The First Screen included two seque

The First Screen included two sequential rounds of sorting (see Supporting Information Figure 4 for details). The GMDs were grown in induction medium, containing purified Ivyc, at 30 °C for 19 h, after which they were sieved over a 20 μm mesh and then
recovered from the sieve in fresh PBS. SYTOX Orange (Life Technologies, USA) was added to a final concentration of 100 NM just before sorting. GMD were sorted on an iCYT Synergy flow cytometer equipped with a 126 μm nozzle and laser lines of 488 and 561 nm for excitation of yEGFP and SYTOX Orange, respectively. Individual GMD isolated from high stringency plating sorts were placed on M. luteus indicator plates (0.5 mg mL−1 M. luteus, 10 μg/mL
E. coli Ivy, 0.5% dextrose, 1.5% galactose, 0.71% Difco YNB without
(NH4)2SO4, 0.25% (NH4)2SO4, 0.077% CSM−ura) and grown 4 days at
30 °C. Prevalent halo-forming colonies were selected for sequencing

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

หน้าจอแรกรวมสองรอบตามลำดับของการเรียงลำดับ (ดูรูปข้อมูลที่สนับสนุน 4 สำหรับรายละเอียด) GMDs ถูกพัฒนาในการเหนี่ยวนำ มี Ivyc บริสุทธิ์ ที่ 30 ° C สำหรับ h 19 ที่พวกเขาได้ sieved ผ่านตาข่าย 20 μm แล้วกู้คืนจากตะแกรงใน PBS สด SYTOX ส้ม (เทคโนโลยีชีวิต สหรัฐอเมริกา) ถูกเพิ่มความเข้มข้นสุดท้ายของ 100 NM ก่อนเรียงลำดับ GMD เรียงบน cytometer กระแส Synergy iCYT ที่พร้อมเป็น 126 μm หัวฉีดและเลเซอร์บรรทัด 488 และ 561 nm สำหรับในการกระตุ้น yEGFP และ SYTOX สีส้ม ตามลำดับ GMD ละโดดเดี่ยว stringency สูงชุบเรียงใส่ใน M. luteus แผ่นตัวบ่งชี้ (0.5 mg mL−1 M. luteus, μg 10 mLไอวี่ e. coli กาแล็กโทส 1.5%, 0.71%, 0.5% ขึ้น Difco YNB โดย(NH4) 2SO4, 0.25% (NH4) 2SO4, 0.077% CSM−ura) และเติบโต 4 วันที่30 องศาเซลเซียส อาณานิคม halo ขึ้นแพร่หลายถูกเลือกสำหรับการจัดลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

หน้าจอแรกรวมสองรอบต่อเนื่องของการเรียงลำดับ (ดูข้อมูลการสนับสนุนรูปที่ 4 สำหรับรายละเอียด) GMDs ปลูกในสื่อเหนี่ยวนำที่มีบริสุทธิ์ Ivyc ที่ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 19 ชั่วโมงหลังจากที่พวกเขาได้รับการร่อนกว่า 20 ไมครอนตาข่ายแล้ว
หายจากตะแกรงในพีบีเอสสด SYTOX ออเรนจ์ (ไลฟ์เทคโนโลยีส์, สหรัฐอเมริกา) ถูกบันทึกอยู่ในความเข้มข้นสุดท้ายของ 100 นาโนเมตรก่อนที่จะเรียงลำดับ GMD ถูกจัดเรียงในการไหลเวียนของ Synergy iCYT cytometer พร้อมกับหัวฉีด 126 ไมโครเมตรและเส้นเลเซอร์ 488 นาโนเมตรและ 561 สำหรับการกระตุ้นของ yEGFP และ SYTOX ส้มตามลำดับ บุคคล GMD ที่แยกได้จากประเภทชุบเข้มงวดสูงถูกวางไว้บนแผ่นเอ็มตัวบ่งชี้ luteus (0.5 มกมิลลิลิตร-1 เมตร luteus 10 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร
เชื้อ E. coli Ivy, เดกซ์โทรส 0.5% กาแลคโต 1.5%, 0.71% โดยไม่ต้อง Difco YNB
(NH4 ) 2SO4, 0.25% (NH4) 2SO4, 0.077% CSM-ยู) และเติบโตขึ้น 4 วันที่
อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส อาณานิคมรัศมีขึ้นรูปที่แพร่หลายถูกเลือกสำหรับการจัดลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

หน้าจอแรกของการเรียงลำดับ รวมสองรอบ ( ดูรูปที่ 4 สนับสนุนข้อมูลเพื่อดูรายละเอียด ) การเติบโตในการ gmds ขนาดกลางที่มี ivyc บริสุทธิ์ ที่ 30 ° C 19 ชั่วโมงหลังจากที่พวกเขามีขนาดกว่า 20 μเมตรตาข่ายแล้ว
หายจากตะแกรงใน PBS สด sytox สีส้ม ( เทคโนโลยี , USA ) ได้เพิ่มความเข้มข้นสุดท้าย 100 nm ก่อนการเรียงลำดับGMD ถูกเรียงบน icyt synergy การใช้โมโนพร้อมกับ 126 μ M หัวฉีดและสายเลเซอร์ของแล้ว 560 nm สำหรับความตื่นเต้นของ yegfp และ sytox ส้ม ตามลำดับ GMD บุคคลแยกจากสูง stringency ชุบประเภทอยู่ใน luteus บ่งชี้แผ่น ( 0.5 mg mL − 1 เมตร luteus 10 μ g / ml
E . coli ไอวี่ , 0.5 % dextrose , 1.5% กาแลคโตส 0.71 % difco ynb โดยไม่
( NH4 ) 2so4 , 0 .25% ( NH4 ) 2so4 0.077 % , CSM −ปานเจริญ ) และโต 4 วัน ที่ 30 องศา รัศมีรูป
แพร่หลายอาณานิคมสุ่มลำดับ