as the stationary phase, and 0.01% HCl in methanol (50 ml), ethyl acetate (50 ml), and 0.01% HCl in deionised water (50 ml) being the mobile phase. Methanol in the extract was evaporated us- ing a rotary vacuum evaporator (Model RE 2000; Biochemical and Instrument Factory, Shanghai, China). Deionised water (5 ml) was used to dis- solve the purified sample and the solution was packaged in a polythene bag. HHP treatment . The HHP equipment (Intel- ligent Super High Pressure Food Processing De- vice, Jiangsu University, China) had an internal diameter of 150 mm and height of 440 mm, with an operational volume of 6.5 liters. Di-octyl se- bacate was used as the pressurizing fluid. The maximum operational pressure of 600 MPa was reached in about 95 s while the depressurisation time was approximately 10 seconds. The pack- aged mulberry juice samples were divided into three separate batches and these were respectively subjected to pressures of 200, 400, and 600 MPa for 20 minutes. The samples were introduced into the high-pressure equipment at a tempera- ture of 20°C and during pressurisation reached a maximum temperature of 25°C due to adiabatic heating. Just after depressurisation, the samples were transferred into an ice water bath, and then stored under refrigeration (4 ± 1°C) overnight before analysis. HPLC-ESI-MS analysis . The treated and un- treated samples were filtered through a 0.45-μm Millipore filter, type HV (Millipore Corp., Bed- ford, USA) before anthocyanin determination using HPLC-DAD (HP Agilent 1100 Series) and ESI-MS Bruker Esquire LC-MS ion trap multiple mass spectrometer (Bremen, Germany) in positive ionisation mode analysing ions from m/z 100 to m/z 1200. The HPLC features and working condi- tions were: DAD detector (G1315A): 200700 nm full scan, quarternary pump system (G1311A), autosampler (G1313A). The column used was Agilent 20RBAX-SB C18 4.6 mm × 250 mm, 5 μm (Agilent, Santa Clara, USA). Solvent A (methanol) and solvent B (3% formic acid in deionised water) were membrane-filtered (0.45 µm) and de-aerated by sonication at 25°C for 40 minutes. The linear gra- dient elution was carried out as follows; 015 min A – increased from 5% to 25%; 1525 min A – in- creased from 25% to 32 %; 2535 min A-increased from 32% to 60%; 3545 min A – increased from 60% to 80%; 4555 min A – increased from 80% to Figure 1. HPLC-DAD recorded at 520 nm for untreated mulberry juice R e l a t i v e a b u n d a n c e Time (min)
Page 3
74 Vol. 31, 2013, No. 1: 72–80 Czech J. Food Sci. 100%. The flow rate was 0.9 ml/min and injection volume was 5 μl. The column temperature was 25°C. The conditions of ESI-MS were as follows: ESI source voltage 4.5 kV, capillary voltage 30 V, sheath gas flow rate 30 arbitrary units, auxiliary gas flow rate 7 arbitrary units, tube lens voltage, 120 V, and capillary temperature 300°C. The system was equipped with Xcalibur 2.0.7 SP1 software (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA), which was used to create and edit the mass spectrometry data for the precursor and frag- ment ions, as well as the area under the individual peaks, used to determine the relative amounts of anthocyanins. RESULTS AND DISCUSSION Control sample Anthocyanins were tentatively identified by matching their molecular ions (M+H + ), obtained on fragmentation by LC–ESI– MS and LC-MS/MS methods, with the theoretical molecular weights from the literature data (Maatta-Riihinen et al . 2004). The analyses utilised the positive ion mode ( m/z M+H + ) for the detection of anthocyanins. The peaks in the HPLC–DAD chromatogram were monitored at 280 and 520 nm, which are the ab- sorbance wavelengths typical of anthocyanins. For the control sample, two chromatographic peaks (Figure 1) were obtained at 520 nm, indicating the presence of two main anthocyanins. Figure 2. Positive ion ESI mass spectra of anthocyanin detected in control (Peak 1) (A) (B) (C) (D) Figure 3. HPLC-DAD HPLC-DAD recorded at 520 nm for mulberry juice treated at 200 MPa for 20 minutes R e l a t i v e a b u n d a n c e m/z m/z R e l a t i v e a b u n d a n c e R e l a t i v e a b u n d a n c e R e l a t i v e a b u n d a n c e R e l a t i v e a b u n d a n c e Time (min)
