- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
2. Methods2.1. MaterialsBristol’s m
2. Methods
2.1. Materials
Bristol’s medium-cultivated Chlorella pyrenoidosa were used for the microwave-assisted lipid transesterification in microalgae cells [28]. A bioreactor with a volume of 2 L was pumped with air to cultivate C. pyrenoidosa for 15 days with illumination from an incandescent lamp (2500 lx, dark/light cycle: 12/12 h). The cultivated C. pyrenoidosa was dewatered by centrifugation (Beckman Avanti J26-XP, USA) at 8500 r/min for 10 min in individual centrifuge tubes to obtain microalgae paste (∼2 g) with a water content of 77 wt.%. The resulting microalgae paste was then stored at −20 °C until use. Commercial alcohol was used in this experiment because renewable alcohol produced through fermentation can be easily upgraded to analytical purity [29]. All reagents (i.e., hexane, ethanol, isopropanol, and sulfuric acid) were purchased from Sinopharm Chemical Reagent (Shanghai, China).
2.2. Microwave-assisted lipid transesterification with various alcohols in wet microalgae cells for biodiesel production
Microwave-assisted lipid transesterification with ethanol and isopropanol in wet microalgae cells was conducted in a WX-4000 microwave digestion system (2.45 GHz; Shanghai Yiyao Microwave Chemistry Company, Shanghai, China) [12]. The stored C. pyrenoidosa biomass (∼2 g) was thawed and then transferred into the 60 mL digestion reactor of the microwave digestion system. Ethanol and isopropanol with 3 vol.% of concentrated sulfuric acid were added into the reactor and mixed with the thawed C. pyrenoidosa biomass. The reactor was sealed, and the mixture in the digestion reactor was heated to a preset reaction temperature via microwave irradiation with a power output of 600 W. The power output of microwave irradiation was set at 500 W to maintain the mixture at the reaction temperature for the preset reaction time.
After the microwave-assisted lipid transesterification, the mixture was air-cooled to room temperature. The cooled mixture was then poured into a centrifuge tube. The reaction temperature (70 °C–110 °C), reaction time (2–30 min), and alcohol volume (ratio of alcohol volume to wet microalgae weight varied from 8:1 to 2:1) were varied to investigate the microwave-assisted lipid transesterification with ethanol and isopropanol in wet microalgae cells.
To extract the resulted biodiesel after the microwave-assisted transesterification, hexane (16 mL) and water (16 mL) were added into the centrifuge tube and mixed with the cooled reactant through vigorous shaking of the centrifuge tube for 5 min. After the mixture was centrifuged, the resulted upper hexane layer was transferred into a pre-weighed glass vial and heated in a baking oven at 65 °C to regenerate the hexane. Crude biodiesel was then obtained and gravimetrically determined after the hexane regeneration.
2.3. Characterization of the lipid droplets in wet microalgae cells after transesterification
The microalgae cells before and after transesterification were dyed using Nile Red (9-diethylamino-5H-benzo[α]phenoxazine-5-one; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). The fluorescence of the lipid droplets was observed through an inverted microscope (TI-S; Nikon, Tokyo, Japan) equipped with a B-2A light filter (EX 450–490 nm) and an analysis software (NIS-ELEMENTS D) to evaluate the size changes of lipid droplets after transesterification [30]. The contact angle of hexane against fatty acid and fatty acid alkyl ester (FAAE) was measured using a contact angle tester (JC2000D; Powereach, Shanghai, China) to evaluate the polarity changes of lipid droplets after transesterification.
2.4. Determination of FAAE yield of lipid transesterification in wet microalgae and characterization of crude biodiesel
Wet microalgae biomass (∼2 g) was lyophilized to determine the FAAE yield of lipid transesterification in wet microalgae. The lyophilized microalgae biomass was reacted with 16 mL of alcohol with 3 vol.% of concentrated sulfuric acid in the microwave digestion system at a temperature of 90 °C for 30 min [31]. The obtained FAAE was subsequently extracted by hexane, as described in Section 2.2.
The obtained crude biodiesel samples were mixed with an internal standard (C19:0) and dissolved in the hexane for gas chromatograph analysis. A gas chromatograph (7890A GC; Agilent, Santa Clara, CA, USA) equipped with a flame ionization detector and an HP-INNOWax column (30 m × 320 μm × 0.25 μm; Agilent, Santa Clara, CA, USA) was employed to analyze the crude biodiesel samples [32]. The carrier gas for gas chromatograph analysis was He. The injection temperature and detector temperature of the gas chromatograph were set at 250 °C. The oven of the gas chromatograph was initially maintained at 150 °C for 1 min, and then heated to 200 °C at a heating rate of 15 °C/min. Subsequently, it was heated to 250 °C at a heating rate of 2 °C/min. Finally, the oven temperature was maintained at 250 °C for 5 min. A comparison of retention times and peak areas between the crude biodiesel samples and standards then gave the components and weight of FAAE contained in crude biodiesel. The FAAE yield of microwave-assisted lipid transesterification in wet microalgae was then calculated according to the following equation:
2.1. Materials
Bristol’s medium-cultivated Chlorella pyrenoidosa were used for the microwave-assisted lipid transesterification in microalgae cells [28]. A bioreactor with a volume of 2 L was pumped with air to cultivate C. pyrenoidosa for 15 days with illumination from an incandescent lamp (2500 lx, dark/light cycle: 12/12 h). The cultivated C. pyrenoidosa was dewatered by centrifugation (Beckman Avanti J26-XP, USA) at 8500 r/min for 10 min in individual centrifuge tubes to obtain microalgae paste (∼2 g) with a water content of 77 wt.%. The resulting microalgae paste was then stored at −20 °C until use. Commercial alcohol was used in this experiment because renewable alcohol produced through fermentation can be easily upgraded to analytical purity [29]. All reagents (i.e., hexane, ethanol, isopropanol, and sulfuric acid) were purchased from Sinopharm Chemical Reagent (Shanghai, China).
