Ribonuclease U2, secreted by the sm

Ribonuclease U2, secreted by the smut fungus Ustilago sphaerogena, is a cyclizing ribonuclease that displays a rather unusual specificity within the group of microbial extracellular RNases, best represented by RNase T1. Superposition of the three-dimensional structures of RNases T1 and U2 suggests that the RNase U2 His 101 would be the residue equivalent to the RNase T1 catalytically essential His 92. RNase U2 contains three disulfide bridges but only two of them are conserved among the family of fungal extracellular RNases. The non-conserved disulfide bond is established between Cys residues 1 and 54. Mispairing of the disulfide network due to the presence of two consecutive Cys residues (54 and 55) has been invoked to explain the presence of wrongly folded RNase U2 species when produced in Pichia pastoris. In order to study both hypotheses, the RNase U2 H101Q and C1/54S variants have been produced, purified, and characterized. The results obtained support the major conclusion that His 101 is required for proper protein folding when secreted by the yeast P. pastoris. On the other hand, substitution of the first Cys residue for Ser results in a mutant version which is more efficiently processed in terms of a more complete removal of the yeast α-factor signal peptide. In addition, it has been shown that elimination of the Cys 1–Cys 54 disulfide bridge does not interfere with RNase U2 proper folding, generating a natively folded but much less stable protein.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Ribonuclease U2, secreted โดย smut เชื้อรา Ustilago sphaerogena, ribonuclease cyclizing ที่แสดง specificity ค่อนข้างผิดปกติภายในกลุ่มของจุลินทรีย์ RNases extracellular แสดง โดย RNase T1 ได้ Superposition ของโครงสร้างสามมิติของ RNases T1 และ U2 แนะนำว่า 101 พระของ U2 RNase จะตกค้างเท่ากับ RNase T1 92 catalytically สำคัญของเขา RNase U2 ประกอบด้วยสามสะพานไดซัลไฟด์ แต่เพียงสองของพวกเขาจะอยู่ในหมู่ของ extracellular RNases เชื้อรา พันธะไดซัลไฟด์อยู่ไม่สำเร็จระหว่าง Cys ตก 1 และ 54 Mispairing ของเครือข่ายไดซัลไฟด์เนื่องจากของสองต่อเนื่อง Cys ตก (54 และ 55) มีการเรียกการอธิบายของสปีชีส์ RNase U2 พับผิดเมื่อผลิตใน Pichia pastoris เพื่อศึกษาสมมุติฐานทั้ง ตัวแปร RNase U2 H101Q และ C1/54S ได้ผลิต บริสุทธิ์ และลักษณะการ ผลที่ได้รับสนับสนุนข้อสรุปสำคัญที่ 101 พระจะต้องพับเมื่อ secreted โดยยีสต์ P. pastoris โปรตีนที่เหมาะสม บนมืออื่น ๆ ผลของสารตกค้าง Cys แรก Ser ผลในรุ่นกลายพันธุ์ซึ่งจะถูกประมวลผลในด้านลบแก่ของเพปไทด์สัญญาณαปัจจัยยีสต์ได้อย่างมีประสิทธิภาพ นอกจากนี้ มันได้รับการแสดงที่ตัดออกของ Cys 1 – Cys 54 ไดซัลไฟด์บริดจ์ไม่รบกวน