The lipBL gene was PCR-amplified fr

The lipBL gene was PCR-amplified from the pFP plasmid/vector using primers BL7SIF/BL7HdIIIR2 to introduce SacI and HindIII sites at the 59 and 39 ends of the gene, respectively. The PCR product and the pET28b+ plasmid were hydrolysed with SacI and HindIII restriction endonucleases,
followed by ligation, to yield the pET-LipBL expression vector. With this approach, the lipase gene coding sequence was fused, in-frame, to a coding sequence for a His6-tag, thereby allowing
overexpression of C-terminal His6-tagged LipBL. Gene expression in pET-LipBL was under the control of a T7 promoter regulated by IPTG-inducible T7 RNA polymerase.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ยีน lipBL ถูกขยาย PCR จาก plasmid/เวกเตอร์ pFP ที่ใช้ไพรเมอร์ BL7SIF/BL7HdIIIR2 เพื่อแนะนำเว็บไซต์ SacI และ HindIII ที่ปลายของยีน 59 และ 39 ตามลำดับ ผลิตภัณฑ์ PCR และ pET28b + plasmid ถูกย่อย ด้วย SacI และ HindIII endonucleases จำกัดตาม ด้วย ligation ให้เวกเตอร์นิพจน์ LipBL สัตว์เลี้ยง ด้วยวิธีนี้ การเข้ารหัสลำดับยีนเอนไซม์ไลเปสที่ถูกหลอมรวม ในภาพ การลำดับการเขียนโค้ดสำหรับ His6-แท็ก จึงการแสดงออกของอาคารผู้โดยสาร C แท็ก His6 LipBL แสดงออกของยีนในสัตว์เลี้ยง-LipBL แก้ไขภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ T7 ที่ควบคุม โดย IPTG inducible T7 RNA พอลิเมอเรส

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ยีน lipBL ถูก PCR-amplified จากพลาสมิด PFP / เวกเตอร์โดยใช้ไพรเมอร์ BL7SIF / BL7HdIIIR2 จะแนะนำ SACI และ HindIII เว็บไซต์ที่ 59 และ 39 ปลายของยีนตามลำดับ ผลิตภัณฑ์ PCR และ pET28b + พลาสมิดที่ถูกย่อยด้วย SACI และ HindIII endonucleases ข้อ จำกัด
ตามด้วย ligation, เพื่อให้การแสดงออกเวกเตอร์สำหรับผู้รักสัตว์ LipBL ด้วยวิธีการนี้เอนไซม์ไลเปสยีนเข้ารหัสลำดับถูกหลอมรวมในกรอบลำดับการเข้ารหัสสำหรับ His6 แท็กจึงทำให้
แสดงออกของ C-ขั้ว LipBL His6 ที่ติดแท็ก การแสดงออกของยีนในสัตว์เลี้ยง LipBL ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ T7 ควบคุมโดย IPTG-inducible โพลิเมอร์ T7 อาร์เอ็นเอ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การ lipbl PCR ของยีนจาก PFP พลาส / เวกเตอร์ใช้ไพรเมอร์ bl7sif / bl7hdiiir2 แนะนําซาซิ - เว็บไซต์และที่ 59 39 ปลายของยีนตามลำดับ การตรวจสินค้า และ pet28b + พลาสมิดที่ถูกกับซาซี - สงบเงียบและข้อ จำกัด ,ตามด้วย Ligation เพื่อผลผลิตสัตว์เลี้ยง lipbl การแสดงออกของเวกเตอร์ ด้วยวิธีนี้ , ไลเปสยีน ลำดับรหัสผสม ในกรอบ ให้รหัสลำดับสำหรับ his6 จึงอนุญาตให้แท็กซึ่ง overexpression ของ his6 แท็ก lipbl . การแสดงออกของยีนใน lipbl สัตว์เลี้ยงอยู่ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ inducible * * 3 * * 3 ควบคุมโดยเอนไซม์อาร์เอ็นเอพอลิเมอเรส .