2.2. Microwave-assisted lipid transesterification with various alcohols in wet microalgae cells for biodiesel production
Microwave-assisted lipid transesterification with ethanol and isopropanol in wet microalgae cells was conducted in a WX-4000 microwave digestion system (2.45 GHz; Shanghai Yiyao Microwave Chemistry Company, Shanghai, China) [12]. The stored C. pyrenoidosa biomass (∼2 g) was thawed and then transferred into the 60 mL digestion reactor of the microwave digestion system. Ethanol and isopropanol with 3 vol.% of concentrated sulfuric acid were added into the reactor and mixed with the thawed C. pyrenoidosa biomass. The reactor was sealed, and the mixture in the digestion reactor was heated to a preset reaction temperature via microwave irradiation with a power output of 600 W. The power output of microwave irradiation was set at 500 W to maintain the mixture at the reaction temperature for the preset reaction time.
After the microwave-assisted lipid transesterification, the mixture was air-cooled to room temperature. The cooled mixture was then poured into a centrifuge tube. The reaction temperature (70 °C–110 °C), reaction time (2–30 min), and alcohol volume (ratio of alcohol volume to wet microalgae weight varied from 8:1 to 2:1) were varied to investigate the microwave-assisted lipid transesterification with ethanol and isopropanol in wet microalgae cells.
To extract the resulted biodiesel after the microwave-assisted transesterification, hexane (16 mL) and water (16 mL) were added into the centrifuge tube and mixed with the cooled reactant through vigorous shaking of the centrifuge tube for 5 min. After the mixture was centrifuged, the resulted upper hexane layer was transferred into a pre-weighed glass vial and heated in a baking oven at 65 °C to regenerate the hexane. Crude biodiesel was then obtained and gravimetrically determined after the hexane regeneration.
2.3. Characterization of the lipid droplets in wet microalgae cells after transesterification
The microalgae cells before and after transesterification were dyed using Nile Red (9-diethylamino-5H-benzo[α]phenoxazine-5-one; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). The fluorescence of the lipid droplets was observed through an inverted microscope (TI-S; Nikon, Tokyo, Japan) equipped with a B-2A light filter (EX 450–490 nm) and an analysis software (NIS-ELEMENTS D) to evaluate the size changes of lipid droplets after transesterification [30]. The contact angle of hexane against fatty acid and fatty acid alkyl ester (FAAE) was measured using a contact angle tester (JC2000D; Powereach, Shanghai, China) to evaluate the polarity changes of lipid droplets after transesterification.
2.4. Determination of FAAE yield of lipid transesterification in wet microalgae and characterization of crude biodiesel
Wet microalgae biomass (∼2 g) was lyophilized to determine the FAAE yield of lipid transesterification in wet microalgae. The lyophilized microalgae biomass was reacted with 16 mL of alcohol with 3 vol.% of concentrated sulfuric acid in the microwave digestion system at a temperature of 90 °C for 30 min [31]. The obtained FAAE was subsequently extracted by hexane, as described in Section 2.2.
The obtained crude biodiesel samples were mixed with an internal standard (C19:0) and dissolved in the hexane for gas chromatograph analysis. A gas chromatograph (7890A GC; Agilent, Santa Clara, CA, USA) equipped with a flame ionization detector and an HP-INNOWax column (30 m × 320 μm × 0.25 μm; Agilent, Santa Clara, CA, USA) was employed to analyze the crude biodiesel samples [32]. The carrier gas for gas chromatograph analysis was He. The injection temperature and detector temperature of the gas chromatograph were set at 250 °C. The oven of the gas chromatograph was initially maintained at 150 °C for 1 min, and then heated to 200 °C at a heating rate of 15 °C/min. Subsequently, it was heated to 250 °C at a heating rate of 2 °C/min. Finally, the oven temperature was maintained at 250 °C for 5 min. A comparison of retention times and peak areas between the crude biodiesel samples and standards then gave the components and weight of FAAE contained in crude biodiesel. The FAAE yield of microwave-assisted lipid transesterification in wet microalgae was then calculated according to the following equation:
0/5000
2. วิธี2.1. วัสดุของบริ cultivated กลาง Chlorella pyrenoidosa ถูกใช้สำหรับเพิ่มช่วยไมโครเวฟไขมันในเซลล์ microalgae [28] Bioreactor ด้วย 2 L ถูกสูบ ด้วยเครื่องปลูก C. pyrenoidosa 15 วันมีแสงสว่างจากหลอด incandescent มี (2500 lx วงจรมืด/ไฟ: h 12/12) Pyrenoidosa C. ปลูกถูก dewatered โดย centrifugation (Beckman เรียนโรส J26-XP สหรัฐอเมริกา) ที่ 8500 r/min สำหรับ 10 นาทีในเครื่องหมุนเหวี่ยงแต่ละหลอดสามารถวาง microalgae (∼2 g) กับปริมาณน้ำของ 77 wt.% แล้ววาง microalgae ผลลัพธ์ถูกเก็บที่ −20 ° C จนกว่าจะใช้ ธุรกิจแอลกอฮอล์ถูกใช้ในการทดลองนี้ เพราะทดแทนแอลกอฮอล์ผลิตหมักสามารถจะได้อัพเกรดความบริสุทธิ์วิเคราะห์ [29] Reagents ทั้งหมด (เช่น เฮกเซน เอทานอล isopropanol และกรดกำมะถัน) ที่ซื้อจาก Sinopharm เคมีรีเอเจนต์ (เซี่ยงไฮ้ จีน)2.2. ไมโครเวฟช่วยไขมันเพิ่ม ด้วย alcohols ต่าง ๆ ในเซลล์ microalgae เปียกสำหรับผลิตไบโอดีเซลวิธีเพิ่มไขมันช่วยไมโครเวฟ ด้วยเอทานอลและ isopropanol ในเซลล์เปียก microalgae ในระบบย่อยอาหารไมโครเวฟ WX 4000 (2.45 GHz บริษัทเคมีไมโครเวฟเยาช๊อป เซี่ยงไฮ้ จีนเซี่ยงไฮ้) [12] ชีวมวล pyrenoidosa C. เก็บไว้ (∼2 g) thawed แล้ว โอนย้ายไปยังระบบย่อยอาหาร 60 mL ของระบบย่อยอาหารไมโครเวฟ เอทานอลและ isopropanol ด้วย vol.% 3 ของกรดซัลฟิวริกเข้มข้นถูกเพิ่มเข้าไปในระบบ และผสมกับชีวมวล thawed C. pyrenoidosa เครื่องปฏิกรณ์ที่ถูกปิดผนึก และส่วนผสมในระบบย่อยอาหารถูกความร้อนอุณหภูมิปฏิกิริยาที่กำหนดล่วงหน้าได้อย่างง่าย ๆ ด้วยวิธีการฉายไมโครเวฟรังสีกับผลพลังงาน 600 ปริมาณ ผลผลิตพลังงานของวิธีการฉายรังสีของไมโครเวฟถูกตั้งค่า 500 W ให้รักษาส่วนผสมอุณหภูมิปฏิกิริยาสำหรับปฏิกิริยาเวลาล่วงหน้าหลังจากเพิ่มไขมันช่วยไมโครเวฟ ส่วนผสมถูก air-cooled กับอุณหภูมิห้อง ผสมเย็น ๆ ได้แล้ว poured ลงในหลอดเครื่องหมุนเหวี่ยง อุณหภูมิปฏิกิริยา (70 ° C-110 ° C), เวลาตอบสนอง (2-30 นาที), และปริมาณแอลกอฮอล์ (อัตราส่วนของปริมาณแอลกอฮอล์ฉี่ microalgae น้ำหนักแตกต่างกันจาก 8:1 2:1) ได้แตกต่างกันเพื่อตรวจสอบเพิ่มไขมันช่วยไมโครเวฟ ด้วยเอทานอลและ isopropanol ในเซลล์เปียก microalgaeการแยกไบโอดีเซล resulted หลังจากเพิ่มช่วยไมโครเวฟ เฮกเซน (16 mL) และน้ำ (16 mL) ถูกเพิ่มเข้าไปในท่อเครื่องหมุนเหวี่ยง แล้วผสมกับตัวทำปฏิกิริยาเย็น ๆ ผ่านคึกคักสั่นของท่อเครื่องหมุนเหวี่ยงใน 5 นาที หลังจากผสมได้ centrifuged ชั้นผลโพลีบนถูกซื้อคอนแทคแก้วก่อนชั่งน้ำหนัก และความร้อนในเตาอบที่ 65 ° C การสร้างโพลี น้ำมันไบโอดีเซลได้แล้ว และ gravimetrically กำหนดหลังจากฟื้นฟูเฮกเซน2.3 การจำแนกของหยดไขมันในเซลล์ microalgae เปียกหลังจากเพิ่มเซลล์ microalgae ก่อน และ หลังเพิ่มถูกย้อมสีไนล์เรด (9-diethylamino-5H-benzo[α]phenoxazine-5-one ใช้ Sigma-Aldrich, St. Louis, MO สหรัฐอเมริกา) Fluorescence ของหยดไขมันถูกตรวจสอบโดยใช้กล้องจุลทรรศน์กลับหัว (ตี้-S Nikon โตเกียว ญี่ปุ่น) พร้อมกับตัวกรองแสง B-2A (EX 450-490 nm) และซอฟต์แวร์วิเคราะห์ (D n คุณองค์ประกอบ) เพื่อประเมินการเปลี่ยนแปลงขนาดของหยดไขมันหลังจากเพิ่ม [30] มุมของเฮกเซนจากกรดไขมันและกรดไขมัน alkyl เอส (FAAE) ติดต่อที่วัดโดยใช้เครื่องวัดมุมติดต่อ (JC2000D Powereach เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) เพื่อประเมินการเปลี่ยนแปลงขั้วของหยดไขมันหลังจากเพิ่มขึ้น2.4 การกำหนด FAAE อัตราผลตอบแทนของการเพิ่มไขมันใน microalgae เปียกและสมบัติของไบโอดีเซลดิบชีวมวล microalgae เปียก (∼2 g) ถูก lyophilized เพื่อกำหนดผลผลิต FAAE ของเพิ่มไขมันใน microalgae เปียก ชีวมวล lyophilized microalgae เป็นปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นกับมล 16 ของแอลกอฮอล์ด้วย vol.% 3 ของกรดซัลฟิวริกเข้มข้นในระบบย่อยอาหารไมโครเวฟที่อุณหภูมิ 90 องศาเซลเซียสสำหรับ 30 นาที [31] FAAE ได้รับมาถูกสกัด ด้วยเฮกเซน ตามที่อธิบายไว้ในหัวข้อ 2.2ตัวอย่างไบโอดีเซลน้ำมันที่ได้รับได้กับมาตรฐานภายใน (C19:0) และละลายในเฮกเซนสำหรับการวิเคราะห์ก๊าซ chromatograph Chromatograph ก๊าซ (7890A GC Agilent ซานตาคลารา CA, USA) พร้อมกับจับการ ionization เปลวไฟและมี HP INNOWax คอลัมน์ (30 m × 320 μm × 0.25 μm Agilent ซานตาคลารา CA, USA) ได้รับการว่าจ้างการวิเคราะห์ตัวอย่างไบโอดีเซลดิบ [32] ก๊าซผู้ขนส่งสำหรับการวิเคราะห์ก๊าซ chromatograph ถูกเขา ฉีดอุณหภูมิและเครื่องตรวจจับอุณหภูมิของ chromatograph ก๊าซถูกตั้งไว้ที่ 250 องศาเซลเซียส เตาอบของ chromatograph ก๊าซถูกรักษาเริ่มต้นที่ 150 องศาเซลเซียสใน 1 นาที แล้ว ความร้อนถึง 200 ° C อัตราความร้อน 15 ° C/นาที ในเวลาต่อมา มันมีความร้อนถึง 250 ° C ในอัตรา 2 ° C/นาที ความร้อน สุดท้าย มีรักษาอุณหภูมิเตาอบที่ 250 ° C สำหรับ 5 นาที การรักษาเวลาและพื้นที่สูงระหว่างตัวอย่างไบโอดีเซลดิบและมาตรฐานเปรียบเทียบแล้วให้คอมโพเนนต์และน้ำหนักของ FAAE อยู่ในไบโอดีเซลดิบ ผลผลิต FAAE ของไขมันไมโครเวฟช่วยเพิ่มใน microalgae เปียกแล้วคำนวณตามสมการต่อไปนี้:
การแปล กรุณารอสักครู่..
