and 130 mmol/L NaCl at a pH of 7.4)

and 130 mmol/L NaCl at a pH of 7.4) to remove
nonadherent cells and were dried in an inverted
position. Adherent bacteria were fi xed with 95%
ethanol and stained with 100 μL of 1% crystal violet
(Merck, France) for 5 min. Th e excess stain was
rinsed and poured off and the wells were washed 3
times with 300 μL of sterile distilled water. Th e water
was then cleared and the microplates were air dried.
Th e optical density of each well was measured at 595
nm (OD595) using an automated Multiskan reader
(GIO DE VITA E C, Rome, Italy). Adhesion ability
was interpreted as high (OD595 ≥ 1), fair (0.1 ≤ OD595
< 1), or slight (OD595 < 0.1).
Artemia gnotobiotic culture
Experiments were performed with Artemia salina
cysts collected from the saltworks of Sfax. Bacteria-free
cysts and nauplii were obtained via decapsulation, as
described by Sorgeloos et al. (15). Decapsulated cysts
were washed with fi ltered and autoclaved sea water
(FASW) over a 50-μm sterile fi lter net. Th is procedure
was repeated 9 times, using new FASW. Aft er this
step, washed decapsulated cysts were transferred to
a sterile Falcon-brand culture tube containing 30 mL
of FASW. Th e Falcon tube was capped, placed on a
shaking incubator (28 °C, 120 rpm), and exposed to a
constant incandescent light. Aft er 18-20 h, 10 axenic
nauplii second instars were picked and transferred
to sterile Falcon tubes containing 30 mL of FASW,
together with the amount of feed scheduled for day 1.
All manipulations were carried out under a laminar
fl ow hood and all necessary tools were previously
autoclaved at 120 °C for 20 min.
Inoculation of bacterial suspensions
Sterile 60-mL Falcon tubes containing 10 axenic
nauplii second instars were inoculated with benefi cial
bacterial strains (107-108 cfu/mL) and pathogenic
Vibrio (106 cfu/mL) from pure culture in the
exponential growth phase. Th e concentration of each
bacterial strain was estimated through a regression
analysis of the optical density of the pure culture. Th e
number of culture forming units per milliliter was
determined using petri plates with marine agar.
Experimental design
To evaluate the eff ect of the bacterial strains on the
Artemia culture, 8 challenge tests were performed:
Artemia with commercial food (red pepper, BERN
AQUA) (A + AL), Artemia axenic (A. axe), Artemia

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

และ 130 mmol/L NaCl ที่ pH 7.4) เอาnonadherent เซลล์ และถูกอบแห้งในตัวกลับตำแหน่ง นฤมลแบคทีเรียไร้สาย xed 95%เอทานอล และสีกับ μL 100 ของ 1% คริสตัลไวโอเลต(เมอร์ค ฝรั่งเศส) สำหรับคืน Th อี คราบส่วนเกินได้rinsed และ poured ปิด และบ่อถูกล้าง 3เท่ากับ 300 μL น้ำกลั่นฆ่าเชื้อ น้ำ e Thจากนั้นมีล้าง และ microplates มีอากาศแห้งTh อีแสงความหนาแน่นของแต่ละบ่อเป็นวัดที่ 595nm (OD595) ใช้อ่านเป็น Multiskan โดยอัตโนมัติ(จีโอเดอวีตา E C โรม อิตาลี) ความสามารถในการยึดเกาะถูกตีความเป็นสูง (OD595 ≥ 1), ดี (0.1 ≤ OD595< 1), หรือเล็กน้อย (OD595 < 0.1)Artemia gnotobiotic วัฒนธรรมดำเนินการทดลองกับโรงแรมสลี Artemiaซีสต์ที่รวบรวมจาก saltworks ของ Sfax ปลอดเชื้อแบคทีเรียซีสต์และ nauplii ได้รับผ่าน decapsulation เป็นอธิบายโดย Sorgeloos et al. (15) Decapsulated ซีสต์ถูกล้าง ด้วย ltered ไร้สายและน้ำทะเล autoclaved(FASW) ไป 50-μm ไร้สายผ่านการฆ่าเชื้อและวัสดุเป็นสุทธิ Th เป็นกระบวนได้ซ้ำเวลา 9 ใช้ FASW ใหม่ Aft เอ้อ นี้ขั้นตอน decapsulated หินซีสต์ได้โอนย้ายไปใส่แบรนด์เหยี่ยววัฒนธรรมหลอดประกอบด้วย 30 mLของ FASW Th อีหลอดเหยี่ยวได้ปรบมือ วางบนสั่น incubator (28 ° C, 120 รอบต่อนาที), และสัมผัสกับการคงไฟ Aft เอ้อ h 18-20, 10 axenicnauplii instars สองเบิก และโอนย้ายการเหยี่ยวใส่ท่อ 30 mL มีของ FASWกับจำนวนอาหารที่จัดกำหนดการสำหรับวันที่ 1Manipulations ภาพทั้งหมดได้ดำเนินการภายใต้ laminar เป็นfl อ่าว ฮูดและเครื่องมือที่จำเป็นทั้งหมดเคยautoclaved ที่ 120 ° C สำหรับ 20 นาทีInoculation ฟโรแบคทีเรียหลอดเหยี่ยว 60 mL กระบอกประกอบด้วย 10 axenicnauplii instars สองมี inoculated กับ benefi ซึ่งกันและกันสายพันธุ์แบคทีเรีย (107-108 cfu/mL) และ pathogenicต่อ (106 cfu/mL) จากวัฒนธรรมบริสุทธิ์ในการเรขาคณิตระยะ Th อีความเข้มข้นของแต่ละต้องใช้แบคทีเรียถูกประเมินโดยใช้การถดถอยการวิเคราะห์ความหนาแน่นออปติคัลของวัฒนธรรมบริสุทธิ์ อี Thมีจำนวนหน่วยละ milliliter เป็นวัฒนธรรมกำหนดด้วยจาน petri agar ทะเลออกแบบการทดลองประเมิน eff ect ของสายพันธุ์แบคทีเรียในการArtemia วัฒนธรรม ความท้าทายที่ 8 ได้ดำเนินการทดสอบ:Artemia ค้าอาหาร (พริกแดง เบิร์นAQUA) (A + AL), Artemia axenic (อ.ขวาน), Artemia