Page 4
75 Czech J. Food Sci. Vol. 31, 2013, No. 1: 72–80 Figure 4. Positive ion ESI mass spectra of anthocyanin A and B – Peak 1, C and D – Peak 2, E and E – Peak 3, G and H – Peak 4 detected in sample treated at 200 MPa for 20 minutes (A) (B) (C) (D) (E) (F) (G) (H) m/z m/z R e l a t i v e a b u n d a n c e R e l a t i v e a b u n d a n c e R e l a t i v e a b u n d a n c e R e l a t i v e a b u n d a n c e R e l a t i v e a b u n d a n c e R e l a t i v e a b u n d a n c e R e l a t i v e a b u n d a n c e R e l a t i v e a b u n d a n c e
Page 5
76 Vol. 31, 2013, No. 1: 72–80 Czech J. Food Sci. Positive ion ESI mass spectra of peak 1 in the chromatograms (Figure 1) showed a molec

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

หน้า 1
72 ปี 31, 2013 หมายเลข 1: 72–80 เช็ก J. Sci. อาหารตรวจสอบผลของสูงหยุดนิ่งความดันประมวลผลบน Anthocyanins ส่วนประกอบของใบหม่อน (Morus moraceae) น้ำ Narku เฟลิกซ์ ENGMANN, Ma Yong-Kun, Xu YING และเยชิงโรงเรียนของอาหาร และ วิศวกรรมชีวภาพ มหาวิทยาลัยของมณฑลเจียงซู เจียง PR จีนนามธรรม Engmann NF, Ma Y. คุณ x. อัพ Ying, Y. ชิง (2013): ตรวจสอบผลของความดันสูงที่ประมวลผลบน anthocyanins ส่วนประกอบของใบหม่อน (Morus moraceae) น้ำหยุดนิ่ง อาหารการกิน J. Sci., 31: 72–80 Anthocyanins เป็นสารต้านอนุมูลอิสระธรรมชาติมีศักยภาพกับรางวัลสุขภาพ และยังใช้เป็น colourants อุตสาหกรรม ฟังก์ชันเหล่านี้จะขึ้นอยู่กับชนิดและจำนวนของ anthocyanins ในวัสดุอาหาร เราระบุ และประสบการ์ anthocyanins ผลไม้สาก่อน และ หลังการรักษาสูงความดัน (HHP) ตัวอย่างแยกต่างหากสามต่างรับการดูแลที่ 200, 400 และ 600 แรงสำหรับ 20 นาที ตามลำดับ Anthocyanins ระบุ และดำเนินการใช้ประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC), วิธีพ่นละอองไฟฟ้า ionisation โตรเมทรี (ESI / MS), และข้อมูลเอกสารประกอบการ Cyanidin 3 O - glucopyranoside (55.56%) และ cyanidin 3 O - coumaroylglucoside (คิดเป็น 44.44%) ตรวจพบในตัวอย่างไม่ถูกรักษา ในขณะที่สองใหม่ anthocyanins [pelargonidin-3-O - coumaroylglucoside (0.46%) และ delphinidin-3-O - coumaroylglucoside (5.8%)] ได้ระบุในตัวอย่างที่ถือว่าที่ 200 แรง 20 นาที หนึ่งใหม่มีโฟเลทสูง delphinidin-3-O - coumaroylglucoside (5.38%), พบในน้ำที่รับการรักษาที่ 400 แรง 20 นาที ที่แรง 600 สำหรับ 20 นาที anthocyanins ใหม่ไม่พบการ คำสำคัญ: ดอกไม้ผลไม้ สารต้านอนุมูลอิสระ สุขภาพ อาหารแปรรูป HPLC ESI MS ใช้สูงความดัน (HHP) มีราคาผลกระทบต่อจุลินทรีย์ เอนไซม์ inac-tivates ยุทธภัณฑ์ และในบางกรณี การแก้ไขเกิดขึ้นในชื่อโมเลกุลชีวภาพเช่นโปรตีนที่นำไปสู่การพัฒนาผลิตภัณฑ์ใหม่ (Ahmed et al. 2003 ร็อดริเกซ et al 2004) เนื่องจากพันธบัตรโคเวเลนต์จะไม่ถูกทำลายในระหว่างรักษา HHP, organoleptic คุณสมบัติของอาหารเป็นส่วนใหญ่ก่อนเสิร์ฟ (Cheftel 1992) มันพบว่า มีสารสกัดจากผลไม้ต่อต้าน oxidative, antimi-crobial และคุณสมบัติแก้อักเสบ (Tsai et al. 2005 Sadiq ก้น et al 2008), และจัดแสดงยังคุณสมบัติต้านอนุมูล อิสระ/antiradical (Suh et al. 2004) มีการบันทึกสุขภาพเหล่านี้ anthocyanins เป็นสารต้านอนุมูลอิสระที่มีศักยภาพ และยัง ปรับปรุงร่างรายงาน (Mazza & Minia-ตี้ 1993) Anthocyanins มียังได้สังเกตมั่ง antineoplastic ป้องกันรังสี vasotonic, vasoprotective ต้านการอักเสบ และกิจกรรม chemo - และ hepato-ป้องกัน (Kamei et al. 1998 Smith et al. 2000 Wang et al 2000) ด้วยคุณสมบัติทั้งหมดเหล่านี้ขึ้นอยู่กับชนิดและจำนวนมี anthocyanins (Stintzing et al. 2002 หลิว 2003 มัตสึโมโตะ et al 2003) โดยเฉพาะ สารสกัดจากใบหม่อนมีโฟเลทสูงมีรายงานว่า มีกิจกรรม antimetastasis ใน inhibiting ย้ายเซลล์ B16-F1 (หวง et al. 2008) ผลไม้ดอกไม้ประกอบด้วยการ - thocyanins เงินสูงกว่าผลไม้อื่น ๆ รู้จัก elderberry และเคส (เพลง et al. 2009) ทราบว่า anthocyanins สามารถได้รับผลกระทบจากปัจจัยต่าง ๆ เช่นค่า pH อุณหภูมิ เกลือ และสาร เคมีอื่น ๆ และอาจเป็นความดัน (Türker & Erdoğdu 2006) แม้ว่าการเพิ่มขึ้นเชิงพาณิชย์ใช้ HHP ในการประมวลผลต่าง ๆ การผลิตอาหาร วิจัยผลของเนื้อหามีโฟเลทสูงผลไม้
