2. Materials and methods2.1. Chemic

2. Materials and methods
2.1. Chemicals
All chemicals were of analytical grade. Sodium dodecyl sulphate(SDS), Coomassie blue R-250 and N,N,N0,N0-tetramethylethylenediamine (TEMED) were procured from Bio-Rad Laboratories (Hercules, CA, USA). High-molecular-weight markers were purchased
from GE Healthcare UK Limited (Buckinghamshire, UK). Food grade bovine bone gelatin with the bloom strength of 150–250 g was obtained from Halagel(Thailand) Co., Ltd., (Bangkok,Thailand).




2.2. Collection and preparation of seabass skin Descaled skin of seabass (L. calcarifer) with a weight of 2.5–3 kg, was obtained from the Kingfisher Holdings Co., Ltd., Songkhla,
Thailand. Descaled skin was kept in ice with a skin/ice ratio 1:3 (w/w) and transported to the Department of Food Technology, Prince of Songkla University, Hat Yai within 1 h. Upon arrival, the remaining meat was removed manually and the skin was washed
using cold tap water. The skin was pooled and used as the composite sample. The sample was placed in polyethylene bags and stored at _20 _C until used, but not longer than 3 months. Prior to gelatin extraction, the frozen skin was thawed with running water until
the core temperature reached 8–10 _C. The skin was then cut into small pieces (1.0 _ 1.0 cm2) using scissors.


2.3. Extraction of gelatin from the skin of seabassGelatin was extracted from seabass skin according to the method of Jongjareonrak et al. (2006), with slight modification. Before
gelatin extraction, skin was soaked in 0.1 M NaOH, with a skin/ solution ratio of 1:10 (w/v), to remove any non-collagenous proteins. The mixture was stirred for 3 h at room temperature (28–30 _C) using an overhead stirrer model W20.n (IKA_-Werke GmbH& CO.KG, Stanfen, Germany). The alkaline solution was changed every 1 h for a total of 3 times. The residues were washed with tap water until a neutral or faintly basic pH was obtained. The residues
were then mixed with 0.05 M acetic acid at a skin/solution ratio of 1:10 (w/v) to swell collagenous material in the fish skin matrix. The mixture was stirred at room temperature for 2 h. The skin was washed using tap water until a neutral or faintly acidic pH of the wash water was obtained. Finally, the swollen skin was mixed with distilled water at a ratio of 1:10 (w/v) at 45 and 55 _C. The extraction was performed for various times (3, 6 and 12 h) with continuous stirring. At the designated time, the mixtures were filtered using a Buchner funnel, with a Whatman No. 4 filter paper (Whatman International, Ltd., Maidstone, England).
Then, the filtrates were freeze-dried using a freeze-dryer (CoolSafe55, ScanLaf A/S, Lynge, Denmark). Gelatin samples were subsequently subjected to analyses.



2.4. Analyses
2.4.1. Yield
The yield of gelatin was calculated based on the dry weight of
the starting material:
2.4.2. SDS–polyacrylamide gel electrophoresis (SDS–PAGE) SDS–PAGE was performed according to the method of Laemmli(1970). Gelatin samples were dissolved in 5% SDS solution. The mixtures were heated at 85 _C for 1 h using a temperature controlled
water bath model W350 (Memmert, Schwabach, Germany). Solubilised samples were mixed at a 1:1 (v/v) ratio with sample buffer (0.5 M Tris–HCl, pH 6.8 containing 5% SDS and 20% glycerol). Samples were loaded onto a polyacrylamide gel made up of 7.5% separating gel and 4% stacking gel and subjected to electrophoresis at a constant current of 20 mA/gel. After electrophoresis, gels werestained with 0.05% (w/v) Coomassie blue R-250 in 50% (v/v) methanoland 7.5% (v/v) acetic acid for 30 min. Finally, they weredestained with a mixture of 50% (v/v) methanol and 7.5% (v/v) acetic acid for 30 min and destained again with a mixture of 5% (v/v) methanol and 7.5% (v/v) acetic acid for 1 h. High-molecular-weight protein markers were used to estimate the molecular weight of the proteins.


