2.5. Measurement of water-soluble p

2.5. Measurement of water-soluble protein concentration
Protein concentrations in FMS were measured by the dye-binding method using Coomassie brilliant blue G-250 (Bradford,1976). The standard curve was prepared by using recombinant IgG from Bovine (Bio-Rad Laboratories, Tokyo, Japan).
2.6. Measurement of antioxidant activity against OH-radical by protein degradation assay
The OH-radical solution was prepared immediately prior to the protein degradation assay as previously reported by Yanai, Shiotani, Hagiwara, Nabetani, and Nakajima (2008). Briefly, 1 ml of 0.13 M H2O2 was added to 0.1 ml each of 0.1 M EDTA, 0.1 ml FeCl3 2H2O, and 0.1 M ascorbic acid. The OH-radical concentration was expressed as the H2O2 concentration. Albumin dissolved in buffer saline at 0.57 mg/ml was used as the target protein.
Freeze-dried FMS and various types of fermented sauces were dissolved in ultrapure water at a concentration of 1% (w/w), and 25 ll of each fermented sauce, freeze-dried FMS, or Gln-Tyr-Pro solutions at different concentrations were mixed with 175 llof BSA solution and incubated at room temperature for 30 min. SDS–PAGE was then performed in which 25 ll of saline and 25 ll of OH-radical solution were mixed and further incubated at 37 C for 60 min. This reaction mixture (50 ll) was then added to an equal volume of a sample buffer solution (1.0 ml of b-mercaptoethanol, 5.0 ml of 0.25 M Tris–HCl buffer (pH 6.8), and 0.4 g of SDS), which was then made up to 10 ml with ultrapure water, followed by addition of 10 ll of 70% glycerin. This sample was applied to a 12.5% gradient SDS–PAGE gel and electrophoresed at 40 mA for 90 min. After electrophoresis, the gel was stained and scanned. The concentrations of BSA bands were determined using the densitometric analysis mode of Chemidox XRS. The degrada-tion inhibitory effects of BSA by FMS, various types of fermented sauce, and Gln-Tyr-Pro addition were calculated using the follow-ing equation:
Antioxidant activity against the OH-radical (degradation inhibitory effect) (%) = concentration of BSA band (mg/ml)/0.57 (mg/ml) 100. A negative control mixture was prepared by mixing 175 ll BSA solution, 25 ll of saline and 25 ll of OH-radical solution. The absence of a negative control BSA band was confirmed in every assay.