The above experiments strongly sugg

The above experiments strongly suggest that microneme proteins are involved in cell recognition and/or attachment and entry. To examine directly the binding of microneme proteins to host cells, we used MIC2 as a surrogate marker and tested the ability of both secreted microneme proteins contained in excretory±secretory antigen (ESA) preparations and microneme proteins isolated from semi-puri®ed micronemes to bind to HFF cells. Binding was analysed by incubation of host cell monolayers with protein samples at 128C to avoid possible uptake by endocytosis. After incubation with ESA or puri®ed microneme proteins, the supernatant was removed, cells were washed extensively, and thecell-boundfraction(CBF)was isolated by detergent lysis. The presence of MIC2 in the unbound fraction, the washes and the CBF was compared by SDS±PAGE and Western blotting. MIC2 was abundant in both the ESA and the microneme protein preparation that were recovered in the supernatants after incubation (referred to as SUP in Fig. 7). MIC2 was also detected in the CBF from the microneme protein preparation, but not in the corresponding CBF from the ESA fraction (Fig. 7). Phosphorimage analysis in comparison with dilution standards that were loaded on the same gel revealed that

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

The above experiments strongly suggest that microneme proteins are involved in cell recognition and/or attachment and entry. To examine directly the binding of microneme proteins to host cells, we used MIC2 as a surrogate marker and tested the ability of both secreted microneme proteins contained in excretory±secretory antigen (ESA) preparations and microneme proteins isolated from semi-puri®ed micronemes to bind to HFF cells. Binding was analysed by incubation of host cell monolayers with protein samples at 128C to avoid possible uptake by endocytosis. After incubation with ESA or puri®ed microneme proteins, the supernatant was removed, cells were washed extensively, and thecell-boundfraction(CBF)was isolated by detergent lysis. The presence of MIC2 in the unbound fraction, the washes and the CBF was compared by SDS±PAGE and Western blotting. MIC2 was abundant in both the ESA and the microneme protein preparation that were recovered in the supernatants after incubation (referred to as SUP in Fig. 7). MIC2 was also detected in the CBF from the microneme protein preparation, but not in the corresponding CBF from the ESA fraction (Fig. 7). Phosphorimage analysis in comparison with dilution standards that were loaded on the same gel revealed that <2±3% or 20±30ng of the input MIC2 protein was bound under these conditions. As a negative control, we also analysed the binding of GRA1, a protein that is found in ESA and is a contaminant of the microneme fraction, but is not thought to bind to host cells. Although it was readily detected in the supernatant fraction, little or no GRA1 was found in either CBF.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การทดลองดังกล่าวข้างต้นขอแนะนำให้โปรตีน microneme มีส่วนร่วมในการรับรู้ของเซลล์และ / หรือสิ่งที่แนบและรายการ ในการตรวจสอบโดยตรงผูกพันของโปรตีน microneme ไปยังเซลล์เป็นเจ้าภาพเราใช้ MIC2 เป็นเครื่องหมายตัวแทนและทดสอบความสามารถของทั้งสองหลั่งโปรตีน microneme ที่มีอยู่ในสารคัดหลั่งขับถ่าย±นี้ (ESA) การเตรียมการและโปรตีนที่แยกได้จาก microneme กึ่งpuri®ed micronemes ไป ผูกกับเซลล์ HFF ผูกได้รับการวิเคราะห์โดยการบ่ม monolayers เซลล์โฮสต์ที่มีตัวอย่างโปรตีนที่ 128C เพื่อหลีกเลี่ยงการดูดซึมไปได้โดย endocytosis หลังจากการบ่มกับอีเอสเอหรือpuri®edโปรตีน microneme, ใสจะถูกลบออกเซลล์ถูกล้างอย่างกว้างขวางและ thecell-boundfraction (CBF) ที่แยกได้โดยการสลายผงซักฟอก การปรากฏตัวของ MIC2 ในส่วนไม่ได้ผูกไว้ที่ล้างและ CBF เปรียบเทียบโดย SDS ±หน้าและซับตะวันตก MIC2 อุดมสมบูรณ์ทั้งในอีเอสเอและเตรียมโปรตีน microneme ที่ถูกกู้คืนได้ใน supernatants หลังจากบ่ม (เรียกว่าจีบในรูปที่. 7) MIC2 ที่ตรวจพบยังอยู่ใน CBF จากการเตรียมโปรตีน microneme แต่ไม่ได้อยู่ใน CBF ที่สอดคล้องกันจากส่วนอีเอสเอ (รูปที่. 7) การวิเคราะห์ Phosphorimage ในการเปรียบเทียบกับมาตรฐานการลดสัดส่วนที่ถูกโหลดในเจลเดียวกันเปิดเผยว่า <2 ± 3% หรือ 20 ± 30ng ของโปรตีน MIC2 การป้อนข้อมูลที่ถูกผูกไว้ภายใต้เงื่อนไขเหล่า เป็นตัวควบคุมเชิงลบเรายังวิเคราะห์ผลผูกพันของ GRA1 โปรตีนที่พบในอีเอสเอและสารปนเปื้อนของส่วน microneme ที่ แต่ไม่ได้คิดที่จะผูกกับเซลล์เป็นเจ้าภาพ แม้ว่ามันจะถูกตรวจพบได้อย่างง่ายดายในส่วนใสที่ GRA1 น้อยหรือไม่มีเลยก็พบว่าทั้งใน CBF