2.4.3. Fourier transform infrared (FTIR) spectroscopic analysis FTIR spectra of the gelatin samples were obtained using a FTIR spectrometer (EQUINOX 55, Bruker, Ettlingen, Germany) equipped with a deuterated L-alanine tri-glycine sulphate (DLATGS) detector.
A horizontal attenuated total reflectance accessory (HATR) wasmounted into the sample compartment. The internal reflection crystal (Pike Technologies, Madison, WI, USA), made of zinc selenide, had a 45_ angle of incidence to the IR beam. Spectra were acquired at a resolution of 4 cm_1 and the measurement range was between 650 and 4000 cm_1 (mid-IR region) at room temperature. Automatic signals were collected in 32 scans at a resolution
of 4 cm_1 and were ratioed against a background spectrum recorded from the clean empty cell at 25 _C. Analysis of spectral data was carried out using the OPUS 3.0 data collection software programme (Bruker, Ettlingen, Germany).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. เคมีภัณฑ์ทั้งหมดเคมีเกรดวิเคราะห์ได้ โซเดียม dodecyl sulphate(SDS) สี Coomassie R-250 และ N, N, N0, N0-tetramethylethylenediamine (TEMED) ถูกจัดหาจากเชื้อ (เฮอร์คิวลิส CA, USA) ซื้อสูงน้ำหนักโมเลกุลเครื่องหมายจาก GE สุขภาพสหราชอาณาจักร จำกัด (บักกิงแฮมเชอร์ UK) อาหารเกรดกระดูกวัวตุ๋นกับความแข็งแรงดอก 150 – 250 กรัมได้รับจาก Halagel(Thailand) Co., Ltd., (กรุงเทพมหานคร ประเทศไทย)2.2. การรวบรวมและการเตรียมการของปลากะพงขาวผิว Descaled ผิวของปลากะพงขาว (L. calcarifer) มีน้ำหนัก 2.5-3 กก. มาจากคิงฟิชเชอร์โฮลดิ้งส์ Co., Ltd. สงขลาไทย แมชผิวถูกเก็บไว้ในน้ำแข็งกับผิว/น้ำแข็งอัตราส่วน 1:3 (w/w) และส่งไปแผนกอาหารเทคโนโลยี มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์ หาดใหญ่ภายใน 1 ชม เมื่อเช็คอิน เนื้อสัตว์ที่เหลือถูกเอาออกด้วยตนเอง และถูกล้างผิวใช้น้ำเย็น ผิวพู และใช้เป็นตัวอย่างประกอบ ตัวอย่างถูกวางไว้ในถุงพลาสติก และเก็บไว้ที่ _C _20 จนกว่าใช้ แต่ไม่นานกว่า 3 เดือน ก่อนสกัดเจลาติน ผิวแช่แข็งเตรียมกับน้ำจนถึงอุณหภูมิหลักถึง 8 – 10 _C ผิวถูกแล้วตัดเป็นชิ้นเล็ก ๆ (1.0 _ 1.0 cm2) โดยใช้กรรไกร2.3. การสกัดเจลาตินจากผิวของ seabassGelatin ถูกแยกจากผิวหนังปลากะพงขาวตามวิธีของ Jongjareonrak et al. (2006), มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ก่อนที่จะวุ้นสกัด ผิวถูกแช่ใน 0.1 M NaOH กับสกิน / แก้ปัญหาอัตราส่วน 1:10 (w/v), การเอาโปรตีนใด ๆ -collagenous กวนส่วนผสมสำหรับ 3 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง (28 – 30 _C) ใช้แบบช้อนคนจ่าย W20.n (IKA_ Werke GmbH & CO กก. Stanfen เยอรมนี) การเปลี่ยนแปลงละลายด่างทุก 1 ชั่วโมงรวม 3 ครั้ง ตกถูกล้าง ด้วยน้ำประปาจนกว่าค่า pH เป็นกลาง หรือรำไรพื้นฐานได้รับ สิ่งตกค้างถูกแล้วผสมกับกรดอะซิติก 0.05 M ที่อัตราส่วน 1:10 (w/v) อูม collagenous วัสดุในเมตริกซ์ผิวปลาผิว/โซลูชัน มีกวนส่วนผสมที่อุณหภูมิห้อง 2 ชั่วโมง ผิวถูกล้างโดยใช้น้ำประปาจนกว่าค่า pH เป็นกลาง หรือเป็นกรดรวย ๆ ล้างน้ำได้รับ ในที่สุด ผิวหนังบวมถูกผสม ด้วยน้ำกลั่นในอัตราส่วน 1:10 (w/v) ที่ 45 และ 55 _C ดำเนินการสกัดสำหรับต่าง ๆ เวลา (3, 6 และ 12 h) กับกวนอย่างต่อเนื่อง ในเวลาที่กำหนด ส่วนผสมกรองด้วยกระดาษกรอง Whatman เลข 4 (Maidstone Whatman อินเตอร์เนชั่นแนล จำกัด อังกฤษ) รูปกรวย Buchnerแล้ว filtrates ถูกอบแห้งโดยใช้เครื่อง freeze-อบ (CoolSafe55, ScanLaf a/s, Lynge เดนมาร์ก) ตัวอย่างวุ้นต่อมาถูกแยกวิเคราะห์2.4. วิเคราะห์2.4.1. ผลตอบแทนผลผลิตของเจลาตินคือคำนวณจากน้ำหนักแห้งของวัสดุที่เริ่มต้น:2.4.2. SDS–polyacrylamide gel electrophoresis (SDS–PAGE) SDS–PAGE was performed according to the method of Laemmli(1970). Gelatin samples were dissolved in 5% SDS solution. The mixtures were heated at 85 _C for 1 h using a temperature controlledwater bath model W350 (Memmert, Schwabach, Germany). Solubilised samples were mixed at a 1:1 (v/v) ratio with sample buffer (0.5 M Tris–HCl, pH 6.8 containing 5% SDS and 20% glycerol). Samples were loaded onto a polyacrylamide gel made up of 7.5% separating gel and 4% stacking gel and subjected to electrophoresis at a constant current of 20 mA/gel. After electrophoresis, gels werestained with 0.05% (w/v) Coomassie blue R-250 in 50% (v/v) methanoland 7.5% (v/v) acetic acid for 30 min. Finally, they weredestained with a mixture of 50% (v/v) methanol and 7.5% (v/v) acetic acid for 30 min and destained again with a mixture of 5% (v/v) methanol and 7.5% (v/v) acetic acid for 1 h. High-molecular-weight protein markers were used to estimate the molecular weight of the proteins.2.4.3. Fourier transform infrared (FTIR) spectroscopic analysis FTIR spectra of the gelatin samples were obtained using a FTIR spectrometer (EQUINOX 55, Bruker, Ettlingen, Germany) equipped with a deuterated L-alanine tri-glycine sulphate (DLATGS) detector.A horizontal attenuated total reflectance accessory (HATR) wasmounted into the sample compartment. The internal reflection crystal (Pike