Tissue preparationAfter deep anesth

Tissue preparation
After deep anesthesia with sodium pentobarbital (60 mg/kg), Ntg, mtauKO, 3xTg-AD and 3xTg-AD/mtauKO mice were perfused trans- cardially with 0.1 M phosphate-buffered saline (PBS), pH 7.4. Half of the brain was fixed for 48 h in 4% paraformaldehyde in 0.1 M phos- phate buffer saline, pH 7.4 and cryoprotected in 30% sucrose for immu- nohistochemical analysis, whereas the other half was frozen in dry ice for biochemical analysis. Thick (40 μm) free-floating sections were obtained using a freezing microtome (Leica SM 2010 R) and serially col- lected (each series contained sections that represented 1/7th of the total brain) in cold PBS and 0.02% sodium azide.
Protein extracts were prepared by homogenizing whole brain hemi- sphere samples in T-per (Thermo Fisher Scientific, Rockford, IL) extrac- tion buffer (150 mg/ml), complemented with a protease inhibitor (Complete Mini Protease Inhibitor Tablets, Roche Diagnostics GmbH, Germany) and phosphatase inhibitor (5 mmol/l, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), followed by centrifugation at 100,000 ×g for 1 h. Protein concentration in the supernatant was determined using the Bradford assay.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การเตรียมเนื้อเยื่อ
หลังจากการระงับความรู้สึกลึกกับโซเดียม pentobarbital (60 mg / kg) NTG, mtauko, 3xtg โฆษณาและหนู 3xtg-ad/mtauko ถูก perfused ทรานส์ cardially 0.1 เมตรฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ (PBS), ph 7.4 ครึ่งหนึ่งของสมองที่ได้รับการแก้ไขเป็นเวลา 48 ชั่วโมงใน paraformaldehyde 4% ใน 0.1 เมตรบัฟเฟอร์ Phos-phate น้ำเกลือ ph 7.4 และ cryoprotected ในซูโครส 30% สำหรับการวิเคราะห์ IMMU-nohistochemical,ในขณะที่อีกครึ่งหนึ่งถูกแช่แข็งอยู่ในน้ำแข็งแห้งสำหรับการวิเคราะห์ทางชีวเคมี หนา (40 ไมครอน) ส่วนฟรีลอยที่ได้รับการใช้ microtome แช่แข็ง (LEICA SM 2010 r) และเป็นลำดับเทือกเขาที่เลือก (แต่ละชุดมีส่วนที่เป็นตัวแทนของ 1/7th ของสมองรวม) ในเย็น pbs และ 0.02% โซเดียมเอไซด์
สารสกัดจากโปรตีนที่ถูกจัดทำขึ้นโดยการผสมยางสมองทั้งตัวอย่างครึ่งทรงกลมในเสื้อต่อ (เทอร์โมฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์, อิลลินอยส์) กันชนสกัด-tion (150 mg / ml) ครบครันด้วยสารยับยั้งโปรติเอส (มินิแท็บเล็ตที่สมบูรณ์น้ำย่อยยับยั้งการวินิจฉัยโรช GmbH, เยอรมนี) และฟอสฟายับยั้ง (5 มิลลิโมล / ลิตร, Sigma-Aldrich, เซนต์. Louis, MO) ตามด้วยการหมุนเหวี่ยงที่ 100,000 ×กรัมเป็นเวลา 1 ชั่วโมงความเข้มข้นของโปรตีนในสารละลายถูกกำหนดโดยใช้การวิเคราะห์ Bradford