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การทดลองข้างต้นขอแนะนําว่าโปรตีนที่เกี่ยวข้องในการ microneme เซลล์และ / หรือสิ่งที่แนบและรายการ เพื่อศึกษาการจับของโปรตีนโดยตรง microneme โฮสต์เซลล์เราใช้ mic2 เป็นเครื่องหมายตัวแทนและทดสอบความสามารถของทั้ง microneme หลั่งโปรตีนที่มีอยู่ในระบบขับถ่าย±พบแอนติเจน ( ESA ) การเตรียมและโปรตีนที่แยกได้จาก microneme กึ่งปุริ®เอ็ด micronemes ผูก hff เซลล์ ผูกพัน ? โดยบ่มเซลล์โฮสต์ monolayers ตัวอย่างโปรตีนที่ 128c เพื่อเลี่ยงการเอนโดไซโทซิส .หลังจากบ่มกับ ESA หรือพู®เอ็ด microneme โปรตีน , นำออกเซลล์ถูกล้างอย่างกว้างขวางและ thecell boundfraction ( มูลนิธิสายธารพระพร ) ได้ โดยการสลายผงซักฟอก การปรากฏตัวของ mic2 ในหลุดเศษส่วน , ล้างและมูลนิธิสายธารพระพรเทียบโดยเฉพาะหน้า±และ Western blotting .mic2 อยู่มากมาย ทั้งใน microneme ESA และโปรตีนที่พบในการเตรียม supernatants หลังจากบ่ม ( เรียกว่าเป็น sup ในรูปที่ 7 ) mic2 ยังถูกตรวจพบในมูลนิธิสายธารพระพรจาก microneme โปรตีน การเตรียมการ แต่ไม่ใช่ในมูลนิธิสายธารพระพรที่สอดคล้องกันจาก ESA เศษส่วน ( รูปที่ 7 )การวิเคราะห์ phosphorimage เปรียบเทียบกับมาตรฐานการเจือจางที่โหลดบนเจลเดียวกันพบว่า < 2 ± 3 % หรือ 20 ± 30ng ของใส่ mic2 โปรตีนถูกผูกไว้ภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้ เป็นชุดควบคุมลบ นอกจากนี้เรายังได้วิเคราะห์การจับ gra1 , โปรตีนที่พบใน อีซา และเป็น การปนเปื้อนของ microneme เศษส่วน แต่ไม่คิดว่าจะผูกกับโฮสต์เซลล์ถึงแม้ว่ามันพร้อมที่ตรวจพบในสัดส่วนสูง ๆ หรือไม่ gra1 พบใน
มูลนิธิสายธารพระพร .