2 หน้า
73 เช็ก J. Sci. อาหาร 31, 2013 หมายเลข 1: น้ำ 72–80 โดยเฉพาะอย่างยิ่งจากผลไม้ ไม่กว้างขวาง วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้เพื่อ ระบุ และ characterise สาผลไม้ anthocyanins ก่อน และ หลังบำบัด HHP ต่าง ๆ ได้ วัสดุและวิธี Reagents Reagents ที่ใช้มีการวิเคราะห์ หรือเกรด HPLC และซื้อจาก Sinopharm เคมีรีเอเจนต์ Co., Ltd. (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) น้ำ deionised ถูกใช้ตลอด การเตรียมสารตัวอย่าง ผลไม้สุกดอกไม้ถูกเก็บเกี่ยวผลผลิตในฟาร์มตามลุ่มแม่น้ำแยงซีในมณฑลเจียงซูจังหวัดของ PR จีน พวกเขาถูกล้างน้ำใช้ และหยุดก่อนที่จะใช้ –8 ° C ตัวอย่างผลไม้แช่แข็งได้ thawed และ homogenised ใช้กับเครื่องปั่น ผงสกัด มีโฟเลทสูงรงควัตถุอดีตลากถูกทำโดยใช้วิธีอธิบาย โดย Giusti และ Wrolstad (1996) กับกี่ modifica-tions ไป 10 กรัมผลไม้สา homogenised ในบีกเกอร์ อะซิโตน 40 ml (1:4 w/v) ถูกเพิ่ม ส่วนผสมที่ sonicated ขณะกำลังกวนอย่างต่อเนื่องสำหรับ 10 นาทีก่อนเครื่องกรองสูญญากาศผ่านปล่อง Büchner ด้วยกระดาษกรอง Whatman 1 หมายเลข สารตกค้างถูกล้าง ด้วยอะซิโตน 70% สารสกัด (45 มล.) ถูกโอนย้ายไปที่กรวยแยก และเพิ่ม 90 ml ของ trichloromethane และ 10 นาทีได้รับการอนุญาตสำหรับขั้นตอนในการแยก สารสกัดมีสีที่ thocyanins ที่ประกอบด้วยถูกรวบรวมสำหรับฟอกเพิ่มเติม แยกทำให้บริสุทธิ์ การดึงข้อมูลที่บริสุทธิ์ตามที่อธิบายไว้ โดย Saona ร็อดริเกซและ Wrolstad (2001) ด้วยวิธีการแยกเฟสของแข็งตลับ 18 C ปาก Sep (จำกัดน้ำ ลฟอร์ด สหรัฐอเมริกา) เป็นระยะเครื่องเขียน และ 0.01% HCl ในเมทานอล (50 ml), เอทิล acetate (50 มล.), และ 0.01% HCl deionised น้ำ (50 มล) เป็นเฟสเคลื่อนที่ เมทานอลในการดึงข้อมูลหายไปเรา-ไอเอ็นจีที่ evaporator สิวโรตารี่ (RE รุ่น 2000 ชีวเคมี และโรงงาน เซี่ยงไฮ้ จีนตรา) น้ำ deionised (5 ml) ใช้ dis-แก้ตัวอย่างบริสุทธิ์ และแก้ปัญหาถูกบรรจุในถุง polythene HHP รักษา อุปกรณ์ HHP (Intel ligent ซุปเปอร์สูงดันอาหารแปรรูปเด - รอง มณฑลเจียงซูมหาวิทยาลัย จีน) มีเส้นผ่าศูนย์กลางภายใน 150 มม.และความสูงของ 440 มม. มีปริมาณการดำเนินงานของ 6.5 ลิตร ดิ octyl se-bacate ใช้เป็นน้ำมัน pressurizing ความดันทำงานสูงสุดของ 600 แล้วในประมาณ 95 แรง s ในขณะเวลา depressurisation ประมาณ 10 วินาที ตัวอย่างน้ำหม่อน aged ชุดถูกแบ่งออกเป็นสามแยกชุด และเหล่านี้ตามลำดับถูกต้องเพื่อความดัน 200, 400 และ 600 แรง 20 นาที ตัวอย่างถูกนำเข้าสู่อุปกรณ์แรงดันสูงที่อุณหภูมิ-ture 20 องศาเซลเซียส และในระหว่าง pressurisation ถึงอุณหภูมิสูงสุด 25 องศาเซลเซียสเนื่องจากความร้อนการอะเดียแบติก หลัง depressurisation ตัวอย่างได้เป็นน้ำเป็นน้ำแข็ง และเก็บใต้เครื่องทำความเย็น (4 ± 1° C) ค้างคืนก่อนที่จะวิเคราะห์ การวิเคราะห์ HPLC ESI MS การบำบัด และสหประชาชาติ-บำบัดอย่างถูกกรองผ่านตัวมาก 0.45 μm พิมพ์ HV (มาก Corp. เตียงฟอร์ด สหรัฐอเมริกา) ก่อนที่จะมีโฟเลทสูง กำหนดโดยใช้ HPLC-พ่อ (HP Agilent 1100 Series) และไอออน ESI MS Bruker โฮ LC-MS ดักสเปกโตรมิเตอร์มวลหลาย (เบรเมน เยอรมนี) ใน ionisation บวกโหมดวิเคราะห์ประจุจาก m/z 100 ถึง m z 1200 คุณลักษณะ HPLC และเบาะ ๆ ว่าพวกเขาทำงาน-tions: จับพ่อ (G1315A): 200700 nm สมบูรณ์ ระบบปั๊ม quarternary (G1311A), autosampler (G1313A) คอลัมน์ที่ใช้ถูก Agilent 20RBAX-SB C18 4.6 มม. × 250 มม. 5 μm (Agilent ซานตาคลารา สหรัฐอเมริกา) ตัวทำละลาย (เม) และตัวทำละลาย B (3% กรดในน้ำ deionised) มีกรองเมมเบรน (0.45 µm) และยกเลิกอากาศ โดย sonication ที่ 25 ° C 40 นาที Elution gra dient เส้นทำออกเป็นดังนี้ A-015 นาทีเพิ่มขึ้นจาก 5% เป็น 25% 1525 นาทีเป็นใน - ผ้าเป็นรอยย่นจาก 25% เป็น 32% 2535 min A-เพิ่มขึ้นจาก 32% เป็น 60% 3545 min A – เพิ่มขึ้นจาก 60% 80% A-4555 นาทีเพิ่มขึ้นจาก 80% 1 รูป HPLC พ่อบันทึกที่ 520 nm สำหรับหม่อนไม่ถูกรักษาน้ำ R e l t ผม v e b u n d n c e เวลา (นาที)
3 หน้า