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5 การวัดความเข้มข้นของโปรตีนที่ละลายใน ความเข้มข้นของโปรตีนใน FMS ถูกวัด โดยวิธีผูกย้อมใช้ Coomassie brilliant blue G-250 (แบรดฟอร์ด 1976) เส้นโค้งมาตรฐานที่เตรียม โดยใช้ IgG recombinant จากวัว (ห้องปฏิบัติการชีวภาพ Rad โตเกียว ญี่ปุ่น) 2.6 การวัดกิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระกับอนุมูล OH โดยทดสอบการย่อยสลายโปรตีน โซลูชั่นอนุมูล OH ถูกเตรียมทันทีก่อนทดสอบการย่อยสลายโปรตีนที่เป็นก่อนหน้านี้ รายงาน โดย Yanai, Shiotani, Hagiwara, Nabetani นาคาจิมะ (2008) Briefly, 1 ml ของ 0.13 M H2O2 ได้เพิ่ม 0.1 ml แต่ละของ 0.1 M EDTA, 0.1 ml FeCl3 2H2O และ 0.1 M กรดแอสคอร์บิค ความเข้มข้นของ OH-รัศมีถูกแสดงเป็นความเข้มข้นของ H2O2 ใช้ละลายในน้ำเกลือบัฟเฟอร์ที่ 0.57 mg/ml albumin เป็นโปรตีนเป้าหมาย กรอบ FMS และหมักซอสชนิดต่าง ๆ ที่ละลายในน้ำ ultrapure ที่ความเข้มข้น 1% (w/w), และ 25 ของแต่ละคนจะหมักซอส กรอบ FMS หรือ Gln Tyr โปรโซลูชั่นที่ความเข้มข้นแตกต่างกันผสม ด้วยโซลูชั่น llof บีเอสเอ 175 และ incubated ที่อุณหภูมิห้อง 30 นาที SDS – หน้าแล้วทำในที่ 25 ll ll saline และ 25 ของอนุมูล OH ถูกผสม และ incubated เพิ่มเติม ที่ 37 C สำหรับ 60 นาที ส่วนผสมนี้ปฏิกิริยา (50 จะ) ถูกเพิ่มเข้าไปเป็นปริมาณอย่างบัฟเฟอร์โซลูชัน (1.0 ml ของบี mercaptoethanol, 5.0 มล. 0.25 M ตรี – HCl บัฟเฟอร์ (pH 6.8), และ 0.4 g ของ SDS), ที่แล้วทำถึง 10 ml กับน้ำ ultrapure ตาม ด้วยเพิ่ม 10 เท่าจะ 70% กลีเซอรีน ตัวอย่างนี้ใช้ 12.5% ไล่ระดับองค์กร – หน้าเจ และ electrophoresed ที่ 40 mA สำหรับ 90 นาที หลังจาก electrophoresis เจสี และสแกน ความเข้มข้นของวงบีเอสเอถูกกำหนดโดยใช้วิธีการวิเคราะห์ densitometric Chemidox XRS ผลลิปกลอสไข degrada สเตรชันของบีเอสเอด้วย FMS ชนิดต่าง ๆ ของหมักซอส Gln Tyr Pro นี้ถูกคำนวณโดยใช้สมการตาม ing: กิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระต่อต้าน OH-รัศมี (ย่อยสลายลิปกลอสไขผล) (%) =ความเข้มข้นวงบีเอสเอ (mg/ml)/0.57 (mg/ml) 100 ส่วนผสมตัวควบคุมค่าลบถูกเตรียม โดยผสม 175 จะบีเอสเอโซลูชั่น 25 ll ll saline และ 25 ของอนุมูล OH การขาดงานของตัวควบคุมลบวงบีเอสเอมี confirmed ในการทดสอบทุก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 การวัดความเข้มข้นของโปรตีนที่ละลายน้ำได้ความเข้มข้นของโปรตีนใน FMS ถูกวัดโดยวิธีการย้อมสีที่มีผลผูกพันใช้ Coomassie สีฟ้าสดใส G-250 (แบรด, 1976)
โค้งมาตรฐานถูกจัดทำขึ้นโดยใช้ IgG recombinant จากวัว (ห้องปฏิบัติการ Bio-Rad, กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น).
2.6 วัดสารต้านอนุมูลอิสระกับ OH
รุนแรงโดยการย่อยสลายโปรตีนทดสอบวิธีการแก้ปัญหาOH รุนแรงถูกจัดทำขึ้นทันทีก่อนที่จะทดสอบการย่อยสลายโปรตีนตามที่รายงานก่อนหน้านี้โดย Yanai, Shiotani, Hagiwara, Nabetani และจิมา (2008) Brie ชั้นปี 1 มิลลิลิตร 0.13 M H2O2 ถูกบันทึกอยู่ใน 0.1 มล. แต่ละ 0.1 M EDTA, 0.1 มล. FeCl3 2H2O และ 0.1 M วิตามินซี ความเข้มข้น OH รุนแรงได้แสดงออกเป็นความเข้มข้น H2O2 โปรตีนชนิดหนึ่งที่ละลายในน้ำเกลือบัฟเฟอร์ที่ 0.57 mg / ml ถูกใช้เป็นโปรตีนเป้าหมาย.
