Enrichment culture for host and vir

Enrichment culture for host and virus isolation—Samples collected
either in anaerobic tubes or filled centrifuge tubes are
diluted 1:50 or 1:100 in Sulfolobus growth medium (Zillig et al.
1994) containing either yeast extract (0.1% w/v) and sucrose
(0.2% w/v) as carbon sources or Tryptone (0.2% w/v) in longnecked
Erlenmeyer flasks (see Fig. 1B inset), and incubated at
80°C with shaking (150 rpm) for up to 2 weeks. The salts in
Sulfolobus growth medium are, per liter: 3 g (NH4)2SO4, 0.5 g
K2HPO4 × 3 H2O, 0.1 g KCl, 0.5 g MgSO4 × 7 H2O, 0.01 g
Ca(NO3)2 × 4 H2O, 1.8 mg MnCl2 × 4 H2O, 4.5 mg Na2B4O7 ×
10 H2O, 0.22 mg ZnSO4 × 7 H2O, 0.05 mg CuCl2 × 2 H2O, 0.03
mg Na2MoO4 × 2 H2O, 0.03 mg VOSO4 × 5 H2O, 0.01 mg
CoSO4 × 7 H2O. The medium was buffered with 0.7 g glycine
per liter and the pH was adjusted to pH 3–3.5 with 1:2 diluted
sulfuric acid. For long-term 80°C growth, our favorite bath liquid
is PEG 400, which is a noncorrosive, nontoxic, water soluble
compound that does not evaporate (see Fig. 1B); mineral
oil and water can be used as bath liquid but are suboptimal
due to cleanup and evaporation, respectively. When growth is
detected by either an increase in turbidity or production of a
characteristic “damp sock” odor (W. Zillig pers. comm.), samples
are plated on Gelrite® plates (see below and Fig. lC), rediluted
1:50, and screened for VLP production by a spot-onlawn
assay (see below and Fig. 1D) or electron microscopy (see
below and Fig. 2). The second round of enrichment culture is
also plated and screened for virus production.

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัฒนธรรมและการโฮสต์ไวรัสที่แยกการเก็บตัวอย่างทั้งในท่ออากาศ หรือเติม

ขายขาดจะเจือจาง 1 : 50 หรือ 100 ในอาหารเลี้ยงเชื้อ sulfolobus ( zillig et al .
1994 ) ที่มีทั้งยีสต์สกัด 0.1 % w / v ) และซูโครส
( 0.2% w / v ) เป็นแหล่งคาร์บอน หรือ ทริพโทน ( 0.2 % w / v ) ใน longnecked
เออร์เลนเมเยอร์ flasks ( ดูภาพประกอบภาพประกอบ 1B ) และอุณหภูมิ
80 ° C ( 150 รอบต่อนาที ) เขย่า นานถึง 2 สัปดาห์ เกลือใน
อาหารเลี้ยงเชื้อ sulfolobus , ต่อลิตร : 3 g ( NH4 ) 2so4 0.5 g
k2hpo4 × 3 H2O , ปริมาณ 0.1 กรัม 0.5 กรัม MgSO4 ใ× 7 H2O , 0.01 g
CA ( 3 ) 2 × 4 × 4 1.8 มิลลิกรัม mncl2 h2o , h2o , 4.5 มิลลิกรัม na2b4o7 × 10
H2O 0.22 มิลลิกรัม znso4 × 7 h2o , h2o 0.05 มก. cucl2 × 2 × 2 0.03 มิลลิกรัม na2moo4
H2O , 0.03 มิลลิกรัม voso4 × 5 H2O , 0.01 มิลลิกรัม
coso4 × 7 h2o กลางคือ 2 กับ 07 กรัมต่อลิตรและ pH ไกลซีน
ปรับ pH 3 – 3.5 กับเจือจาง 1 : 2
กรดกำมะถัน สำหรับในระยะยาว 80 ° C ต่อนํ้าโปรด
ของเราเป็นของเหลว PEG 400 ซึ่งได้ ไม่เป็นสนิม , ปลอดสารพิษ , สารประกอบที่ไม่ละลายน้ำ
ระเหย ( ดูรูปที่ 1B ) ; น้ำมัน
และน้ำ สามารถใช้น้ำอาบ แต่ suboptimal
เนื่องจากการทำความสะอาดและแห้ง ตามลำดับ เมื่อการเจริญเติบโต
ตรวจพบ โดยให้เพิ่มความขุ่นหรือการผลิตของ
ลักษณะ " เปียกถุงเท้า " กลิ่น ( W . zillig ได้ที่ . Comm . ) ตัวอย่าง
ชุบบน gelrite ®แผ่น ( ดูด้านล่างและมะเดื่อ LC ) , rediluted
1 : 50 และเพิ่มการผลิต vlp โดยจุด onlawn
assay ( ดูด้านล่างและมะเดื่อ 1D ) หรือกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน ( ดู
ด้านล่างและรูปที่ 2 ) รอบที่สองของการเป็น
วัฒนธรรมยังชุบและเพิ่มการผลิตไวรัส