74 ปี 31, 2013 หมายเลข 1: 72–80 เช็ก J. Sci. อาหาร 100% อัตราการไหลได้ 0.9 ml/min และปริมาตรการฉีด 5 μl คอลัมน์อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส เงื่อนไขของ ESI MS มีดังนี้: ESI แหล่งแรงดัน 4.5 kV แรงเส้นเลือดฝอย 30 V, sheath แก๊สไหลอัตรา 30 กำหนดหน่วย แก๊สเสริมกระแสอัตรา 7 กำหนด หน่วย แรงดันท่อเลนส์ 120 V และเส้นเลือดฝอยอุณหภูมิ 300 องศาเซลเซียส ระบบเพียบพร้อมไป ด้วยซอฟต์แวร์ SP1 Xcalibur 2.0.7 (เทอร์โม Fisher วิทยาศาสตร์ Inc., Waltham สหรัฐอเมริกา), ซึ่งถูกใช้เพื่อสร้าง และแก้ไขข้อมูลรเมทสำหรับสารตั้งต้น และประจุ frag-ติดขัด เช่นเดียว กับพื้นที่ภายใต้แต่ละแห่ง ใช้ในการกำหนดจำนวนสัมพัทธ์ของ anthocyanins ผลการสนทนาและควบคุมอย่าง Anthocyanins อย่างระบุ โดยการจับคู่กันของโมเลกุล (M H), ได้รับในการกระจายตัวของด้วยวิธี LC-MS/MS, LC–ESI– MS มีน้ำหนักโมเลกุลทฤษฎีจากข้อมูลเอกสารประกอบการ (Maatta-Riihinen et al. 2004) วิเคราะห์การใช้โหมดไอออนบวก (m/z M H) ตรวจ anthocyanins แห่งใน HPLC–DAD chromatogram ถูกตรวจสอบที่ 280 และ 520 nm ซึ่งมีความยาวคลื่น ab sorbance ของ anthocyanins สำหรับตัวอย่างการควบคุม พีคส์ chromatographic สอง (รูปที่ 1) ได้รับที่ 520 nm บ่งชี้สถานะของ anthocyanins สองหลัก รูปที่ 2 แรมสเป็คตรามีโฟเลทสูงพบในควบคุมมวลไอออนบวก ESI (Peak รูปที่ 1) (A) (B) (C) (D) 3 HPLC HPLC พ่อพ่อที่บันทึกไว้ที่ 520 nm สำหรับน้ำใบหม่อนรักษาที่แรง 200 สำหรับ 20 นาที R e l t ฉัน v e b u n d n เป็น c e m/z m/z R e l t ผม v e b u n d l e n c e R ต.ฉัน e v b u n d l e n c e R ต.ฉันอีวีเป็น b u n d l e n c e R ต.ฉัน e v b u n d n c e เวลา (นาที)
4 หน้า
75 เช็ก J. อาหาร Sci. 31, 2013 หมายเลข 1: 72–80 รูปที่ 4 ไอออนบวก ESI มวลแรมสเป็คตรามีโฟเลทสูง A และ B – สูงสุด 1, C และ D – 2 ค E และ E – สูงสุด 3 G และ H – ค 4 ตรวจพบในตัวอย่างถือว่าที่แรง 200 สำหรับ 20 นาที (A) (B) (C) (D) (E) (F) (G) (H) m/z m z R e l t ผม v e b u n d l e n c e R ต.ฉัน e v b u n d l e n c e R ต.ฉัน e v b u n d e n c e R l t เป็นฉัน e v b u n d l e n c e R ต.ฉัน e v b u n d l e n c e R ต.ฉัน e v b u n d l e n c e R ต.ฉัน v e b u n d l e n c e R ต.ฉัน v e เป็น b u n d เป็น n c e
5 หน้า
76 ปี 31, 2013 หมายเลข 1: 72–80 เช็ก J. อาหาร Sci. บวกไอออน ESI มวลแรมสเป็คตราสูงสุด 1 ใน chromatograms (รูปที่ 1) แสดงให้เห็นว่าเป็น molec

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

หน้า 1
ฉบับที่ 72 31 ต.ค. 2013, ฉบับที่ 1: 72-80 เช็กเจอาหารวิทย์ ตรวจสอบผลกระทบของการประมวลผลสูงหยุดนิ่งแรงกดดันต่อองค์ประกอบของ Anthocyanins หม่อน (Morus Moraceae) น้ำผลไม้ Narku เฟลิกซ์ Engmann ยง-Kun แม่เสี่ยวยิ่งและเจ้า QING โรงเรียนของอาหารและวิศวกรรมชีวภาพ, เจียงซูมหาวิทยาลัย Zhenjiang, PR จีนบทคัดย่อ Engmann NF, Ma Y.-K. , Ying เอ็กซ์, ชิงวาย (2013): ตรวจสอบผลกระทบของการประมวลผลความดันสูงใน anthocyanins องค์ประกอบของใบหม่อน (Morus Moraceae) น้ำผลไม้ เช็กเจอาหารวิทย์, 31:. 72-80 anthocyanins มีสารต้านอนุมูลอิสระธรรมชาติที่มีศักยภาพที่มีประโยชน์ต่อสุขภาพสะเทือนใจและยังใช้เป็นแต่งสีในอุตสาหกรรม ฟังก์ชั่นเหล่านี้จะขึ้นอยู่กับชนิดและปริมาณของ anthocyanins ปัจจุบันในวัสดุอาหาร เราระบุและลักษณะ anthocyanins ผลไม้หม่อนก่อนและหลังความดันสูง (HHP) การรักษา สามแยกกลุ่มตัวอย่างได้รับการรักษาที่แตกต่างกันที่ 200, 400, และ 600 MPa เวลา 20 นาทีตามลำดับ anthocyanins ถูกระบุและลักษณะการใช้ของเหลว chromatography ที่มีประสิทธิภาพสูง (HPLC) Ionisation electrospray มวลสาร (ESI / MS) และข้อมูลจากเอกสาร cyanidin-3-O-glucopyranoside (55.56%) และ cyanidin-3-O-coumaroylglucoside (44.44%) มีการตรวจพบในตัวอย่างได้รับการรักษาในขณะที่สอง anthocyanins ใหม่ [pelargonidin-3-O-coumaroylglucoside (0.46%) และ delphinidin-3 - O-coumaroylglucoside (5.8%)] ถูกระบุในกลุ่มตัวอย่างได้รับการปฏิบัติที่ 200 MPa เป็นเวลา 20 นาที หนึ่ง anthocyanin ใหม่ delphinidin-3-O-coumaroylglucoside (5.38%) ถูกตรวจพบในน้ำผลไม้ได้รับการปฏิบัติที่ 400 MPa เป็นเวลา 20 นาที ที่ 600 MPa เวลา 20 นาทีไม่ anthocyanins ใหม่ที่ถูกตรวจพบ คำสำคัญ: ผลไม้หม่อน; สารต้านอนุมูลอิสระ; ประโยชน์ต่อสุขภาพ; อาหาร HPLC-ESI-MS การประมวลผลโดยใช้ความดันสูง (HHP) มีผลกระทบร้ายแรงกับจุลินทรีย์เอนไซม์ INAC-tivates, และในบางกรณีการเปลี่ยนแปลงจะเกิดขึ้นในสารชีวโมเลกุลเช่นโปรตีนที่นำไปสู่การพัฒนา ผลิตภัณฑ์ใหม่ (อาเหม็ดเอตแอล 2003.. Rodriguez et al, 2004) เพราะพันธะโควาเลนจะไม่ได้ถูกทำลายในระหว่างการรักษา HHP คุณสมบัติทางประสาทสัมผัสของอาหารเป็นส่วนใหญ่ก่อนเสิร์ฟ (Cheftel 1992) จะได้รับพบว่าสารสกัดจากผลไม้หม่อนมีการป้องกันการออกซิเดชัน, คุณสมบัติ Antimi-crobial