2. วิธีการ
2.1 วัสดุบริสตอปลูกกลาง pyrenoidosa คลอเรลล่าที่ใช้ใน transesterification ไขมันไมโครเวฟช่วยในเซลล์สาหร่าย [28] เครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพที่มีปริมาณ 2 ลิตรสูบกับอากาศที่จะปลูกฝัง pyrenoidosa ซีเป็นเวลา 15 วันด้วยการส่องสว่างจากหลอดไฟ (ที่ 2500 LX มืด / รอบแสง: 12/12 ซ) เพาะปลูกซี pyrenoidosa ถูก dewatered โดยการหมุนเหวี่ยง (เบคค์ Avanti J26-XP, USA) ที่ 8,500 รอบ / นาทีเป็นเวลา 10 นาทีในหลอด centrifuge บุคคลที่จะได้รับสาหร่ายวาง (~2 กรัม) มีปริมาณน้ำ 77 น้ำหนักได้.% วางสาหร่ายที่เกิดขึ้นถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสจนถึงการใช้งาน เครื่องดื่มแอลกอฮอล์ในเชิงพาณิชย์ได้รับการใช้ในการทดลองนี้เพราะเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ทดแทนผลิตผ่านการหมักสามารถอัพเกรดได้อย่างง่ายดายเพื่อการวิเคราะห์ความบริสุทธิ์ [29] สารเคมีทุกชนิด (เช่นเฮกเซนเอทานอล isopropanol และกรดกำมะถัน) ที่ซื้อมาจาก Sinopharm สารเคมี (เซี่ยงไฮ้). 2.2 transesterification ไขมันไมโครเวฟช่วยด้วยแอลกอฮอล์ต่าง ๆ ในเซลล์สาหร่ายเปียกสำหรับการผลิตไบโอดีเซลtransesterification ไขมันไมโครเวฟช่วยด้วยเอทานอลและ isopropanol ในเซลล์สาหร่ายเปียกได้ดำเนินการในระบบการย่อยอาหารไมโครเวฟ WX-4000 (2.45 GHz; เซี่ยงไฮ้ Yiyao ไมโครเวฟเคมี บริษัท เซี่ยงไฮ้ จีน) [12] ที่เก็บไว้ชีวมวล pyrenoidosa C. (~2 ช) ถูกละลายแล้วย้ายเข้ามาในเครื่องปฏิกรณ์ย่อยอาหาร 60 มิลลิลิตรของระบบย่อยอาหารไมโครเวฟ เอทานอลและ isopropanol 3 ฉบับ.% ของกรดกำมะถันเข้มข้นถูกเพิ่มเข้าไปในเครื่องปฏิกรณ์และผสมกับละลายชีวมวล pyrenoidosa ซี เครื่องปฏิกรณ์ถูกปิดผนึกและส่วนผสมในเครื่องปฏิกรณ์ย่อยอาหารถูกความร้อนที่อุณหภูมิปฏิกิริยาที่ตั้งไว้ผ่านการฉายรังสีไมโครเวฟที่มีการส่งออกพลังงาน 600 ดับบลิวการส่งออกพลังงานของรังสีไมโครเวฟตั้งอยู่ที่ 500 W ส่วนผสมในการรักษาที่อุณหภูมิปฏิกิริยาสำหรับ เวลาปฏิกิริยาที่ตั้งไว้. หลังจากไมโครเวฟช่วย transesterification ไขมันผสมได้รับอากาศเย็นที่อุณหภูมิห้อง ส่วนผสมที่เย็นแล้วเทลงในหลอดหมุนเหวี่ยง อุณหภูมิปฏิกิริยา (70 ° C-110 ° C) เวลาปฏิกิริยา (2-30 นาที) และปริมาณเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ (อัตราส่วนของปริมาณแอลกอฮอล์เปียกน้ำหนักสาหร่ายแตกต่างกันจาก 8: 1 ถึง 2: 1) มีความแตกต่างกันในการตรวจสอบไมโครเวฟ transesterification ไขมัน -assisted กับเอทานอลและ isopropanol ในเซลล์สาหร่ายเปียก. เพื่อดึงไบโอดีเซลส่งผลให้หลังจาก transesterification ไมโครเวฟช่วยเฮกเซน (16 มิลลิลิตร) และน้ำ (16 มิลลิลิตร) ถูกเพิ่มลงในหลอด centrifuge และผสมกับสารตั้งต้นระบายความร้อนผ่านแข็งแรง สั่นของหลอดหมุนเหวี่ยงเป็นเวลา 5 นาที หลังจากที่ได้รับการผสมหมุนเหวี่ยงที่ส่งผลให้ชั้นบนเฮกเซนถูกย้ายเข้าไปในขวดแก้วก่อนชั่งน้ำหนักและให้ความร้อนในเตาอบที่ 65 ° C ถึงงอกเฮกเซน ไบโอดีเซลน้ำมันดิบที่ได้รับแล้วและกำหนด gravimetrically หลังจากการฟื้นฟูเฮกเซน. 2.3 ลักษณะของหยดไขมันในเซลล์สาหร่ายเปียกหลังจาก transesterification เซลล์สาหร่ายก่อนและหลังการ transesterification ถูกย้อมโดยใช้แม่น้ำไนล์เรด (9 diethylamino-5H-benzo [α] phenoxazine-5-หนึ่ง Sigma-Aldrich, เซนต์หลุยส์, สหรัฐอเมริกา). การเรืองแสงของหยดไขมันที่ได้รับการตั้งข้อสังเกตผ่านกล้องจุลทรรศน์คว่ำ (TI-S; Nikon, กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) พร้อมกับ B-2A กรองแสง (450-490 นาโนเมตร EX) และซอฟต์แวร์การวิเคราะห์ (NIS-องค์ประกอบ D) ในการประเมิน การเปลี่ยนแปลงขนาดของหยดไขมันหลังจาก transesterification [30] มุมติดต่อของเฮกเซนกับกรดไขมันและไขมันอัลคิลเอสเตอร์ของกรด (FAAE) ได้รับการวัดโดยใช้เครื่องวัดมุมสัมผัส. (JC2000D; Powereach, เซี่ยงไฮ้, จีน) ในการประเมินการเปลี่ยนแปลงขั้วของหยดไขมันหลังจาก transesterification 2.4 การกำหนดอัตราผลตอบแทนของ FAAE transesterification ไขมันในสาหร่ายเปียกและลักษณะของไบโอดีเซลน้ำมันดิบชีวมวลสาหร่ายเปียก (~2 ช) ได้รับการตรวจสอบแห้งเพื่อผลผลิต FAAE transesterification ของไขมันในสาหร่ายเปียก ชีวมวลสาหร่ายแห้งได้รับการตอบสนองด้วย 16 มิลลิลิตรของเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ที่มี 3 ฉบับ.