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

และ 130 มิลลิโมล / ลิตรโซเดียมคลอไรด์ที่ pH 7.4)
เพื่อเอาเซลล์nonadherent
และแห้งในคว่ำตำแหน่ง แบคทีเรียพรรคพวกถูกไฟ xed ด้วย 95%
เอทานอลและย้อมด้วยสี 100 ไมโครลิตรของคริสตัลสีม่วง 1%
(เมอร์ค, ฝรั่งเศส) เป็นเวลา 5 นาที Th
e-คราบส่วนเกินถูกล้างและเทออกและหลุมถูกล้าง3
ครั้งด้วย 300 ไมโครลิตรของน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อ น้ำ Th
e-เคลียร์แล้วและได้รับอากาศแห้งmicroplates.
th อีหนาแน่นแสงของดีแต่ละวัดที่ 595
นาโนเมตร (OD595) โดยอัตโนมัติอ่าน Multiskan
(GIO DE VITA EC, โรม, อิตาลี) ความสามารถในการยึดเกาะที่ถูกตีความสูง (OD595 ≥ 1) ยุติธรรม (≤ 0.1 OD595 <1) หรือเล็กน้อย (OD595 <0.1). อาร์ทีเมีย gnotobiotic วัฒนธรรมการทดลองดำเนินการกับอาร์ทีเมียซาลิซีสต์ที่เรียกเก็บจากSaltworks ของ Sfax แบคทีเรียฟรีซิสต์และนอเพลียสที่ได้รับผ่านทาง decapsulation เป็นอธิบายโดยSorgeloos et al, (15) ซีสต์ฟอกเปลือกทำการถูกล้างด้วยไฟ ltered และน้ำทะเลอิฐ (FASW) กว่าสายการฆ่าเชื้อ 50 ไมครอนกรองสุทธิ Th เป็นขั้นตอนซ้ำครั้งที่9 โดยใช้ FASW ใหม่ ท้ายเอ้อนี้ขั้นตอนการล้างถุงน้ำฟอกเปลือกทำการย้ายไปหลอดวัฒนธรรมเหยี่ยวแบรนด์ที่มีการฆ่าเชื้อ30 มิลลิลิตรของFASW หลอดอีเหยี่ยว Th ถูกปกคลุมวางอยู่บนศูนย์บ่มเพาะสั่น(28 ° C, 120 รอบต่อนาที) และสัมผัสกับไฟสว่างจ้าอย่างต่อเนื่อง เอ้อท้าย 18-20 ชั่วโมง 10 axenic วัยสองนอเพลียสถูกเลือกและโอนไปยังหลอดเหยี่ยวที่มีการฆ่าเชื้อ 30 มิลลิลิตร FASW, ร่วมกันกับปริมาณของอาหารที่กำหนดไว้สำหรับวันที่ 1 manipulations ทั้งหมดได้ดำเนินการภายใต้ชั้นชั้นโอ๊ยและเครื่องดูดควันเครื่องมือที่จำเป็นก่อนหน้านี้เบาที่ 120 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาที. การฉีดวัคซีนของสารแขวนลอยแบคทีเรียเชื้อ 60 มิลลิลิตรหลอดเหยี่ยวที่มี 10 axenic วัยสองนอเพลียสที่ได้รับเชื้อด้วย benefi cial สายพันธุ์แบคทีเรีย (107-108 cfu / มิลลิลิตร) และทำให้เกิดโรควิบริโอ(106 โคโลนี / มิลลิลิตร) จากเชื้อบริสุทธิ์ในขั้นตอนการเจริญเติบโต ความเข้มข้นของอี Th ของแต่ละสายพันธุ์แบคทีเรียที่เป็นที่คาดกันผ่านการถดถอยการวิเคราะห์ความหนาแน่นของแสงของวัฒนธรรมที่บริสุทธิ์ อี Th จำนวนของวัฒนธรรมการจัดตั้งหน่วยต่อมิลลิลิตรได้. กำหนดโดยใช้จานเพาะเชื้อที่มีอาหารเลี้ยงเชื้อทางทะเลการออกแบบการทดลองเพื่อประเมินเอฟเอฟect ของสายพันธุ์ของเชื้อแบคทีเรียในวัฒนธรรมอาร์ทีเมีย, 8 การทดสอบความท้าทายที่ได้ดำเนินการ: อาร์ทีเมียกับอาหารในเชิงพาณิชย์ (พริกแดง, เบิร์นอควา) (A + AL) axenic อาร์ทีเมีย (กขวาน), อาร์ทีเมีย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