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การเตรียมเนื้อเยื่อ
หลังจากยาลึกกับโซเดียม pentobarbital (60 mg/kg), Ntg, mtauKO, 3xTg-AD และ 3xTg-AD/mtauKO หนูได้ perfused ทรานส์-cardially ด้วย 0.1 M buffered ฟอสเฟตน้ำเกลือ (PBS), ค่า pH 7.4 การ ครึ่งหนึ่งของสมองถูกนำ h 48 ใน paraformaldehyde 4% ในน้ำเกลือบัฟเฟอร์ phos phate 0.1 M ค่า pH 7.4 และ cryoprotected ในซูโครส 30% สำหรับการวิเคราะห์ immu nohistochemical ในขณะที่อีกครึ่งหนึ่งถูกแช่ในน้ำแข็งแห้งสำหรับการวิเคราะห์เชิงชีวเคมี ส่วน free-floating (40 μm) หนาได้รับใช้ (ไล SM 2010 R) ตรึง microtome และ serially คอลัมน์ lected (แต่ละชุดประกอบด้วยส่วนที่แสดง 1/7 ของสมองทั้งหมด) ในเย็น PBS และ 0.02% โซเดียม azide
สารสกัดจากโปรตีนถูกเตรียม โดย homogenizing สมองทั้งซีกทรงกลมอย่างใน T-ต่อ (เทอร์โม Fisher วิทยาศาสตร์ ร็อคฟอร์ด IL) บัฟเฟอร์สเตรชัน extrac (150 mg/ml), ด้วยรติเอสเตอร์ (สมบูรณ์มินิรติเอสเตอร์เม็ด Roche วินิจฉัย GmbH เยอรมนี) และสารยับยั้งฟอสฟาเตส (5 ที่ mmol/l ซิก-Aldrich เซนต์หลุยส์ MO), ตาม ด้วย centrifugation ที่ 100000 × g สำหรับ 1 h ความเข้มข้นของโปรตีนใน supernatant ถูกกำหนดโดยใช้ทดสอบแบรดฟอร์ด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ซึ่งจะช่วยในการเตรียมเนื้อเยื่อหลังจากลึกแล้วพร้อมด้วยโซเดียม pentobarbital ( 60 มก./กก.), Class , mtauko , 3 xtg - โฆษณาและ 3 xtg - โฆษณา/ mtauko หนูเป็น perfused ข้าม cardially พร้อมด้วย 0.1 ม.ฟอสเฟต - Buffered น้ำเกลือ( PBS ), pH 7.4 . ครึ่งหลังของสมองถูกกำหนดเป็น 48 ชั่วโมงใน 4% paraformaldehyde ใน 0.1 ม. phos - phate บัฟเฟอร์น้ำเกลือ, pH 7.4 และ cryoprotected ใน 30% ซูโครสสำหรับ immu - nohistochemical การวิเคราะห์ในขณะที่ครึ่งปีอื่นๆที่อยู่ในน้ำแข็งแห้งสำหรับการวิเคราะห์ทางชีวเคมี ความหนา( 40 μ m )โดยไม่เสียค่าบริการ - ลอยน้ำได้ส่วนการใช้ที่แช่แข็ง microtome ( leica จ.ส.อ. 2010 R )และแบบอนุกรม Col - lected (แต่ละชุดที่อยู่ในส่วนที่แสดง 1/7 . co . th ของสมอง)ในน้ำเย็น PBS และ 0.02% โซเดียม azide .
โปรตีนจากสารสกัดจากสาหร่ายได้เตรียมความพร้อมโดยการผสมให้เข้ากันทั้งสมองครึ่งทรงกลม - พื้นที่ตัวอย่างใน T - ต่อ(แบบร้อนชาวประมงทางวิทยาศาสตร์, Rockford , IL ) extrac - การ Buffer ( 150 มก./มิลลิลิตร),เพิ่มความสมบรูณ์แบบด้วย protease ยาป้องกัน(สมบรูณ์แบบมินิ protease ยาป้องกันเม็ด, Roche การวินิจฉัย GmbH ,เยอรมนี)และ phosphatase ยาป้องกัน( 5 มิลลิโมล/ L , sigma-aldrich , St . Louis , MO ),ตามด้วยเครื่องหมาย×ผลิตที่ 100 , 000 g สำหรับ 1 ชั่วโมง.การทำสมาธิโปรตีนใน supernatant ที่ตั้งใจไว้แล้วว่าการใช้สอบ Bradford ที่