% ของกรดกำมะถันเข้มข้นในระบบการย่อยอาหารไมโครเวฟที่อุณหภูมิ 90 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที [31] FAAE ได้ถูกสกัดเฮกเซนภายหลังจากที่กล่าวไว้ในมาตรา 2.2. ที่ได้รับตัวอย่างน้ำมันดิบไบโอดีเซลผสมกับมาตรฐานภายใน (C19: 0) และละลายในเฮกเซนสำหรับการวิเคราะห์ก๊าซ Chromatograph ก๊าซ Chromatograph (7890A GC; Agilent, ซานตาคลารา, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) ติดตั้งเครื่องตรวจจับไอออนไนซ์เปลวไฟและคอลัมน์ HP-INNOWax (30 เมตร× 320 ไมโครเมตร× 0.25 ไมครอน; Agilent, ซานตาคลารา, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) ถูกจ้างมาเพื่อ วิเคราะห์ตัวอย่างไบโอดีเซลน้ำมันดิบ [32] ก๊าซที่ให้บริการสำหรับการวิเคราะห์ก๊าซ Chromatograph เป็นเขา อุณหภูมิฉีดและอุณหภูมิของเครื่องตรวจจับก๊าซ Chromatograph ที่ถูกตั้งไว้ที่ 250 องศาเซลเซียส เตาอบของก๊าซ Chromatograph ที่ถูกเก็บรักษาไว้ในขั้นต้นที่ 150 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีและจากนั้นอุณหภูมิสูงถึง 200 ° C ที่อัตราความร้อน 15 องศาเซลเซียส / นาที ต่อจากนั้นก็ถูกความร้อนถึง 250 ° C ที่อัตราความร้อนของ 2 องศาเซลเซียส / นาที สุดท้ายอุณหภูมิเตาอบไว้ที่ 250 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที เปรียบเทียบเวลาการเก็บรักษาและพื้นที่จุดสูงสุดระหว่างตัวอย่างไบโอดีเซลน้ำมันดิบและมาตรฐานจากนั้นให้ส่วนประกอบและน้ำหนักของ FAAE ไบโอดีเซลที่มีอยู่ในน้ำมันดิบ ผลผลิต FAAE ไมโครเวฟช่วย transesterification ไขมันในสาหร่ายเปียกที่คำนวณได้จากนั้นไปตามสมการต่อไปนี้:
2.1 วัสดุบริสตอปลูกกลาง pyrenoidosa คลอเรลล่าที่ใช้ใน transesterification ไขมันไมโครเวฟช่วยในเซลล์สาหร่าย [28] เครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพที่มีปริมาณ 2 ลิตรสูบกับอากาศที่จะปลูกฝัง pyrenoidosa ซีเป็นเวลา 15 วันด้วยการส่องสว่างจากหลอดไฟ (ที่ 2500 LX มืด / รอบแสง: 12/12 ซ) เพาะปลูกซี pyrenoidosa ถูก dewatered โดยการหมุนเหวี่ยง (เบคค์ Avanti J26-XP, USA) ที่ 8,500 รอบ / นาทีเป็นเวลา 10 นาทีในหลอด centrifuge บุคคลที่จะได้รับสาหร่ายวาง (~2 กรัม) มีปริมาณน้ำ 77 น้ำหนักได้.% วางสาหร่ายที่เกิดขึ้นถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสจนถึงการใช้งาน เครื่องดื่มแอลกอฮอล์ในเชิงพาณิชย์ได้รับการใช้ในการทดลองนี้เพราะเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ทดแทนผลิตผ่านการหมักสามารถอัพเกรดได้อย่างง่ายดายเพื่อการวิเคราะห์ความบริสุทธิ์ [29] สารเคมีทุกชนิด (เช่นเฮกเซนเอทานอล isopropanol และกรดกำมะถัน) ที่ซื้อมาจาก Sinopharm สารเคมี (เซี่ยงไฮ้). 2.2 transesterification ไขมันไมโครเวฟช่วยด้วยแอลกอฮอล์ต่าง ๆ ในเซลล์สาหร่ายเปียกสำหรับการผลิตไบโอดีเซลtransesterification ไขมันไมโครเวฟช่วยด้วยเอทานอลและ isopropanol ในเซลล์สาหร่ายเปียกได้ดำเนินการในระบบการย่อยอาหารไมโครเวฟ WX-4000 (2.45 GHz; เซี่ยงไฮ้ Yiyao ไมโครเวฟเคมี บริษัท เซี่ยงไฮ้ จีน) [12] ที่เก็บไว้ชีวมวล pyrenoidosa C. (~2 ช) ถูกละลายแล้วย้ายเข้ามาในเครื่องปฏิกรณ์ย่อยอาหาร 60 มิลลิลิตรของระบบย่อยอาหารไมโครเวฟ เอทานอลและ isopropanol 3 ฉบับ.