Material and methodsBacterial strai

Material and methods
Bacterial strain and culture conditions
V. tritonius strain AM2 used in this study was isolated from the gut of sea hare (A. kurodai) [26] and [27]. The nature of this facultative anaerobe was discussed in great detail in Sawabe et al. [27], but in summary the strain could utilise mannitol but could not degrade and utilise alginate. Strain AM2 was cultured in marine broth; 0.5% (w/v) polypeptone, 0.1% (w/v) yeast extract, 100 mM MOPS (Dojindo, Kumamoto, Japan), and 75% (v/v) artificial seawater composed of 30 g/L NaCl, 0.7 g/L KCl, 5.3 g/L MgSO4•7H2O, 10.8 g/L MgCl2•6H2O, and 1.3 g/L CaSO4•2H2O) and/or marine agar (marine broth containing 1.5% agar). Initially, the strain was precultured aerobically in marine broth to achieve a cell density of 1.0 ± 0.1 OD620 at 25 °C with shaking at 130 rpm (NR-80, TAITEC, Saitama, Japan). The culture conditions remained similar throughout the study unless stated otherwise. Later, 1 mL of the pre-culture strain was added to 100 mL of marine broth containing 5% (w/v) glucose or 5% (w/v) mannitol, which was prepared in a glass bottle reactor. Batch fermentation culture was then conducted using a magnetic stirrer (RO 10 power IKAMAG, IKA, Staufen, Germany) with gentle mixing. No gases purging was conducted, so any oxygen dissolved in the medium and remaining in the headspace of the bottle was consumed during bacterial growth. The oxygen consumption in the headspace was checked by gas chromatography (see below section). The pH of the culture was maintained at pH 5.5, 6, 6.5 or 7.5 using a pH controller (DT-1023P, ABLE, Tokyo, Japan) equipped with an autoclavable electrode (FermProbe pH electrodes, Broadley-James Corp., Branford, USA) by adding 5 N NaOH or HCl. The effect of pH on the H2 production was determined in three replicate cultures. The temperature of the culture was set to 25 °C, 30 °C, 37 °C and 42 °C to determine H2production speed. No added sugars were present in the marine broth used in the control culture.
Assays
The H2 produced during fermentation was captured in an aluminium bag, and the volume was measured using water displacement and gas chromatography (GC8A or GC2014, Shimadzu, Kyoto, Japan) with a thermal conductivity detector and ShinCarbon ST column (Shinwa Chemical Industries Ltd., Kyoto, Japan). Extracellular ethanol, formate, acetate and lactate were measured by

