HPLC separation was achieved using

HPLC separation was achieved using an Eclipce Plus C18 column (2.1 mm  50 mm, 1.8 lm) made in USA which was kept at 30 C. Eluent A was 5% acetonitrile containing 0.1% formic acid and B was 0.1% formic acid in pure acetonitrile.
The gradient conditions were as follows: 80–10% A from 0 to 6 min and then held for 2 min.
The injection volume was 0.5 lL at a constant flow rate of 0.2 mL/min.
The optimal ESI source conditions were described as follows: capillary voltage +4.0 kV; nebulizer 40 psi; dry gas 11.0 L/min; dry temperature 300 C; Sheath gas temperature 280 C; Sheath gas flow 10 L/min.
Agilent Mass Hunter Data Acquisition, Qualitative Analysis and Quantitative Analysis software were used for method development and data acquisition.
The optimal HPLC–MS/MS method parameters of the corresponding d0-MASC/d3-MASC derivatives are shown in Table 1.
The whole chromatographic windows were divided into three time segments: Segment I is set to waste; Segment II and III are set to source.
Data were collected under positive ionization mode with multiple reactions monitoring (MRM).

2.6. Quantification
The relative quantification method used in this work was established as follows.
Two aliquots of BAs were derivatized by d3-MASC (heavy form) and d0-MASC (light form), respectively.
To construct the calibration curves, d0-MASC and d3-MASC derivatives of standards were mixed in ratios of 1:10–10:1 for all BAs, and analyzed by HPLC–MS/MS.
The linear regression equations were obtained by plotting the experimental peak area ratios of d0-MASC/d3-MASC derivatives (y) against nominal concentration ratios (x).
Slopes of regression equation of calibration curves for the seven derivatives approximated to 1.0, the correlation coefficient values (R2) of above 0.99 were obtained for all the analytes, indicating good correlation of the experimental data with the theoretical ratios (See Supplementary Material Fig. S3).
For real