% ของกรดกำมะถันเข้มข้นถูกเพิ่มเข้าไปในเครื่องปฏิกรณ์และผสมกับละลายชีวมวล pyrenoidosa ซี เครื่องปฏิกรณ์ถูกปิดผนึกและส่วนผสมในเครื่องปฏิกรณ์ย่อยอาหารถูกความร้อนที่อุณหภูมิปฏิกิริยาที่ตั้งไว้ผ่านการฉายรังสีไมโครเวฟที่มีการส่งออกพลังงาน 600 ดับบลิวการส่งออกพลังงานของรังสีไมโครเวฟตั้งอยู่ที่ 500 W ส่วนผสมในการรักษาที่อุณหภูมิปฏิกิริยาสำหรับ เวลาปฏิกิริยาที่ตั้งไว้. หลังจากไมโครเวฟช่วย transesterification ไขมันผสมได้รับอากาศเย็นที่อุณหภูมิห้อง ส่วนผสมที่เย็นแล้วเทลงในหลอดหมุนเหวี่ยง อุณหภูมิปฏิกิริยา (70 ° C-110 ° C) เวลาปฏิกิริยา (2-30 นาที) และปริมาณเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ (อัตราส่วนของปริมาณแอลกอฮอล์เปียกน้ำหนักสาหร่ายแตกต่างกันจาก 8: 1 ถึง 2: 1) มีความแตกต่างกันในการตรวจสอบไมโครเวฟ transesterification ไขมัน -assisted กับเอทานอลและ isopropanol ในเซลล์สาหร่ายเปียก. เพื่อดึงไบโอดีเซลส่งผลให้หลังจาก transesterification ไมโครเวฟช่วยเฮกเซน (16 มิลลิลิตร) และน้ำ (16 มิลลิลิตร) ถูกเพิ่มลงในหลอด centrifuge และผสมกับสารตั้งต้นระบายความร้อนผ่านแข็งแรง สั่นของหลอดหมุนเหวี่ยงเป็นเวลา 5 นาที หลังจากที่ได้รับการผสมหมุนเหวี่ยงที่ส่งผลให้ชั้นบนเฮกเซนถูกย้ายเข้าไปในขวดแก้วก่อนชั่งน้ำหนักและให้ความร้อนในเตาอบที่ 65 ° C ถึงงอกเฮกเซน ไบโอดีเซลน้ำมันดิบที่ได้รับแล้วและกำหนด gravimetrically หลังจากการฟื้นฟูเฮกเซน. 2.3 ลักษณะของหยดไขมันในเซลล์สาหร่ายเปียกหลังจาก transesterification เซลล์สาหร่ายก่อนและหลังการ transesterification ถูกย้อมโดยใช้แม่น้ำไนล์เรด (9 diethylamino-5H-benzo [α] phenoxazine-5-หนึ่ง Sigma-Aldrich, เซนต์หลุยส์, สหรัฐอเมริกา). การเรืองแสงของหยดไขมันที่ได้รับการตั้งข้อสังเกตผ่านกล้องจุลทรรศน์คว่ำ (TI-S; Nikon, กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) พร้อมกับ B-2A กรองแสง (450-490 นาโนเมตร EX) และซอฟต์แวร์การวิเคราะห์ (NIS-องค์ประกอบ D) ในการประเมิน การเปลี่ยนแปลงขนาดของหยดไขมันหลังจาก transesterification [30] มุมติดต่อของเฮกเซนกับกรดไขมันและไขมันอัลคิลเอสเตอร์ของกรด (FAAE) ได้รับการวัดโดยใช้เครื่องวัดมุมสัมผัส. (JC2000D; Powereach, เซี่ยงไฮ้, จีน) ในการประเมินการเปลี่ยนแปลงขั้วของหยดไขมันหลังจาก transesterification 2.4 การกำหนดอัตราผลตอบแทนของ FAAE transesterification ไขมันในสาหร่ายเปียกและลักษณะของไบโอดีเซลน้ำมันดิบชีวมวลสาหร่ายเปียก (~2 ช) ได้รับการตรวจสอบแห้งเพื่อผลผลิต FAAE transesterification ของไขมันในสาหร่ายเปียก ชีวมวลสาหร่ายแห้งได้รับการตอบสนองด้วย 16 มิลลิลิตรของเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ที่มี 3 ฉบับ.% ของกรดกำมะถันเข้มข้นในระบบการย่อยอาหารไมโครเวฟที่อุณหภูมิ 90 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที [31] FAAE ได้ถูกสกัดเฮกเซนภายหลังจากที่กล่าวไว้ในมาตรา 2.2. ที่ได้รับตัวอย่างน้ำมันดิบไบโอดีเซลผสมกับมาตรฐานภายใน (C19: 0) และละลายในเฮกเซนสำหรับการวิเคราะห์ก๊าซ Chromatograph ก๊าซ Chromatograph (7890A GC; Agilent, ซานตาคลารา, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) ติดตั้งเครื่องตรวจจับไอออนไนซ์เปลวไฟและคอลัมน์ HP-INNOWax (30 เมตร× 320 ไมโครเมตร× 0.25 ไมครอน; Agilent, ซานตาคลารา, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) ถูกจ้างมาเพื่อ วิเคราะห์ตัวอย่างไบโอดีเซลน้ำมันดิบ [32] ก๊าซที่ให้บริการสำหรับการวิเคราะห์ก๊าซ Chromatograph เป็นเขา อุณหภูมิฉีดและอุณหภูมิของเครื่องตรวจจับก๊าซ Chromatograph ที่ถูกตั้งไว้ที่ 250 องศาเซลเซียส เตาอบของก๊าซ Chromatograph ที่ถูกเก็บรักษาไว้ในขั้นต้นที่ 150 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีและจากนั้นอุณหภูมิสูงถึง 200 ° C ที่อัตราความร้อน 15 องศาเซลเซียส / นาที ต่อจากนั้นก็ถูกความร้อนถึง 250 ° C ที่อัตราความร้อนของ 2 องศาเซลเซียส / นาที สุดท้ายอุณหภูมิเตาอบไว้ที่ 250 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที เปรียบเทียบเวลาการเก็บรักษาและพื้นที่จุดสูงสุดระหว่างตัวอย่างไบโอดีเซลน้ำมันดิบและมาตรฐานจากนั้นให้ส่วนประกอบและน้ำหนักของ FAAE ไบโอดีเซลที่มีอยู่ในน้ำมันดิบ ผลผลิต FAAE ไมโครเวฟช่วย transesterification ไขมันในสาหร่ายเปียกที่คำนวณได้จากนั้นไปตามสมการต่อไปนี้:
การแปล กรุณารอสักครู่..