และต้านการอักเสบ (Tsai et al, 2005.. Sadiq ก้น et al, 2008). นอกจากนี้ยังมีการจัดแสดงนิทรรศการและคุณสมบัติต้านอนุมูลอิสระ / antiradical (พ้มและอัล 2004 ) ประโยชน์ต่อสุขภาพเหล่านี้ได้รับการบันทึกให้ anthocyanins รายงานว่าสารต้านอนุมูลอิสระที่มีศักยภาพและยังปรับปรุงการมองเห็น (Mazza และ Minia ti-1993) anthocyanins ยังได้รับการตั้งข้อสังเกตว่ามีเนื้องอกตรงข้าม, รังสีป้องกัน vasotonic, vasoprotective ต้านการอักเสบและคีโมและกิจกรรมตับป้องกัน (เมตแอล 1998;.. สมิ ธ และคณะ 2000;. วัง et al, 2000) คุณสมบัติทั้งหมดนี้ขึ้นอยู่กับชนิดและปริมาณของ anthocyanins ปัจจุบัน (Stintzing et al, 2002;. หลิว 2003. Matsumoto et al, 2003) โดยเฉพาะสารสกัดหม่อน anthocyanin ได้รับรายงานว่าจะมีกิจกรรมใน antimetastasis ยับยั้งการย้ายถิ่นของเซลล์ B16-F1 (Huang et al,. 2008) ผลไม้หม่อนมีปริมาณที่สูงขึ้นของ thocyanins กว่าผลไม้ที่รู้จักกันดีอื่น ๆ เช่นต้นอูนและผลไม้ชนิดหนึ่ง (เพลงและคณะ. 2009) anthocyanins เป็นที่รู้จักกันได้รับผลกระทบจากปัจจัยต่างๆเช่นค่า pH, อุณหภูมิ, เกลือและสารเคมีอื่น ๆ และอาจจะเป็นความดัน (TürkerและErdoğdu 2006) ทั้งๆที่มีการเพิ่มการใช้ในเชิงพาณิชย์ของ HHP ในการประมวลผลความหลากหลายของวัสดุอาหารการวิจัยมีผลบังคับใช้ในวันที่เนื้อหา anthocyanin ของผลไม้
หน้า 2
73 เช็กเจอาหารวิทย์ Vol 31 ต.ค. 2013, ฉบับที่ 1: 72-80 น้ำผลไม้โดยเฉพาะอย่างยิ่งผลไม้หม่อนไม่กว้างขวาง วัตถุประสงค์ของการศึกษาครั้งนี้มีการระบุและลักษณะ anthocyanins ผลไม้หม่อนก่อนและหลังการรักษา HHP ต่างๆ วัสดุและวิธีการรีเอเจนต์ สารเคมีที่ใช้ในการวิเคราะห์ของเขาหรือ HPLC เกรดและซื้อมาจาก บริษัท ซีโนฟาร์มเคมีสารเคมี จำกัด (เซี่ยงไฮ้) น้ำ Deionised ถูกนำมาใช้ตลอด การเตรียมตัวอย่าง ผลไม้หม่อนสุกเก็บเกี่ยวในฟาร์มตามแนวลุ่มน้ำแม่น้ำแยงซีในมณฑลเจียงซูของจีนประชาสัมพันธ์ พวกเขาได้รับการล้างด้วยน้ำดื่มและแช่แข็งที่ -8 ° C ก่อนที่จะถูกนำมาใช้ ชิมผลไม้แช่แข็งที่ถูกละลายและ homogenised ใช้เครื่องปั่นห้องครัว สกัดเม็ดสี เม็ดสี anthocyanin อดีตฉุดถูกทำโดยการใช้วิธีการที่อธิบายโดย Giusti และ Wrolstad (1996) ที่มี Modifica ทั้งนี้ไม่กี่ ถึง 10 กรัมของผลไม้หม่อน homogenised ในถ้วยแก้ว 40 มล. อะซิโตน (1:04 w / v) ถูกเพิ่มเข้ามา ส่วนผสมที่ถูก sonicated ในขณะที่ถูกกวนอย่างต่อเนื่องเป็นเวลา 10 นาทีก่อนที่จะกรองสูญญากาศผ่านช่องทางBüchnerกับลำดับที่ 1 กระดาษกรอง Whatman ที่เหลือก็ล้างด้วย 70% อะซีโตน สารสกัด (45 มล. ) ถูกย้ายไปอยู่ช่องทางแยกและ 90 มล. ของ trichloromethane ถูกเพิ่มเข้ามาและ 10 นาทีได้รับการอนุญาตให้ใช้ขั้นตอนในการแยก สารสกัดจากเม็ดสีที่มี thocyanins ถูกเก็บไว้สำหรับการทำให้บริสุทธิ์ต่อไป สารสกัดบริสุทธิ์ สารสกัดบริสุทธิ์ตามที่อธิบาย Rodriguez-Saona และ Wrolstad (2001) โดยใช้วิธีการสกัดสารในเฟสของแข็งด้วย ก.ย. ปาก C 18 ตลับหมึก (วอเตอร์ จำกัด , ฟอร์ด, สหรัฐอเมริกา) เป็นเฟสและ 0.01% HCl ในเมทานอล (50 มล. ) เอทิลอะซิเตท (50 มล. ) และ 0.01% HCl ในน้ำ deionised (50 มล. ) เป็นเฟสเคลื่อนที่ เมทานอลในสารสกัดที่ถูกระเหยไอเอ็นจีเราสูญญากาศเครื่องระเหยแบบหมุน (Model RE 2000; ชีวเคมีและโรงงานตราสาร, เซี่ยงไฮ้) น้ำ Deionised (5 ml) ถูกใช้ในการแก้โรคตัวอย่างบริสุทธิ์และการแก้ปัญหาที่ถูกบรรจุอยู่ในถุงพลาสติก การรักษา HHP อุปกรณ์ HHP (Intel-ligent ซุปเปอร์ดันสูงแปรรูปอาหาร De-รอง, เจียงซูมหาวิทยาลัยจีน) มีขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางภายใน 150 มม. และความสูงของ 440 มม. มีปริมาณการดำเนินงานของ 6.5 ลิตร di-octyl se-bacate ถูกใช้เป็นของเหลวอากาศกด ความดันการดำเนินงานสูงสุดของ 600 MPa ถึงในประมาณ 95 ขณะ Depressurisation เวลาประมาณ 10 วินาที แพ็ควัยหม่อนตัวอย่างน้ำผลไม้ถูกแบ่งออกเป็นสามแยกและกระบวนการเหล่านี้ถูกยัดเยียดตามลำดับต่อแรงกดดันของ 200, 400, และ 600 MPa เป็นเวลา 20 นาที กลุ่มตัวอย่างที่ถูกนำเข้าอุปกรณ์แรงดันสูงที่อุณหภูมิ ture 20 องศาเซลเซียสและในช่วงแรงดันถึงอุณหภูมิสูงสุดจาก 25 ° C เนื่องจากความร้อนอะเดียแบติก หลังจาก Depressurisation ตัวอย่างถูกโอนเข้าอาบน้ำน้ำแข็งและเก็บไว้แล้วภายใต้การทำความเย็น (4 ± 1 ° C) ในชั่วข้ามคืนก่อนที่จะวิเคราะห์ การวิเคราะห์ HPLC-ESI-MS กลุ่มตัวอย่างได้รับการรักษาและยกเลิกการรับการรักษาที่ถูกกรองผ่าน 0.45 ไมครอนกรองคประเภท HV (คคอร์ปที่พัก-ฟอร์ด, สหรัฐอเมริกา) ก่อนที่จะมุ่งมั่น anthocyanin ใช้ HPLC-DAD (HP Agilent 1100 Series) และ ESI-MS Bruker อัศวิน LC -MS ดักไอออนมวลหลายสเปกโตรมิเตอร์ (เบรเมน, เยอรมนี) ในโหมด Ionisation ไอออนบวกจากการวิเคราะห์เมตร / ซี 100 เมตร / 1,200 ซี คุณสมบัติ HPLC และการทำงานสภาพการคือเครื่องตรวจจับ DAD (G1315A): 200,700 นาโนเมตรเต็มสแกนระบบปั๊ม quarternary (G1311A) autosampler (G1313A) คอลัมน์ที่ใช้เป็น Agilent 20RBAX-SB C18 4.6 มม. × 250 มม. 5 ไมโครเมตร (Agilent, ซานตาคลารา, สหรัฐอเมริกา) ตัวทำละลาย (เมทานอล) และตัวทำละลาย B (3% กรดในน้ำ deionised) มีเยื่อกรอง (0.45 ไมครอน) และยกเลิกมวลเบาโดย sonication ที่ 25 ° C เป็นเวลา 40 นาที เชิงเส้น GRA-dient elution ถูกหามออกดังนี้ 015 นาที - เพิ่มขึ้นจาก 5% เป็น 25%; 1525 นาที - ในรอยพับจาก 25% ถึง 32%; 2535 นาทีเพิ่มขึ้นจาก 32% ถึง 60%; 3545 นาที - เพิ่มขึ้นจาก 60% ถึง 80%; 4555 นาที - เพิ่มขึ้นจาก 80% ถึงรูปที่ 1 HPLC-DAD บันทึกที่ 520 นาโนเมตรในการบำบัดน้ำหม่อน R elativeabundance เวลา (นาที)
Page 3
ฉบับที่ 74 31 ต.ค. 2013, ฉบับที่ 1: 72-80 เช็กเจอาหารวิทย์ 100% อัตราการไหลของปริมาณ 0.9 มล. / นาทีและฉีดเป็น 5 ไมโครลิตร คอลัมน์อุณหภูมิ 25 ° C. เงื่อนไขของ ESI-MS มีดังนี้ ESI แรงดันแหล่ง 4.5 กิโลโวลต์, เส้นเลือดฝอยแรงดัน 30 V, ฝักอัตราการไหลของก๊าซ 30 หน่วยโดยพลการที่อัตราการไหลของก๊าซช่วย 7 หน่วยพลแรงดันเลนส์หลอด, 120 V และอุณหภูมิฝอย 300 ° C . ระบบที่ได้รับการติดตั้งซอฟท์แว Xcalibur 2.0.7 SP1 (เทอร์โมฟิชเชอร์วิทยาศาสตร์อิงค์วอลแทม, USA) ซึ่งถูกใช้ในการสร้างและแก้ไขข้อมูล spectrometry มวลผู้นำและไอออนงับ-ment เป็นพื้นที่ที่อยู่ภายใต้ ยอดเขาที่บุคคลใช้ในการตรวจสอบจำนวนเงินที่ญาติของ anthocyanins ผลการอภิปรายและการควบคุม Anthocyanins ตัวอย่างคร่าวถูกระบุโดยการจับคู่ของพวกเขาในระดับโมเลกุลไอออน (M + H +) ที่ได้รับเกี่ยวกับการกระจายตัวโดย LC-ESI-MS และวิธี LC-MS/MS มีน้ำหนักโมเลกุลทฤษฎีจากข้อมูลจากเอกสารอ้างอิง (Maatta- Riihinen และคณะ. 2004) การวิเคราะห์การใช้โหมดไอออนบวก (ม. / ซี M + H +) สำหรับการตรวจสอบของ anthocyanins ยอดเขาในโครมาโท HPLC-DAD ถูกตรวจสอบที่ 280 และ 520 นาโนเมตรซึ่งเป็นความยาวคลื่น AB-sorbance ทั่วไปของ anthocyanins สำหรับตัวอย่างการควบคุมที่สองยอดโครมา (รูปที่ 1) ได้รับที่ 520 นาโนเมตรแสดงให้เห็นปรากฏตัวของสอง anthocyanins หลัก รูปที่ 2 ไอออนบวก ESI สเปกตรัมมวลของ anthocyanin ตรวจพบในการควบคุม (สูงสุด 1) (A) (B) (C) (D) รูปที่ 3 HPLC-DAD HPLC-DAD บันทึกที่ 520 นาโนเมตรเพื่อน้ำหม่อนได้รับการปฏิบัติที่ 200 MPa 20 นาทีอาร์ elativeabundancem / ZM / ซีอาร์ elativeabundance R elativeabundance R elativeabundance R elativeabundance เวลา (นาที)
หน้า 4
75 เช็กเจอาหารวิทย์ Vol 31 ต.ค. 2013, ฉบับที่ 1: 72-80 รูปที่ 4 ESI ไอออนบวกสเปกตรัมมวลของ anthocyanin A และ B - ยอด 1, C และ D - พี 2, E และอี - พี 3, G และ H - ยอด 4 ตรวจพบในตัวอย่างได้รับการปฏิบัติที่ 200 MPa เป็นเวลา 20 นาที (A) (B) (C) (D) (E) (F) (G) (H) เมตร / ZM / ซีอาร์ elativeabundance R elativeabundance R elativeabundance R elativeabundance R elativeabundance R elativeabundance R elativeabundance R elativeabundance
หน้า 5
ฉบับที่ 76 31 ต.ค. 2013, ฉบับที่ 1: 72-80 เช็กเจอาหารวิทย์ บวก ESI ไอออนมวลสเปกตรัมของยอดที่ 1 ใน chromatograms (รูปที่ 1) แสดงให้เห็นว่า Molec

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

หน้า 1
72 ฉบับที่ 31 , 2013 , หมายเลข 1 : 72 - 80 เช็กเจอาหาร Sci . ศึกษาผลของความดันสูงในการประมวลผลองค์ประกอบของแอนโทไซยานินหม่อน Moraceae ) น้ำผลไม้ narku เฟลิกซ์ engmann ยงคุงแม่ Xu Ying และเจ้าชิงโรงเรียนของอาหารและวิศวกรรมชีวภาพมหาวิทยาลัยเจียงซู Zhenjiang , PR China นามธรรม engmann NF มา Y - K . หญิง X , ชิง Y ( 2013 )ศึกษาผลของความดันสูงในการประมวลผลองค์ประกอบของแอนโทไซยานินหม่อน Moraceae ) น้ำผลไม้ เช็กเจอาหาร Sci . 