Technologies, Madison, WI, USA), made of zinc selenide, had a 45_ angle of incidence to the IR beam. Spectra were acquired at a resolution of 4 cm_1 and the measurement range was between 650 and 4000 cm_1 (mid-IR region) at room temperature. Automatic signals were collected in 32 scans at a resolutionof 4 cm_1 and were ratioed against a background spectrum recorded from the clean empty cell at 25 _C. Analysis of spectral data was carried out using the OPUS 3.0 data collection software programme (Bruker, Ettlingen, Germany).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 สารเคมี
สารเคมีทั้งหมดเป็นของเกรดวิเคราะห์ โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต (SDS) Coomassie สีฟ้า R-250 และ N, N, N0, N0-tetramethylethylenediamine (TEMED) ได้รับการจัดหาจาก Bio-Rad Laboratories (Hercules, CA, USA) เครื่องหมายโมเลกุลสูงน้ำหนักกำลังซื้อ
จาก GE Healthcare UK Limited (Buckinghamshire สหราชอาณาจักร) เกรดอาหารเจลาตินกระดูกวัวมีความแข็งแรงของบาน 150-250 กรัมที่ได้รับจาก Halagel (Thailand) Co. , Ltd. (Bangkok, Thailand). 2.2 การเก็บและการจัดเตรียมของผิวปลากะพงขาวขจัดคราบตะกรันผิวของปลากะพงขาว ( L. calcarifer) มีน้ำหนัก 2.5-3 กิโลกรัมที่ได้รับจากกระเต็นโฮลดิ้ง จำกัด จังหวัดสงขลา, ประเทศไทย ผิวขจัดคราบตะกรันที่ถูกเก็บไว้ในน้ำแข็งที่มีอัตราส่วนผิวหนัง / น้ำแข็ง 1: 3 (w / w) และเคลื่อนย้ายไปยังภาควิชาเทคโนโลยีการอาหาร, มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์หาดใหญ่ภายใน 1 ชั่วโมง เมื่อมาถึงเนื้อส่วนที่เหลือจะถูกลบออกด้วยตนเองและผิวถูกล้างโดยใช้น้ำประปาเย็น ผิวที่ได้รับการรวบรวมและนำมาใช้เป็นตัวอย่างคอมโพสิต กลุ่มตัวอย่างที่ถูกวางไว้ในถุงพลาสติกชนิดและเก็บไว้ที่ _20 _C จนกว่าจะใช้ แต่ไม่เกิน 3 เดือน ก่อนที่จะมีการสกัดเจลาตินผิวแช่แข็งถูกละลายด้วยน้ำที่ไหลจนกว่าอุณหภูมิแกนถึง 8-10 _C ผิวที่ถูกแล้วตัดเป็นชิ้นเล็ก ๆ (1.0 _ 1.0 cm2) โดยใช้กรรไกร. 2.3 การสกัดเจลาตินจากหนังของ seabassGelatin ถูกสกัดจากปลากะพงขาวผิวตามวิธีการของ Jongjareonrak et al, (2006) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ก่อนการสกัดเจลาตินผิวถูกแช่ใน 0.1 M NaOH, มีอัตราส่วนผิวหนัง / การแก้ปัญหาของ 1:10 (w / v) เพื่อลบใด ๆ ที่ไม่ใช่โปรตีน collagenous ส่วนผสมที่ถูกกวนเป็นเวลา 3 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง (28-30 _C) โดยใช้รูปแบบการกวนค่าใช้จ่าย W20.n (IKA_-Werke GmbH & CO.KG, Stanfen, เยอรมนี) วิธีการแก้ปัญหาที่เป็นด่างก็เปลี่ยนทุก 1 ชั่วโมงรวมเป็น 3 ครั้ง ตกค้างถูกล้างด้วยน้ำประปาจนกว่าจะมีค่า