FMS ตรึงแห้งและประเภทต่างๆของซอสหมักละลายในน้ำบริสุทธิ์ที่มีความเข้มข้น 1% (w / w) และ 25 LL ของแต่ละหมัก ซอสแห้ง FMS หรือโซลูชั่น Gln-เทอร์-Pro ที่ระดับความเข้มข้นที่แตกต่างกันผสมกับ 175 llof แก้ปัญหาบีเอสเอและบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที SDS-PAGE ได้ดำเนินการแล้วที่ 25 LL น้ำเกลือและ 25 LL ของการแก้ปัญหา OH รุนแรงถูกผสมและบ่มเพิ่มเติมได้ที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 60 นาที ผสมปฏิกิริยานี้ (50 LL) ถูกเพิ่มเข้ามาแล้วปริมาณที่เท่ากันของสารละลายบัฟเฟอร์ตัวอย่าง (1.0 มิลลิลิตร B-mercaptoethanol 5.0 มล. 0.25 M บัฟเฟอร์ Tris-HCl (pH 6.8) และ 0.4 กรัมของ SDS) ซึ่งเป็น ทำแล้วได้ถึง 10 มล. กับน้ำบริสุทธิ์, ตามด้วยนอกเหนือจาก 10 LL ของกลีเซอรีน 70% ตัวอย่างนี้ถูกนำไปใช้กับการไล่ระดับ 12.5% ​​เจล SDS-PAGE และ electrophoresed ที่ 40 มิลลิแอมป์เป็นเวลา 90 นาที หลังจากที่อิเลคเจลที่ถูกย้อมสีและการสแกน ความเข้มข้นของวงบีเอสเอได้รับการพิจารณาโดยใช้โหมดการวิเคราะห์ densitometric ของ Chemidox XRS ผลยับยั้ง degrada-การของบีเอสเอโดย FMS, ประเภทต่างๆของซอสหมักและนอกจาก Gln-เทอร์-Pro ได้รับการคำนวณโดยใช้สมการติดตามไอเอ็นจี:
กิจกรรมต้านอนุมูลอิสระกับ OH รุนแรง (การย่อยสลายผลยับยั้ง) (%) = ความเข้มข้น ของวงบีเอสเอ (mg / ml) /0.57 (mg / ml) 100 ส่วนผสมควบคุมเชิงลบถูกจัดทำขึ้นโดยการผสม 175 LL แก้ปัญหา BSA 25 LL น้ำเกลือและ 25 LL ของการแก้ปัญหา OH รุนแรง กรณีที่ไม่มีวงบีเอสเอควบคุมเชิงลบเป็นสายนักโทษ rmed ในทุกการทดสอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 การวัดระดับความเข้มข้นโปรตีนโปรตีนละลายน้ำความเข้มข้น
FMS วัดจำนวนการใช้สีย้อมวิธีการเหล่านี้น่าจะเป็น g-250 สีฟ้าสดใส ( แบรดฟอร์ด , 1976 ) เส้นโค้งมาตรฐานถูกเตรียมโดยใช้ recombinant IgG จากวัว ( ไบโอ ราดห้องปฏิบัติการ , โตเกียว , ญี่ปุ่น )
2.6 การตรวจวัดสารต้านอนุมูลอิสระต่อต้านอนุมูลอิสระ โดยการย่อยสลายโปรตีน (
.โอ้รุนแรงสารละลายที่เตรียมทันทีก่อนที่จะสลายโปรตีน ( ก่อนหน้านี้ที่รายงานโดย Yanai , shiotani ฮากิวาระ nabetani , และ นากาจิม่า ( 2008 ) บรี fl Y 1 ml เท่ากับ 0.13 เมตรแบตเตอรี่เพิ่ม 0.1 ml ละ 0.1 M EDTA ความเข้มข้น 0.1 มล. FeCl3 2H2O-dx , และ 0.1 M กรดแอสคอร์บิค โอ้รุนแรงเข้มข้นถูกแสดงออกมาเป็นแบตเตอรี่ที่ใช้ อัลบูมินละลายเกลือในบัฟเฟอร์ที่ 057 mg / ml ใช้เป็นโปรตีนเป้าหมาย .
ตรึงแห้ง FMS และประเภทต่างๆ ของหมักซอสถูกละลายในน้ำที่บริสุทธิ์มาก ความเข้มข้น 1% ( w / w ) และ 25 จะแต่ละหมักซอสแห้ง FMS หรือ gln tyr Pro โซลูชั่นที่ความเข้มข้นต่าง ๆผสมกับ 175 llof เอ โซลูชั่น บ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาทีหน้าถูกแสดงใน SDS ) ที่ 25 จะเค็มและ 25 จะรุนแรงและเพิ่มเติมโซลูชั่นโอผสมบ่มที่ 37 C เป็นเวลา 60 นาที ปฏิกิริยานี้ผสม ( 50 จะ ) จากนั้นเพิ่มปริมาณเท่ากันของตัวอย่างสารละลายบัฟเฟอร์ ( 1.0 มิลลิลิตร b-mercaptoethanol , 5.0 มิลลิลิตร ต่อ 0.25 M HCl บัฟเฟอร์จำกัด ( pH 5.5 ) , และ 0.4 กรัม SDS ) ซึ่งถูกสร้างขึ้นเพื่อ 10 มิลลิลิตร กับน้ำบริสุทธิ์มาก ,