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการ
แบคทีเรียต้องใช้และวัฒนธรรมเงื่อนไข
V. tritonius ต้องใช้ AM2 ที่ใช้ในการศึกษานี้ถูกแยกจากลำไส้ของกระต่ายทะเล (A. kurodai) [26] [27] และ ธรรมชาตินี้ facultative anaerobe มีกล่าวถึงในรายละเอียดมากใน Sawabe et al. [27], แต่ในสรุป พันธุ์สามารถใช้ mannitol แต่อาจไม่ลดลง และใช้แอลจิเนต ต้องใช้ AM2 มีอ่างในซุปทะเล 05% (w/v) polypeptone สารสกัดจากยีสต์ 0.1% (w/v) MOPS 100 มม. (Dojindo คุมาโมโตะ ญี่ปุ่น), และ 75% (v/v) ทะเลเทียมประกอบด้วย 30 g/L NaCl, 0.7 g/L KCl, 5.3 g/L MgSO4•7H2O, 10.8 g/L MgCl2•6H2O และ CaSO4•2H2O 1.3 g/L) หรือทะเล agar (ซุปทะเลที่ประกอบด้วย 1.5% agar) เริ่มต้น พันธุ์คือ precultured aerobically ในซุปทะเลให้มีความหนาแน่นเซลล์ของ 1.0 ± 01 OD620 ที่ 25 ° C ด้วยการสั่นที่ 130 rpm (NR-80, TAITEC ไซตามะ ญี่ปุ่น) สภาพวัฒนธรรมยังคงคล้ายกันตลอดการศึกษาเว้นแต่จะระบุเป็นอย่างอื่น ภายหลัง 1 mL ของพันธุ์วัฒนธรรมก่อนถูกเพิ่มเข้าไป 100 mL ของซุปทะเลประกอบด้วยกลูโคส 5% (w/v) หรือ mannitol 5% (w/v) ซึ่งถูกเตรียมไว้ในเครื่องปฏิกรณ์แบบขวดแก้ว วัฒนธรรมชุดหมักได้แล้วดำเนินอ่อนโยนผสมใช้ช้อนคนแม่เหล็ก (พลังงาน 10 โร IKAMAG, IKA, Staufen เยอรมนี) ก๊าซไม่ล้างถูกดำเนินการ เพื่อให้มีออกซิเจนละลายในสื่อ และที่เหลือใน headspace ของขวดที่ใช้ในระหว่างการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย ปริมาณการใช้ออกซิเจนใน headspace ถูกตรวจสอบ โดย chromatography ก๊าซ (ดูด้านล่างส่วน) PH ของวัฒนธรรมถูกรักษาไว้ที่ค่า pH 5.5, 6, 6.5 หรือใช้ค่า pH คอนโทรลเลอร์ (DT - 1023P สามารถ โตเกียว ญี่ปุ่น) พร้อมกับอิเล็กโทรด autoclavable (FermProbe pH หุงต James Broadley Corp., Branford สหรัฐอเมริกา) เพิ่ม 5 7.5 N NaOH หรือ HCl ผลของการผลิต H2 ถูกกำหนดในวัฒนธรรม 3 replicate อุณหภูมิของวัฒนธรรมถูกตั้งค่าเป็น 25 ° C, 30 ° C 37 ° C และ 42 ° C เพื่อกำหนดความเร็ว H2production ไม่มีน้ำตาลเพิ่มขึ้นอยู่ในซุปทะเลที่ใช้ในการควบคุมวัฒนธรรม
Assays
H2 ที่ผลิตในระหว่างการหมักถูกจับในการถุงอะลูมิเนียม และปริมาณถูกวัดโดยใช้ปริมาณกระบอกสูบน้ำและ chromatography ก๊าซ (GC8A หรือ GC2014, Shimadzu เกียวโต ญี่ปุ่น) ด้วยเครื่องตรวจจับการนำความร้อนและคอลัมน์ ShinCarbon ST (Shinwa เคมีอุตสาหกรรม จำกัด เกียวโต ญี่ปุ่น) Extracellular เอทานอล รูปแบบเอกสาร acetate และ lactate ที่วัดโดย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