pH เป็นกลางหรือพื้นฐานแผ่วเบาที่ได้รับ ตกค้างถูกผสมแล้วกับ 0.05 M กรดอะซิติกในอัตราส่วนผิวหนัง / วิธีการแก้ปัญหา 1:10 (w / v) บวมวัสดุ collagenous ในปลาเมทริกซ์ผิว ส่วนผสมที่ถูกกวนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 2 ชั่วโมง ผิวที่ได้รับการล้างโดยใช้น้ำประปาจนกว่าจะมีค่า pH เป็นกลางหรือเป็นกรดแผ่วเบาของการล้างน้ำได้ ในที่สุดผิวหนังบวมผสมกับน้ำกลั่นในอัตราส่วน 1:10 (w / v) ที่ 45 และ 55 _C การสกัดที่ได้ดำเนินการสำหรับหลาย ๆ ครั้ง (3, 6 และ 12 ชั่วโมง) กับกวนอย่างต่อเนื่อง ในช่วงเวลาที่กำหนดผสมที่ถูกกรองโดยใช้ช่องทาง Buchner กับ Whatman ฉบับที่ 4 กระดาษกรอง (Whatman อินเตอร์เนชั่นแนล จำกัด เมดสโตนอังกฤษ). จากนั้นกรองได้แห้งใช้แช่แข็งเครื่องเป่า (CoolSafe55, ScanLaf A / S, Lynge, เดนมาร์ก) ตัวอย่างเจลาตินถูกยัดเยียดต่อมาวิเคราะห์. 2.4 การวิเคราะห์2.4.1 ผลผลิตผลผลิตของเจลาตินที่คำนวณได้อยู่บนพื้นฐานของน้ำหนักแห้งของวัสดุเริ่มต้น: 2.4.2 ระบบ SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) ระบบ SDS-PAGE ได้ดำเนินการตามวิธีการของ Laemmli นี้ (1970) ตัวอย่างเจลาตินละลายใน 5% วิธีการแก้ปัญหา SDS ผสมถูกความร้อนที่ 85 _C เป็นเวลา 1 ชั่วโมงโดยใช้การควบคุมอุณหภูมิW350 รุ่นน้ำอาบน้ำ (MEMMERT, Schwabach, เยอรมนี) ตัวอย่าง Solubilised ถูกผสมที่ 1: 1 (v / v) อัตราส่วนกับบัฟเฟอร์ตัวอย่าง (0.5 M Tris-HCl ค่า pH 6.8 มีระบบ SDS 5% และกลีเซอรีน 20%) ตัวอย่างที่ถูกโหลดไปยังเจลอะคริเลตที่สร้างขึ้นจากเจลแยก 7.5% และ 4% เจลซ้อนและเป็นไป electrophoresis ในปัจจุบันคงที่ของ 20 mA / เจล หลังจาก electrophoresis เจล werestained 0.05% (w / v) Coomassie สีฟ้า R-250 ใน 50% (v / v) methanoland 7.5% (v / v) กรดอะซิติกเป็นเวลา 30 นาที ในที่สุดพวกเขา weredestained ที่มีส่วนผสมของ 50% (v / v) เมทานอลและ 7.5% (v / v) กรดอะซิติกเป็นเวลา 30 นาทีและ destained อีกครั้งที่มีส่วนผสมของ 5% (v / v) เมทานอลและ 7.5% (v / V) กรดอะซิติกเป็นเวลา 1 ชั่วโมง เครื่องหมายที่มีโปรตีนสูงน้ำหนักโมเลกุลถูกนำมาใช้ในการประมาณน้ำหนักโมเลกุลของโปรตีน. 2.4.3 ฟูเรียร์อินฟราเรด (FTIR) การวิเคราะห์สเปกโทรสโก FTIR สเปกตรัมของตัวอย่างเจลาตินที่ได้รับใช้สเปกโตรมิเตอร์ FTIR (EQUINOX 55, Bruker, Ettlingen, เยอรมนี) พร้อมกับ L-อะลานีนซัลเฟต Tri-glycine (DLATGS) เครื่องตรวจจับ deuterated. รวมจางแนวนอน สะท้อนอุปกรณ์เสริม (HATR) wasmounted ลงในช่องตัวอย่าง คริสตัลภายในสะท้อน (หอก Technologies, Madison, WI, USA) ทำจากสังกะสี selenide มีมุม 45_ ของอุบัติการณ์ลำแสงอินฟราเรด Spectra ได้มาที่ความละเอียด 4 cm_1 และช่วงการวัดอยู่ระหว่าง 650 และ 4000 cm_1 (กลาง IR ภูมิภาค) ที่อุณหภูมิห้อง สัญญาณอัตโนมัติถูกเก็บไว้ใน 32 สแกนที่ความละเอียด4 cm_1 และ ratioed กับสเปกตรัมพื้นหลังที่บันทึกจากเซลล์ที่ว่างเปล่าที่สะอาดที่ 25 _C การวิเคราะห์ข้อมูลสเปกตรัมได้ดำเนินการโดยใช้ OPUS 3.0 ข้อมูลโปรแกรมซอฟแวร์คอลเลกชัน (Bruker, Ettlingen, เยอรมนี)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ2.1 . เคมีภัณฑ์วิเคราะห์สารเคมีทั้งหมดเป็นเกรด โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ( SDS ) เหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้า r-250 และ N , N , NO NO ( , tetramethylethylenediamine temed ) จัดหาจากห้องปฏิบัติการราดไบโอ ( Hercules , CA , USA ) สูงโมเลกุลเครื่องหมายถูกซื้อจาก GE Healthcare UK Limited ( เหมือนเดิม , UK ) เกรดอาหารวัวกระดูกเจลาตินกับบานแรง 150 – 250 กรัม ได้จาก halagel ( ประเทศไทย ) จำกัด ( กรุงเทพฯ )2.2 . การเก็บและเตรียมตัวเลี้ยงปลากะพงขาวขอดเกล็ดผิวหนังของผิวขาว ( L . ของแกะด้วยน้ำหนัก 2.5 – 3 กิโลกรัม ได้จาก นกกระเต็น โฮลดิ้ง จำกัด สงขลาประเทศไทย ขอดเกล็ดผิวหนังที่ถูกเก็บไว้ในน้ำแข็ง ด้วยอัตราส่วน 1 : 3 ผิวแข็ง ( w / w ) และส่งไปยังภาควิชาเทคโนโลยีอาหาร มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์ หาดใหญ่ ภายใน 1 ชั่วโมง เมื่อมาถึง เนื้อเหลือถูกลบออกด้วยตนเองและผิวหนังที่ถูกล้างการใช้น้ำเย็น ผิวหนังที่ถูกรวมและใช้เป็นตัวอย่างประกอบ ตัวอย่างถูกวางไว้ในถุง polyethylene และเก็บไว้ที่ _20 _c จนชิน แต่ไม่เกิน 3 เดือน ก่อนการสกัดเจลาตินแข็งผิวถูกละลายด้วยน้ำไหลจนแกนอุณหภูมิถึง 8 – 10 _c ผิวหนัง จากนั้นหั่นเป็นชิ้นเล็ก ๆ ( สำหรับ _ 1.0 ตร. ซม. ) โดยใช้กรรไกร2.3 การสกัดเจลาตินจากหนัง seabassgelatin สกัดจากผิวขาวตามวิธีการของ jongjareonrak et al . ( 2006 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ก่อนที่การสกัดเจลาติน ผิวชุ่มใน 0.1 M NaOH กับผิว / การแก้ไขอัตราส่วน 1 : 10 ( w / v ) เพื่อลบใด ๆที่ไม่ collagenous โปรตีน ผสมส่วนผสมที่กวน 3 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง ( 28 – 30 _c ) โดยใช้ค่าใช้จ่ายหมุนแบบ w20 . N ( ika_ - werke GmbH & co.kg stanfen , เยอรมนี ) สารละลายด่างก็เปลี่ยนทุก 1 ชั่วโมง รวมเป็น 3 ครั้ง และมีการล้างด้วยน้ำประปา หรือเป็นกลางๆ พื้นฐานจนถึง pH ได้ สารพิษตกค้างแล้วผสมกับ 0.05 M กรดอะซิติกที่ผิว / การแก้ไขอัตราส่วน 1 : 10 ( w / v ) บวม collagenous ปลาผิววัสดุในเมทริกซ์ ผสมส่วนผสมที่กวนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 2 ชั่วโมง ผิวล้างใช้น้ำจากก๊อกจนเป็นกลาง หรือกรดบางๆ pH ของน้ำล้างได้ . ในที่สุด ผิวหนังบวม มาผสมกับน้ำในอัตราส่วน 1 : 10 ( w / v ) ที่อุณหภูมิ 45 และ 55 _c . การสกัดแสดงเวลาต่าง ๆ ( 3 , 6 และ 12 ชั่วโมง ) อย่างต่อเนื่อง กวน ที่เขตเวลาและถูกกรองโดยใช้กรวยกรองบุชเนอร์ กับ whatman หมายเลข 4 ไส้กรองกระดาษ ( whatman อินเตอร์เนชั่นแนล จำกัด เมดสโตน ประเทศอังกฤษ )แล้ว มีการใช้สารละลายแช่แข็งแช่แข็งแห้ง ( coolsafe55 scanlaf , A / S lynge , เดนมาร์ก ) ตัวอย่างเจลาติน จัดการงานวิเคราะห์ข้อมูล2.4 . การวิเคราะห์เครื่องมือกำจัดเพื่อย้าย . ผลผลิตผลได้ของเจลาตินคำนวณจากน้ำหนักแห้งของกำลังวัสดุ2.4.2 . SDS - polyacrylamide gel electrophoresis ( SDS SDS - หน้า ( หน้า ) ได้ดำเนินการตามวิธีการของ laemmli ( 1970 ) ตัวอย่างเจลาตินละลายใน 5 % SDS โซลูชั่น ส่วนผสมมีอุณหภูมิ 85 _c เป็นเวลา 1 ชั่วโมง โดยใช้อุณหภูมิควบคุมน้ำที่อาบแบบ w350 ( MEMMERT Schwabach , เยอรมนี ) ตัวอย่าง solubilised ถูกผสมในอัตราส่วน 1 : 1 ( v / v ) ตัวอย่างมีบัฟเฟอร์ ( 0.5 เมตรโดย– HCl , พีเอช 6.8 ที่มีถึง 5 % SDS และ 20% รอล ) จำนวนโหลดไปยัง polyacrylamide gel ขึ้น 7.5% แบ่งเจลและ 4% ซ้อนเจลและภายใต้วิธีที่ปัจจุบันคงที่ 20 MA / เจล หลังจากอิเล็ก werestained กับเจล 0.05% ( w / v ) เหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้า r-250 50 % ( v / v ) methanoland 7.5 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) กรดเป็นเวลา 30 นาที ในที่สุด พวกเขา weredestained ที่มีส่วนผสมของ 50 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) เมทานอลและ 7.5 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) กรดอะซิติกสำหรับ 30 นาที และ destained อีกครั้งด้วยส่วนผสมของ 5% ( v / v ) เมทานอลและ 7.5 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) กรดเป็นเวลา 1 ชั่วโมงสูงโมเลกุลโปรตีนเครื่องหมายถูกนำไปใช้คำนวณน้ำหนักโมเลกุลของโปรตีน2.4.3 . ฟูเรียร์ Infrared ( FTIR ) ( วิเคราะห์สเปกตรัมทางของเจลาตินตัวอย่างได้ใช้ FTIR สเปคโตรมิเตอร์ ( Equinox 55 บรุคเกอร์ Ettlingen เยอรมนี , ) พร้อมกับ deuterated ไตรไกลซีนอะลานีนซัลเฟต ( dlatgs ) เครื่องตรวจจับแนวนอนการรวมค่าอุปกรณ์ ( hatr ) wasmounted ในตัวอย่างช่อง . คริสตัลการสะท้อนกลับ ( หอก Technologies , Madison , WI , USA ) , ทำจากสังกะสี ซีลีไนด์ มีมุม 45_ อุบัติการณ์เพื่อ IR Beam สเปกตรัมที่ได้มาที่ความละเอียด 4 cm_1 และช่วงวัดระหว่าง 650 000 cm_1 ( กลางและภูมิภาค ) ที่อุณหภูมิห้อง สัญญาณอัตโนมัติจำนวน 32 สแกนที่ความละเอียดใน4 cm_1 และ ratioed กับพื้นหลังของสเปกตรัมบันทึกจากทำความสะอาดเซลล์ที่ว่างเปล่าที่ 25 _c การวิเคราะห์ข้อมูลสเปกตรัม พบการใช้ในการเก็บข้อมูลโปรแกรมซอฟต์แวร์ 3.0 ( BRUKER Ettlingen เยอรมนี , )