2 . 2.1 วิธีการ
. วัสดุ
Bristol ปานกลางปลูกสาหร่ายไพรีน ด์โดซ่าถูกใช้เพื่อการศึกษาปฏิกิริยาทรานส์เอสเทอริฟิเคช microwave-assisted ไขมันในสาหร่ายเซลล์ [ 28 ] ถังปฏิกรณ์ชีวภาพที่มีปริมาณ 2 ลิตร สูบกับเครื่องปลูกซีไพรีน ด์โดซ่า เป็นเวลา 15 วัน กับแสงสว่างจากหลอดไฟฟ้า ( 2500 LX มืด / แสงรอบ 12 / 12 ชั่วโมง ) ใช้ Cไพรีน ด์โดซ่าเป็น dewatered โดยการเหวี่ยงแยก ( แบคแมนลุกขึ้น j26-xp สหรัฐอเมริกา ) ที่ 8500 r / min สำหรับ 10 นาทีในแต่ละหลอด centrifuge เพื่อขอรับเลี้ยงสาหร่ายวาง ( ∼ 2 กรัม ) มีปริมาณน้ำร้อยละ 77 % ส่งผลให้สาหร่ายขนาดเล็กวางแล้วเก็บไว้ที่ 20 ° C −จนใช้แอลกอฮอล์ที่ใช้ในการทดลองเชิงพาณิชย์เพราะแอลกอฮอล์ทดแทนผลิตโดยการหมักสามารถอัพเกรดความบริสุทธิ์วิเคราะห์ [ 29 ] ทั้งหมดสารเคมี ( เช่น เฮกเซน , เอทานอล , ไอโซโพรพานอล และกรดซัลฟูริค ) ซื้อจาก sinopharm สารเคมี ( เซี่ยงไฮ้ , จีน ) .
. .ไมโครเวฟกับแอลกอฮอล์ไขมันกระบวนการทรานส์เอสเทอริฟิเคชั่นต่าง ๆในเซลล์สาหร่ายเปียกเพื่อผลิตไบโอดีเซล
ไมโครเวฟด้วยเอทานอล และไอโซโพรพานอลในกระบวนการทรานส์เอสเทอริฟิเคชั่นในเซลล์สาหร่ายเปียกดำเนินการใน wx-4000 ไมโครเวฟระบบการย่อยอาหาร ( 2.45 GHz ; yiyao ไมโครเวฟเคมี บริษัท เซี่ยงไฮ้ , เซี่ยงไฮ้ , จีน ) [ 12 ] เก็บ Cไพรีน ด์โดซ่า ชีวมวล ( ∼ 2 กรัม ) ละลายแล้วโอนเข้ามา 60 มล. การย่อยเครื่องปฏิกรณ์ระบบการย่อยอาหารไมโครเวฟ . เอทานอล และไอโซโพรพานอล 3 . % ของกรดซัลฟิวริกเข้มข้นถูกเพิ่มลงในถังผสมละลายซีไพรีน ด์โดซ่า ชีวมวล เครื่องปฏิกรณ์ถูกประทับตราและผสมในระบบเครื่องปฏิกรณ์แบบอุ่นให้อุณหภูมิที่ตั้งไว้ผ่านไมโครเวฟ รังสีที่มีพลังงาน 600 W . พลังงานของรังสีไมโครเวฟ ตั้งไว้ที่ 500 W เพื่อรักษาผสมที่อุณหภูมิในเวลาที่ตั้งไว้
หลังจาก microwave-assisted ไขมันกระบวนการทรานส์เอสเทอริฟิเคชั่น ผสมเป็นระบายความร้อนด้วยอากาศที่อุณหภูมิห้อง .เย็นผสมแล้วเทลงในเครื่องหลอด อุณหภูมิ 70 องศา C – 110 ° C ) , เวลาปฏิกิริยา ( 2 – 30 นาที ) และปริมาณแอลกอฮอล์ ( อัตราส่วนของปริมาณแอลกอฮอล์เปียกสาหร่ายขนาดเล็กน้ำหนักที่แตกต่างกันจาก 1 ไป 2 : 1 ) ได้หลากหลาย เพื่อศึกษากระบวนการทรานส์เอสเทอริฟิเคชั่นกับเอทานอล และไอโซโพรพานอล microwave-assisted ไขมันในเซลล์สาหร่ายเปียก
สารสกัดจากผลการศึกษาปฏิกิริยาทรานส์เอสเทอริฟิเคช microwave-assisted ไบโอดีเซล หลังจาการ ( 16 ml ) และน้ำ ( 16 ml ) ถูกเพิ่มลงใน centrifuge หลอดและผสมกับน้ำเย็นผ่านจับมือแข็งแรงของ centrifuge หลอด 5 นาทีหลังไฟฟ้าผสม ,ผลคือ เฮกเซนบนชั้นถ่ายโอนลงในขวดแก้วก่อนชั่ง และอุ่นในเตาอบที่อุณหภูมิ 65 องศา C การสร้างฤทธิ์ . ดิบไบโอดีเซลก็จะได้ gravimetrically กำหนดหลังจากที่เฮกเซนงอก
2.3 คุณสมบัติของไขมันพบในเซลล์สาหร่ายเปียก
หลังจากกระบวนการทรานส์เอสเทอริฟิเคชั่นโดยสาหร่ายเซลล์ก่อนและหลังการใช้กระบวนการทรานส์เอสเทอริฟิเคชั่นถูกย้อมสีไนล์เรด ( 9-diethylamino-5h-benzo [ α ] phenoxazine-5-one ; ซิกม่า Aldrich St . Louis , MO , USA ) เรืองแสงของไขมันพบกลับพบผ่านกล้องจุลทรรศน์ ( ti-s ; Nikon , โตเกียว
. วัสดุ
Bristol ปานกลางปลูกสาหร่ายไพรีน ด์โดซ่าถูกใช้เพื่อการศึกษาปฏิกิริยาทรานส์เอสเทอริฟิเคช microwave-assisted ไขมันในสาหร่ายเซลล์ [ 28 ] ถังปฏิกรณ์ชีวภาพที่มีปริมาณ 2 ลิตร สูบกับเครื่องปลูกซีไพรีน ด์โดซ่า เป็นเวลา 15 วัน กับแสงสว่างจากหลอดไฟฟ้า ( 2500 LX มืด / แสงรอบ 12 / 12 ชั่วโมง ) ใช้ Cไพรีน ด์โดซ่าเป็น dewatered โดยการเหวี่ยงแยก ( แบคแมนลุกขึ้น j26-xp สหรัฐอเมริกา ) ที่ 8500 r / min สำหรับ 10 นาทีในแต่ละหลอด centrifuge เพื่อขอรับเลี้ยงสาหร่ายวาง ( ∼ 2 กรัม ) มีปริมาณน้ำร้อยละ 77 % ส่งผลให้สาหร่ายขนาดเล็กวางแล้วเก็บไว้ที่ 20 ° C −จนใช้แอลกอฮอล์ที่ใช้ในการทดลองเชิงพาณิชย์เพราะแอลกอฮอล์ทดแทนผลิตโดยการหมักสามารถอัพเกรดความบริสุทธิ์วิเคราะห์ [ 29 ] ทั้งหมดสารเคมี ( เช่น เฮกเซน , เอทานอล , ไอโซโพรพานอล และกรดซัลฟูริค ) ซื้อจาก sinopharm สารเคมี ( เซี่ยงไฮ้ , จีน ) .