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แยก HPLC ก็ประสบความสำเร็จโดยใช้คอลัมน์ Eclipce พลัส C18 (2.1 มิลลิเมตร 50 มิลลิเมตร 1.8 ไมครอน) ทำในประเทศสหรัฐอเมริกาซึ่งได้รับการเก็บรักษาไว้ที่ 30 องศาเซลเซียส ตัวชะเป็น 5% acetonitrile มีกรดฟอร์มิ 0.1% และ B เป็น 0.1% กรดใน acetonitrile บริสุทธิ์.
เงื่อนไขการไล่ระดับสีได้ดังนี้:. 80-10% 0-6 นาทีแล้วจัดขึ้นเป็นเวลา 2
นาทีปริมาณการฉีดคือ. 0.5 LL ในอัตราการไหลคงที่ 0.2 มิลลิลิตร /
นาทีแหล่งที่ดีที่สุดของESI อธิบายเงื่อนไขดังต่อไปนี้: แรงดันของเส้นเลือดฝอย 4.0 กิโลโวลต์; nebulizer 40 ปอนด์ต่อตารางนิ้ว; ก๊าซแห้ง 11.0 ลิตร / นาที; อุณหภูมิแห้ง 300 C; อุณหภูมิก๊าซเปลือก 280 C; การไหลของก๊าซเปลือก 10 ลิตร / นาที.
Agilent มวลฮันเตอร์มาซึ่งข้อมูลเชิงคุณภาพวิเคราะห์และซอฟต์แวร์การวิเคราะห์เชิงปริมาณถูกนำมาใช้ในการพัฒนาวิธีการและข้อมูลที่ได้มา.
ที่ดีที่สุด HPLC-MS / MS พารามิเตอร์วิธีการของ d0-masc สอดคล้อง / d3-masc เป็นอนุพันธ์ ดังแสดงในตารางที่ 1
หน้าต่างโครมาทั้งหมดถูกแบ่งออกเป็นสามส่วนเวลา: เซกเมนต์ที่ฉันมีการตั้งค่าที่จะเสีย; ส่วนงานที่สองและสามมีการกำหนดให้แหล่งที่มา.
เก็บข้อมูลภายใต้โหมดไอออนไนซ์บวกกับปฏิกิริยาการตรวจสอบหลาย (MRM). 2.6 ปริมาณวิธีการปริมาณญาตินำมาใช้ในงานนี้ก่อตั้งขึ้นดังต่อไปนี้. สอง aliquots ของ BAs ถูก derivatized โดย d3-masc (แบบหนัก) และ d0-masc (แบบแสง) ตามลำดับ. เพื่อสร้างเส้นโค้งการสอบเทียบ, d0-masc และ d3 สัญญาซื้อขายล่วงหน้า -MASC มาตรฐานถูกผสมในอัตราส่วน 1: 10-10:. 1 สำหรับ BAs ทั้งหมดและการวิเคราะห์โดยวิธี HPLC-MS / MS สมการถดถอยเชิงเส้นที่ได้รับจากการวางแผนอัตราส่วนพื้นที่สูงสุดทดลอง d0-masc / d3- สัญญาซื้อขายล่วงหน้า masc (y) กับอัตราส่วนความเข้มข้นน้อย (x). ลาดของสมการถดถอยของเส้นโค้งการสอบเทียบสำหรับเจ็ดอนุพันธ์ประมาณ 1.0 ค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ (R2) ข้างต้น 0.99 ได้รับสำหรับการวิเคราะห์ทั้งหมดที่แสดงให้เห็นความสัมพันธ์ที่ดีของ ข้อมูลการทดลองที่มีอัตราส่วนทางทฤษฎี (ดูรูปที่เสริมวัสดุ. S3). สำหรับจริง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การแยกและทำได้โดยใช้ eclipce พลัสคอลัมน์ C18 2.1 mm 50 mm 1.8 LM ) ผลิตในประเทศสหรัฐอเมริกาซึ่งถูกเก็บไว้ที่ 30 C นี้เป็นร้อยละ 5 ไนประกอบด้วย 0.1% กรดและ B คือ 0.1% กรดบริสุทธิ์ไน .เงื่อนไข ไล่ระดับ ดังนี้ 80 – 10 % จาก 0 ถึง 6 นาทีและจากนั้นจัดขึ้นเป็นเวลา 2 นาทีปริมาณการฉีด 0.5 จะได้ในอัตราการไหลคงที่ของ 0.2 มิลลิลิตร / นาทีสภาพแหล่ง ESI ที่เหมาะสมคือ อธิบายดังนี้ : capillary แรงดัน + 4.0 กิโล ; nebulizer 40 psi ; ก๊าซแห้ง 11.0 ลิตร / นาที อุณหภูมิ 300 C แห้ง อุณหภูมิแก๊สปลอกปลอก 280 C ; อัตราการไหลของแก๊ส 10 ลิตร / นาทีด้านมวลนักล่าข้อมูล การวิเคราะห์เชิงคุณภาพและเชิงปริมาณที่ใช้สำหรับการพัฒนาซอฟต์แวร์การวิเคราะห์วิธีการและการเก็บข้อมูลเหมาะสม HPLC MS / MS และพารามิเตอร์ของวิธีการที่พลังงาน masc / D3 masc อนุพันธ์จะแสดงในตารางที่ 1ทั้งเมื่อหน้าต่างถูกแบ่งออกเป็นสามส่วน : ส่วนผมเวลามีการตั้งค่าที่จะเสีย ส่วนที่ 2 และ 3 ถูกตั้งค่าให้แหล่งที่มารวบรวมข้อมูลภายใต้โหมดอิออนบวกกับหลายปฏิกิริยาการตรวจสอบ ( mrm )2.6 ปริมาณเทียบกับปริมาณใช้วิธีการทำงานนี้ก่อตั้งขึ้น ดังนี้คุณกำลัง derivatized สองเฉยๆ โดย masc D3 ( แบบหนัก ) และพลังงาน masc ( แบบเบา ) ตามลำดับการสร้างเส้นโค้งสอบเทียบพลังงาน masc D3 , และ masc อนุพันธ์ของมาตรฐานที่นำมาผสมในอัตราส่วน 1 : 10 และ 10 : 1 ทั้งหมด บาส และวิเคราะห์โดย HPLC และ MS / นางสาวสมการถดถอยเชิงเส้นได้ โดยจะทดลองต่อพื้นที่สูงสุด + masc / D3 masc อนุพันธ์ ( Y ) กับอัตราส่วนความเข้มข้นปกติ ( X )ความชันของสมการถดถอยของเส้นโค้งสอบเทียบสำหรับเจ็ดอนุพันธ์โดยประมาณถึง 1.0 ค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ ( R2 ) ข้างต้น 0.99 ส่วนสารทั้งหมดที่แสดงความสัมพันธ์ของข้อมูล ด้วยอัตราส่วนทางทฤษฎี ( ดูวัสดุเสริมรูปที่ S3 )สำหรับจริง