31 : 72 - 80 แอนโทไซยานินที่มีศักยภาพธรรมชาติสารต้านอนุมูลอิสระที่มีประโยชน์ต่อสุขภาพที่ได้รับรางวัล และยังใช้เป็นสีอุตสาหกรรม ฟังก์ชั่นเหล่านี้จะขึ้นอยู่กับชนิดและปริมาณของแอนโทไซยานินที่มีอยู่ในวัสดุอาหารเราระบุ และลักษณะใบหม่อนแอนโทไซยานิน ก่อนและหลัง ความดันสูง ( hhp ) การรักษา สามตัวอย่างแยก มีการปฏิบัติที่ 200 , 400 และ 600 เมกกะสำหรับ 20 นาที ตามลำดับ แอนโทไซยานิน พบลักษณะโดยใช้วิธีโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง ( HPLC ) , วิธีพ่นละอองไฟฟ้า ionisation Mass Spectrometry ( ESI / MS ) และข้อมูลที่เกี่ยวข้องcyanidin-3 - o - glucopyranoside ( 55.56 % ) และ cyanidin-3 - o - coumaroylglucoside ( 44.44 บาท ) ถูกตรวจพบในตัวอย่างดิบ , ในขณะที่สองใหม่ แอนโทไซยานิน [ pelargonidin-3 - o - coumaroylglucoside ( 0.46 % ) และ delphinidin-3 - o - coumaroylglucoside ( 5.8% ) ระบุในตัวอย่างการปฏิบัติที่ 200 MPa เป็นเวลา 20 นาที หนึ่ง แอนโธไซยานินใหม่ delphinidin-3 - o - coumaroylglucoside ( 5.38 % )ที่ตรวจพบในน้ำได้รับการรักษา 400 MPa เป็นเวลา 20 นาที ที่ 600 เมกกะสำหรับ 20 นาที ไม่มีแอนโทไซยานิน ใหม่ที่ถูกตรวจพบ คำสำคัญ : ใบหม่อน ; สารต้านอนุมูลอิสระ ; ประโยชน์สุขภาพ hplc-esi-ms แปรรูปอาหารโดยใช้ความดันสูง ( hhp ) มีผลร้ายแรงต่อจุลินทรีย์ inac - tivates เอนไซม์และในบางกรณีการเปลี่ยนแปลงเกิดขึ้นในสารชีวโมเลกุลเช่นโปรตีนที่นำไปสู่การพัฒนาผลิตภัณฑ์ใหม่ ( อาเหม็ด et al . 2003 ; Rodriguez et al . 2004 ) เพราะพันธบัตรโควาเลนต์จะไม่ถูกทำลายในระหว่าง hhp รักษา คุณสมบัติทางประสาทสัมผัสของอาหารเป็นส่วนใหญ่ก่อนเสิร์ฟ ( cheftel 1992 ) พบว่า สารสกัดผลหม่อนมี anti - crobial antimi ออกซิเดชัน ,และคุณสมบัติต้านการอักเสบ ( ไซ et al . 2005 ; ซาดิก ก้น et al . 2008 ) , และการจัดแสดงสมบัติอนุภาคขนาดเล็กพิเศษต้านอนุมูลอิสระ / ซู et al . 2004 ) ประโยชน์ต่อสุขภาพเหล่านี้ได้รับการบันทึกว่าเป็นสารต้านอนุมูลอิสระ anthocyanins ที่มีศักยภาพและยังปรับปรุงทิฐิ ( Mazza & minia - Ti 1993 ) แอนโทไซยานิน ยังพบว่ามีรังสีป้องกันมะเร็ง ,vasotonic vasoprotective , ต้านการอักเสบ และคีโม และ hepato กิจกรรมป้องกัน ( คาเมอิ et al . 1998 ; Smith et al . 2000 ; Wang et al . 2000 ) คุณสมบัติทั้งหมดนี้ขึ้นอยู่กับชนิดและปริมาณแอนโทไซยานินปัจจุบัน ( stintzing et al . 2002 ; หลิว 2003 ; มัตสึโมโตะ et al . 2003 ) โดยเฉพาะสารแอนโธไซยานินหม่อนได้รับรายงานว่ามีกิจกรรม antimetastasis ยับยั้งการย้ายถิ่นของ b16-f1 เซลล์ ( Huang et al . 2008 ) ผลหม่อนมีปริมาณที่สูงขึ้นของ - thocyanins กว่าผลไม้ที่รู้จักกันดีอื่น ๆเช่น เอลเดอร์เบอรี่และ BlackBerry ( เพลง et al . 2009 ) แอนโทไซยานิน ทราบว่าได้รับผลกระทบจากปัจจัยต่างๆ เช่น ค่า pH , อุณหภูมิ , เกลือและสารเคมีอื่น ๆและอาจกดดัน ( T ü rker & erdo ğ du 2006 ) ทั้งๆที่มีการใช้ในเชิงพาณิชย์ของ hhp ในการประมวลผลที่หลากหลายของวัสดุอาหาร วิจัยผลกระทบต่อปริมาณแอนโธไซยานินของผลไม้ 2

หน้า 73 เช็กเจอาหาร Sci . ฉบับที่ 31 , 2013 , หมายเลข 1 : 72 - 80 น้ำผลไม้ โดยเฉพาะจากผลไม้ ไม่กว้างขวางการวิจัยครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาและนักศึกษาหม่อนผลแอนโทไซยานิน ก่อนและหลังการรักษา hhp ต่าง ๆ วิธีการวัสดุและสารเคมี . ที่สามารถใช้วิเคราะห์หรือ HPLC เกรดและซื้อจาก sinopharm เคมีรีเอเจนต์ Co . , Ltd . ( เซี่ยงไฮ้ , จีน ) deionised มีน้ำใช้ตลอด ตัวอย่างการเตรียมลูกหม่อนผลไม้สุกเก็บในฟาร์มตามแนวแม่น้ำแยงซีลุ่มน้ำใน Jiangsu จังหวัด PR China พวกเขาถูกล้างด้วยน้ำสะอาดและแช่แข็งที่ - 8 องศา C ก่อนการใช้ ตัวอย่างผลไม้แช่แข็งและละลาย homogenised ใช้ปั่นในครัว การสกัดสีแอนโธไซยานินผงเก่า - ฉุด โดยใช้วิธีการที่อธิบายโดย giusti และ wrolstad ( 1996 ) มีไม่กี่ modifica - ยินดีด้วย . 10 กรัมของ homogenised หม่อนผลในบีกเกอร์ อะซิโตน 40 ml ( 1 : 4 w / v ) ถูกเพิ่มเข้ามา ส่วนผสม sonicated ในขณะที่ถูกขยับอย่างต่อเนื่องเป็นเวลา 10 นาทีก่อนการกรองสูญญากาศผ่าน B ü chner กรวยด้วยหมายเลข 1 whatman กรองกระดาษเหลือซัก 70% สารอะซิโตน สารสกัด ( 45 ml ) ถูกย้ายไปเป็นกรวยแยกและ 90 มิลลิลิตร ไตรคลอโรมีเทนเป็นเพิ่ม , และ 10 นาทีได้รับอนุญาตสำหรับขั้นตอนการแยก ที่สีแยกที่มี - thocyanins รวบรวมเป็นหลักฐานต่อไป สารสกัดบริสุทธิ์สารสกัดบริสุทธิ์ตามที่อธิบายไว้โดย Rodriguez saona และ wrolstad ( 2001 ) ใช้ของแข็งขั้นตอนการสกัดด้วยวิธีปาก C 18 ก.