สายพันธุ์แบคทีเรียและเงื่อนไขวัฒนธรรม
V. tritonius AM2 สายพันธุ์ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ได้รับการแยกออกจากทางเดินอาหารของกระต่ายทะเล (A. kurodai) [26] และ [27] ธรรมชาติของ anaerobe ตามอำเภอใจนี้ได้รับการกล่าวถึงในรายละเอียดที่ดีใน Sawabe และคณะ [27] แต่ในการสรุปสายพันธุ์สามารถใช้แมนนิทอล แต่ไม่สามารถลดและใช้ประโยชน์จากอัลจิเนต สายพันธุ์ AM2 ถูกเลี้ยงในน้ำซุปทะเล 0.5% (w / v) polypeptone 0.1% (w / v) สารสกัดจากยีสต์, 100 มิลลิ MOPS (Dojindo, Kumamoto, ญี่ปุ่น) และ 75% (v / v) น้ำทะเลเทียมประกอบด้วย 30 กรัม / ลิตรโซเดียมคลอไรด์, 0.7 กรัม / ลิตรโพแทสเซียมคลอไรด์, 5.3 กรัม / ลิตร MgSO 4 • 7H2O 10.8 กรัม / ลิตร MgCl2 • 6H2O และ 1.3 กรัม / ลิตร CaSO4 • 2H2O) และ / หรือวุ้นทะเล (น้ำซุปทะเลที่มี 1.5% agar) ในขั้นต้นสายพันธุ์ที่ได้รับ precultured ออกซิเจนในน้ำซุปทะเลเพื่อให้บรรลุความหนาแน่นของเซลล์ 1.0 ± 0.1 OD620 ที่ 25 ° C ในการเขย่า 130 รอบต่อนาที (NR-80, Taitec, ไซตามะ, ญี่ปุ่น) เงื่อนไขวัฒนธรรมที่ยังคงอยู่ที่คล้ายกันตลอดการศึกษายกเว้นที่ระบุไว้เป็นอย่างอื่น ต่อ 1 มิลลิลิตรของสายพันธุ์ก่อนวัฒนธรรมถูกบันทึกอยู่ใน 100 มิลลิลิตรของน้ำซุปทะเลที่มี 5% (w / v) น้ำตาลกลูโคสหรือ 5% (w / v) แมนนิทอลซึ่งได้รับการจัดทำขึ้นในเครื่องปฏิกรณ์ขวดแก้ว วัฒนธรรมหมักได้ดำเนินการแล้วใช้เครื่องกวนแม่เหล็ก (RO 10 IKAMAG อำนาจ IKA, Staufen, เยอรมนี) กับอ่อนโยนผสม ไม่มีก๊าซกวาดล้างได้ดำเนินการเพื่อให้ออกซิเจนละลายใด ๆ ในระยะกลางและที่เหลืออยู่ในช่องว่างเหนือของเหลวของขวดถูกบริโภคในช่วงเจริญเติบโตของแบคทีเรีย การใช้ออกซิเจนในช่องว่างเหนือของเหลวได้รับการตรวจสอบโดยแก๊สโครมา (ดูด้านล่างส่วน) พีเอชของวัฒนธรรมที่ได้รับการเก็บรักษาไว้ที่ค่า pH 5.5, 6, 6.5 หรือ 7.5 โดยใช้ตัวควบคุมความเป็นกรดด่าง (DT-1023P, เบิล, โตเกียว, ญี่ปุ่น) พร้อมกับขั้วไฟฟ้าหม้อนึ่งฆ่าเชื้อ (FermProbe ขั้วไฟฟ้า pH, Broadley เจมส์คอร์ป, นิวเฮเวน, สหรัฐอเมริกา ) โดยการเพิ่ม 5 N NaOH หรือ HCl ผลของพีเอชในการผลิต H2 ถูกกำหนดในสามวัฒนธรรมซ้ำ อุณหภูมิของวัฒนธรรมที่ได้รับการตั้งค่าให้ 25 ° C, 30 ° C 37 ° C และ 42 ° C ถึงกำหนดความเร็ว H2production ไม่มีน้ำตาลเพิ่มเป็นอยู่ในน้ำซุปทะเลที่ใช้ในวัฒนธรรมการควบคุม
การตรวจ
H2 ที่ผลิตในระหว่างการหมักก็ถูกจับในถุงอลูมิเนียมและปริมาณที่ถูกวัดโดยการกำจัดน้ำและแก๊สโครมา (GC8A หรือ GC2014, Shimadzu, เกียวโต, ญี่ปุ่น) กับเครื่องตรวจจับการนำความร้อนและคอลัมน์ ShinCarbon ST (Shinwa เคมีอุตสาหกรรม จำกัด เกียวโต, ญี่ปุ่น) extracellular เอทานอลรูปแบบอะซิเตทและแลคเตถูกวัดโดย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการเพาะเลี้ยงแบคทีเรียสายพันธุ์และ