RNase U2 เหมาะสมพับ สร้างโปรตีนวิธีพับ แต่มั่นคงมากน้อย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Ribonuclease U2, หลั่งจากเชื้อรา Ustilago เขม่า sphaerogena เป็น ribonuclease cyclizing ที่แสดงความจำเพาะค่อนข้างผิดปกติภายในกลุ่มของ RNases สารจุลินทรีย์ที่เป็นตัวแทนที่ดีที่สุดโดย RNase T1 การทับซ้อนของโครงสร้างสามมิติของ RNases T1 และ U2 แสดงให้เห็นว่า RNase U2 101 ของเขาจะเทียบเท่าสารตกค้างที่จะ RNase T1 สำคัญของตัวเร่งปฏิกิริยา 92. RNase U2 มีสามสะพานซัลไฟด์ แต่มีเพียงสองของพวกเขาจะอนุรักษ์ในหมู่ครอบครัว RNases extracellular เชื้อรา ไม่อนุรักษ์พันธบัตรซัลไฟด์ที่จะจัดตั้งขึ้นระหว่างตกค้าง Cys ที่ 1 และ 54. Mispairing ของเครือข่ายซัลไฟด์เนื่องจากการปรากฏตัวของสองตกค้าง Cys ติดต่อกัน (54 และ 55) ได้รับการเรียกที่จะอธิบายการปรากฏตัวของพับผิด RNase U2 ชนิดเมื่อผลิตใน Pichia pastoris เพื่อการศึกษาทั้งสมมติฐาน H101Q RNase U2 และ C1 / 54S สายพันธุ์ได้รับการผลิตบริสุทธิ์และโดดเด่น ผลที่ได้รับการสนับสนุนข้อสรุปที่สำคัญที่ 101 ของเขาเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการพับโปรตีนที่เหมาะสมเมื่อหลั่งจากยีสต์ P. pastoris ในทางตรงกันข้ามการแทนที่ของสารตกค้าง Cys แรกสำหรับ Ser ผลในรุ่นกลายพันธุ์ที่มีการประมวลผลได้อย่างมีประสิทธิภาพมากขึ้นในแง่ของการกำจัดที่สมบูรณ์ของยีสต์αปัจจัยสัญญาณเปปไทด์ นอกจากนี้ยังได้รับการแสดงการกำจัดของ Cys 1 Cys 54 สะพานซัลไฟด์ที่ไม่ได้ยุ่งเกี่ยวกับการพับ RNase U2 ที่เหมาะสมในการสร้างโปรตีนพับกำเนิด แต่มีเสถียรภาพมากน้อย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ไรโบนิวคลีเ U2 , หลั่งโดยเชื้อรา ustilago ST sphaerogena เป็น cyclizing ไรโบนิวคลีเที่แสดงความจำเพาะมากกว่าปกติภายในกลุ่มของจุลินทรีย์ที่มี rnases ที่ดีที่สุด แสดงโดย เลส T1 .รวมโครงสร้างสามมิติของ rnases T1 และ U2 U2 ของเขาแสดงให้เห็นว่าเลส 101 จะเป็นกาก เทียบเท่ากับเลส T1 catalytically จำเป็นของเขา 92 เลส U2 มีไดสะพานสาม แต่ทั้งสองของพวกเขาเป็นป่าสงวนของครอบครัวของเชื้อรา และ rnases . ไม่ใช่อนุรักษ์ พุทธชาติ ก่อตั้งขึ้นระหว่างภาวะตกค้าง 1 54mispairing ของไดเครือข่ายจากการติดต่อกัน 2 ภาวะตกค้าง ( 54 และ 55 ) ได้รับการเรียกใช้เพื่ออธิบายการปรากฏตัวของผิดพับเลส U2 ชนิดเมื่อผลิตใน pichia pastoris . เพื่อศึกษาสมมติฐาน , U2 และเลส h101q C1 / 54s สายพันธุ์ได้รับการผลิตบริสุทธิ์และศึกษาคุณสมบัติผลลัพธ์ที่ได้สนับสนุนข้อสรุปที่สำคัญของเขา 101 เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการพับที่เหมาะสมโปรตีนเมื่อหลั่งโดยยีสต์หน้า pastoris . บนมืออื่น ๆ , การใช้กากภาวะแรกเซอร์ผลในรุ่นกลายพันธุ์ ซึ่งมีประสิทธิภาพประมวลผลในแง่ของการกำจัดที่สมบูรณ์มากขึ้นของยีสต์แอลฟาเปปไทด์สัญญาณด้าน นอกจากนี้จะได้รับการแสดงให้เห็นว่าการของภาวะ 1 –ภาวะ 54 เอราวัณไม่ได้ยุ่งเกี่ยวกับ U2 ที่เหมาะสมเลสพับสร้าง natively พับแต่น้อยมากที่มีเสถียรภาพของโปรตีน