. .ไมโครเวฟกับแอลกอฮอล์ไขมันกระบวนการทรานส์เอสเทอริฟิเคชั่นต่าง ๆในเซลล์สาหร่ายเปียกเพื่อผลิตไบโอดีเซล
ไมโครเวฟด้วยเอทานอล และไอโซโพรพานอลในกระบวนการทรานส์เอสเทอริฟิเคชั่นในเซลล์สาหร่ายเปียกดำเนินการใน wx-4000 ไมโครเวฟระบบการย่อยอาหาร ( 2.45 GHz ; yiyao ไมโครเวฟเคมี บริษัท เซี่ยงไฮ้ , เซี่ยงไฮ้ , จีน ) [ 12 ] เก็บ Cไพรีน ด์โดซ่า ชีวมวล ( ∼ 2 กรัม ) ละลายแล้วโอนเข้ามา 60 มล. การย่อยเครื่องปฏิกรณ์ระบบการย่อยอาหารไมโครเวฟ . เอทานอล และไอโซโพรพานอล 3 . % ของกรดซัลฟิวริกเข้มข้นถูกเพิ่มลงในถังผสมละลายซีไพรีน ด์โดซ่า ชีวมวล เครื่องปฏิกรณ์ถูกประทับตราและผสมในระบบเครื่องปฏิกรณ์แบบอุ่นให้อุณหภูมิที่ตั้งไว้ผ่านไมโครเวฟ รังสีที่มีพลังงาน 600 W . พลังงานของรังสีไมโครเวฟ ตั้งไว้ที่ 500 W เพื่อรักษาผสมที่อุณหภูมิในเวลาที่ตั้งไว้
หลังจาก microwave-assisted ไขมันกระบวนการทรานส์เอสเทอริฟิเคชั่น ผสมเป็นระบายความร้อนด้วยอากาศที่อุณหภูมิห้อง .เย็นผสมแล้วเทลงในเครื่องหลอด อุณหภูมิ 70 องศา C – 110 ° C ) , เวลาปฏิกิริยา ( 2 – 30 นาที ) และปริมาณแอลกอฮอล์ ( อัตราส่วนของปริมาณแอลกอฮอล์เปียกสาหร่ายขนาดเล็กน้ำหนักที่แตกต่างกันจาก 1 ไป 2 : 1 ) ได้หลากหลาย เพื่อศึกษากระบวนการทรานส์เอสเทอริฟิเคชั่นกับเอทานอล และไอโซโพรพานอล microwave-assisted ไขมันในเซลล์สาหร่ายเปียก
สารสกัดจากผลการศึกษาปฏิกิริยาทรานส์เอสเทอริฟิเคช microwave-assisted ไบโอดีเซล หลังจาการ ( 16 ml ) และน้ำ ( 16 ml ) ถูกเพิ่มลงใน centrifuge หลอดและผสมกับน้ำเย็นผ่านจับมือแข็งแรงของ centrifuge หลอด 5 นาทีหลังไฟฟ้าผสม ,ผลคือ เฮกเซนบนชั้นถ่ายโอนลงในขวดแก้วก่อนชั่ง และอุ่นในเตาอบที่อุณหภูมิ 65 องศา C การสร้างฤทธิ์ . ดิบไบโอดีเซลก็จะได้ gravimetrically กำหนดหลังจากที่เฮกเซนงอก
2.3 คุณสมบัติของไขมันพบในเซลล์สาหร่ายเปียก
หลังจากกระบวนการทรานส์เอสเทอริฟิเคชั่นโดยสาหร่ายเซลล์ก่อนและหลังการใช้กระบวนการทรานส์เอสเทอริฟิเคชั่นถูกย้อมสีไนล์เรด ( 9-diethylamino-5h-benzo [ α ] phenoxazine-5-one ; ซิกม่า Aldrich St . Louis , MO , USA ) เรืองแสงของไขมันพบกลับพบผ่านกล้องจุลทรรศน์ ( ti-s ; Nikon , โตเกียว
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- Answer:When there are few other users, t
- I haven't my class.
- numerous
- Students Who are personally Creative
- It's really tight with a double penetrat
- นอนกอดหมอน ถ้ากอดคุณคงหลับสบาย
- Sorry I do not speak English fluently.
- Answer:When there are few other users, t
- จึงทำให้เกิดปัญหาบนท้องถนน คือจราจรติดขั
- สนใจที่ครูสอนในคาบ
- Miltiply by the Reciprocal
- A:สวัสดี ฉันชื่อ จิดาภา แล้วคุณหล่ะ? B:ส
- ตัวยาบรรจุในขวด 10 ml. มันสามารถใช้ได้นา
- สวัสดีตอนกลางคืน
- vigorously stirring of NBR latex and CNs
- observation process
- เพราะการเดินทางนั้นต้องใช้กระเป๋าเป้ที่ห
- ได้รู้คำศัพท์ใหม่ๆมากขึ้น
- ฉันก็หวังว่าคุณจะรอฉันได้
- เพราะเราชอบประวัติศาสตร์เหมือนกัน
- such as that of Chinese and Japanese whe
- ฉันไปเล่นฟุตบอลกับเพื่อนทุกวัน
- จึงทำให้เกิดปัญหาบนท้องถนน คือจราจรติดขั
- Tasmania is in Australia.mostly area cov