V tritonius ความเครียดแบบที่ใช้ในการศึกษาได้จากลำไส้ของกระต่ายทะเล ( A . kurodai ) [ 26 ] และ [ 27 ] ธรรมชาติของลักษณะอยนี้ได้ถูกกล่าวถึงในรายละเอียดมากใน sawabe et al . [ 27 ] แต่สรุปเมื่อยสามารถใช้ฆ่าเชื้อ แต่ไม่สามารถเนื่องจากการใช้อัลจิเนต . สายพันธุ์ที่เลี้ยงในทะเลแบบซุป ; 05% ( w / v ) polypeptone 0.1% ( w / v ) สารสกัดจากยีสต์ , 100 มม. ไม้ถูพื้น ( dojindo , คุมาโมโตะ , ญี่ปุ่น ) และ 75 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) น้ำทะเลเทียมประกอบด้วย 30 กรัม / ลิตรโซเดียมคลอไรด์ 0.7 g / L . , 5.3 กรัม / ลิตร - 7h2o 10.8 กรัม MgSO4 ใ , / l - 6h2o MgCl2 และ 1.3 g / l - การระเบิด 2H2O-dx ) และ / หรือทางทะเล ( Marine broth ที่มี 1.5% วุ้น ) เริ่มแรก , สายพันธุ์ aerobically 1949 ในทะเลน้ำซุปเพื่อให้บรรลุความหนาแน่นเซลล์ 1.0 ± 01 od620 ที่ 25 ° C เขย่า ที่ 130 รอบต่อนาที ( nr-80 taitec , ไซตามะ , ญี่ปุ่น ) เงื่อนไขวัฒนธรรมยังคงคล้ายกันตลอดการศึกษา เว้นแต่ที่ระบุไว้เป็นอย่างอื่น ต่อมา 1 มิลลิลิตรของวัฒนธรรมก่อนสายพันธุ์เพิ่ม 100 มิลลิลิตรของน้ำทะเล ประกอบด้วย 5 % ( w / v ) กลูโคส หรือ 5 % ( w / v ) แมนนิทอล ซึ่งได้เตรียมไว้ในขวดแก้ว ของเครื่องปฏิกรณ์วัฒนธรรมชุดแล้วทำการหมักโดยใช้ stirrer แม่เหล็ก ( RO 10 พลังงาน ikamag , อิกะ Staufen , เยอรมนี , ) อ่อนโยนผสม ไม่มีแก๊สในการดำเนินการเพื่อให้มีปริมาณออกซิเจนละลายในปานกลาง และที่เหลืออยู่ในเฮดสเปซของขวดที่ถูกบริโภคในช่วงการเจริญเติบโตของเชื้อแบคทีเรีย การใช้ออกซิเจนในเฮดสเปซก็ถูกตรวจสอบโดยวิธีแก๊สโครมาโตกราฟี ( ดูด้านล่างส่วน )pH ของวัฒนธรรมไว้ที่ค่า pH 5.5 , 6 , 6.5 และ 7.5 โดยใช้เครื่องควบคุมค่าพีเอช ( dt-1023p , สามารถ , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) พร้อมกับมีขั้ว ( Autoclavable fermprobe Ph electrodes บรอดลีย์ เจมส์ คอร์ป แบรนฟอร์ด สหรัฐอเมริกา ) โดยการเพิ่ม 5 N NaOH และ HCl . ผลของพีเอชใน H2 ผลิตตั้งใจ 3 เลียนแบบวัฒนธรรม อุณหภูมิของวัฒนธรรมได้ตั้ง 25 องศา C 30 ° C37 ° C และ 42 ° C เพื่อตรวจสอบความเร็ว h2production . ไม่เติมน้ำตาลอยู่ในทะเลน้ำซุปที่ใช้ในวัฒนธรรมควบคุม

) H2 ที่ผลิตในระหว่างการหมักถูกจับในถุงอะลูมิเนียมและปริมาณการวัดการกระจัดน้ำและแก๊สโครมาโทกราฟี ( gc8a หรือ gc2014 Shimadzu , เกียวโต , ,ญี่ปุ่น ) กับเครื่องตรวจจับการนำความร้อน และ shincarbon เซนต์คอลัมน์ ( ชินฮวาเคมีอุตสาหกรรม จำกัด , เกียวโต , ญี่ปุ่น ) และเอทานอล รูปแบบอะซิเตทและวัดจาก แลคเตท