ย. ตลับ ( น้ำ Co . , ฟอร์ด , USA ) เป็นเฟสอยู่กับที่ และ HCl 0.01 % เมทานอล ( 50 มล. ) , เอทิลอะซิเตท ( 50 ml ) และ HCl 0.01% ใน deionised น้ำ ( 50 ml ) เป็นเฟสเคลื่อนที่สารสกัดเมทานอลในนำมาระเหยเรา - ไอระเหยแบบสุญญากาศ ( นางแบบอีก 2000 ; ชีวเคมีและอุปกรณ์โรงงาน , เซี่ยงไฮ้ , จีน ) deionised น้ำ ( 5 ml ) ใช้ dis - แก้ด้วยตัวอย่างและสารละลายที่บรรจุในถุงโพลีเทน hhp รักษา อุปกรณ์ hhp ( Intel - ligent ซูเปอร์ ความดันสูง อาหารแปรรูป เดอ ฝ่ายมหาวิทยาลัย มณฑลเจียงซูจีน ) มีเส้นผ่าศูนย์กลางภายใน 150 มม. และความสูง 440 มม. มีปริมาณงาน 6.5 ลิตร ไดออกทิล เซ - bacate ใช้เป็นรักษาระดับความดันของของไหล ใช้แรงดันสูงสุด 600 เมกะปาสคาลได้ถึงประมาณ 95 S ในขณะที่ depressurisation เวลาประมาณ 10 วินาทีแพ็ค - อายุหม่อน น้ำตัวอย่าง แบ่งเป็น 3 กลุ่มแยกจากกันและเหล่านี้ตามลำดับภายใต้แรงกดดันของ 200 , 400 และ 600 MPa เป็นเวลา 20 นาที ตัวอย่างที่แนะนำเป็นอุปกรณ์ที่มีความดันสูงที่อุณหภูมิ - 20 องศา C และใน ture pressurisation ถึงอุณหภูมิสูงสุดที่ 25 ° C เนื่องจากความร้อนสำหรับ . หลังจาก depressurisation ,จำนวนการโอนในน้ำแข็ง น้ำที่อาบ แล้วเก็บไว้ภายใต้ความเย็น ( 4 ± 1 ° C ) ค้างคืนก่อนการวิเคราะห์ การวิเคราะห์ hplc-esi-ms . การรักษาและไม่มีตัวอย่างถูกกรองผ่าน 0.45 - μ M มิลลิกรองประเภท HV ( มิลลิคอร์ป , เตียง - ฟอร์ดสหรัฐอเมริกา ) ก่อนการใช้ hplc-dad แอนโทไซยานิน ( เอชพี Agilent 1100 ชุด ) และ esi-ms BRUKER Esquire อินซูลินไอออนกับดักหลายแมสสเปกโตรมิเตอร์ ( เบรเมน , เยอรมัน ) บวก ionisation โหมดวิเคราะห์ไอออนจาก M / Z 100 M / Z 1200 กรัมคุณสมบัติและการทำงาน condi - ใช้งานได้ : เครื่องพ่อ ( g1315a ) : 200 , 700 nm เต็มสแกน ระบบปั๊มควาเตอร์นารี ( g1311a ) autosampler ( g1313a )คอลัมน์ที่ใช้เลนต์ 20rbax-sb c18 × 4.6 มม. 250 มม. , 5 μ M ( Agilent , ซานตาคลารา สหรัฐอเมริกา ) ตัวทำละลาย ( methanol ) และตัวทำละลาย B ( 3 % กรดใน deionised น้ำ ) เป็นเยื่อกรอง ( 0.45 µ M ) และ เดอ เติมอากาศ โดย sonication 25 ° C นาน 40 นาที มีความรัก - เชิงเส้น dient ได้มาดำเนินการดังนี้ 015 มิน–เพิ่มขึ้นจาก 5 % เป็น 25 % ; เดือนมิน–ในรอยพับจาก 25% ถึง 32 % ;2535 มิน a-increased จาก 32% เป็น 60% ; ผลมิน–เพิ่มขึ้นจาก 60% เป็น 80% ; 4555 มิน–เพิ่มขึ้นจาก 80% ต่อ 1 รูป hplc-dad บันทึกที่ 520 nm สำหรับน้ำผลไม้ดิบหม่อน R E L T ผม V E B U N D A N C E เวลา ( นาที )
3
หน้า 74 ฉบับที่ 31 , 2013 , หมายเลข 1 : 72 - 80 เช็กเจอาหาร Sci . 100 % อัตราการไหลเท่ากับ 0.9 ml / min และปริมาณการฉีด 5 μล. คอลัมน์อุณหภูมิอยู่ที่ 25 องศาเงื่อนไขของ esi-ms ดังนี้ ESI แหล่งจ่ายแรงดัน 4.5 กิโลหลอดเลือดฝอยแรงดัน 30 V , อัตราการไหลของแก๊สเครื่องปลอก 30 หน่วย , อัตราการไหลของก๊าซสำรอง 7 พลหน่วยเลนส์ท่อแรงดัน 120 V , C และอุณหภูมิ 300 องศา ระบบได้ติดตั้งซอฟต์แวร์ xcalibur 2.0.7 SP1 ( เทอร์โมฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์อิงค์ , วอลแทมสหรัฐอเมริกา )ซึ่งถูกใช้ในการสร้างและแก้ไขข้อมูลสำหรับสารตั้งต้น และมวลสาร - ment Frag ไอออนรวมทั้งพื้นที่ใต้พีคแต่ละ ใช้เพื่อกำหนดปริมาณสัมพัทธ์ของแอนโทไซยานิน . ผลและควบคุมการอภิปรายอย่างแอนโทไซยานินมีอะไรระบุโดยการจับคู่ของโมเลกุลไอออน ( M ) , ได้รับการกล่าวโดย LC MS / MS และการพัฒนาอินซูลิน–วิธีการกับทฤษฎีที่มีน้ำหนักโมเลกุลจากข้อมูลวรรณกรรม ( maatta riihinen et al . 2004 ) การวิเคราะห์ใช้โหมดอิออนบวก ( M / Z M ) สำหรับการตรวจหาแอนโทไซยานิน . ยอดใน HPLC chromatogram ( พ่อถูกที่ 280 และ 520 nm ซึ่งเป็น AB - sorbance ความยาวคลื่นทั่วไปของแอนโทไซยานิน . สำหรับตัวอย่างควบคุมและสองยอด ( รูปที่ 1 ) ที่ได้รับที่ 520 nm แสดงตนของแอนโทไซยานิน สองหลัก รูปที่ 2 บวกไอออนมวลสเปกตรัมของแอนโธไซยานินพบ ESI ในการควบคุม ( ช่วง 1 ) ( ก ) ( ข ) ( c ) ( D ) รูปที่ 3hplc-dad hplc-dad บันทึกที่ 520 nm สำหรับหม่อน น้ำถือว่า 200 MPa เป็นเวลา 20 นาที R E L T ผม V E B U N D A N C E M / Z M / Z R E L T ผม V E B U N D A N C E R L E V E T ฉัน B U N D A N C E R E L T ผม V E B U N D A N C E R E L T ผม V E B U N D A N C E เวลา ( นาที ) 4

หน้า 75 เช็กเจอาหาร Sci . ฉบับที่ 31 , 2013 , หมายเลข 1 : 72 - 80 รูปที่ 4บวกไอออน ESI มวลสเปกตรัมของแอนโทไซยานิน ( สูงสุด 1 A และ B , C และ D ) สูงสุด 2 , E และ E –สูงสุด 3G และ H ( สูงสุด 4 ที่ตรวจพบในตัวอย่างการปฏิบัติที่ 200 MPa เป็นเวลา 20 นาที ( ก ) ( ข ) ( c ) ( d ) ( e ) ( f ) ( กรัม ) ( H ) m / z M / Z R E L T ผม V E B U N D A N C E R E L T ผม V E B U N D A N C E R E L T ผม V E B U N D A N C E R E L T ผม V E B U N D A N C E R E L T ผม V E B U N D เป็น N C E R E L T ผม V E B U N D A N C E R E L T ผม V E B U N D A N C E R E L T ผม V E B U N D A N C E

76 หน้า 5 .31 , 2013 , หมายเลข 1 : 72 - 80 เช็กเจอาหาร Sci . บวกไอออน ESI มวลสเปกตรัมของยอด 1 ในกลิ่น ( รูปที่ 1 ) พบว่ามี molec