และ 130 mmol / L NaCl ที่พีเอช 7.4 ) เพื่อเอา
nonadherent เซลล์และแห้งในการคว่ำ
ตำแหน่ง พลพรรคแบคทีเรียถูก Fi xed ด้วย 95% เอทานอล และย้อมด้วย
μ 100 ลิตร 1 % คริสตัลสีม่วง
( Merck , ฝรั่งเศส ) 5 นาที th e ส่วนเกินเป็นคราบ
rinsed และเทปิด และบ่อได้ซัก 3
ครั้ง 300 μผมเป็นหมันของน้ำกลั่น th e
น้ำแล้วล้างและแห้ง microplates .
e th แสงความหนาแน่นของแต่ละดีวัดที่ 595
nm ( od595 ) โดยใช้แบบอัตโนมัติ multiskan อ่าน
( จิโอ เดอ วีต้า E C , โรม , อิตาลี ) ความสามารถในการตีความ
เป็นสูง ( od595 ≥ 1 ) , Fair ( 0.1 ≤ od595
< 1 ) หรือเล็กน้อย ( od595 < 0.1 ) gnotobiotic วัฒนธรรม

อาร์ททดลองกับ Artemia salina
ซีสต์ที่เรียกเก็บจาก saltworks ของป๊อกกี้ . แบคทีเรียซีสต์ และได้ผ่าน nauplii ฟรี

decapsulation ตามที่อธิบายโดย sorgeloos et al . ( 15 ) decapsulated ซีสต์
ถูกล้างด้วย ltered Fi และสังเคราะห์น้ำทะเล
( fasw ) กว่า 50 μ M เป็นหมัน Fi lter สุทธิ ที่เป็นขั้นตอน
กัน 9 ครั้ง การใช้ใหม่ fasw . เอ้อขั้นตอนนี้

ซัก decapsulated ซีสต์ คือเป็นหมันฟอลคอนวัฒนธรรมแบรนด์หลอดบรรจุ 30 ml
ของ fasw . E TH Falcon หลอดถูกปกคลุมอยู่ในตู้อบ ( 28 องศา C
เขย่า 120 รอบต่อนาที และสัมผัสกับแสงหลอดไส้เป็น
คงที่ เอ้อ 18-20 ชั่วโมง , 10 axenic
nauplii ที่สองโดยถูกเลือกและโอน
ปลอดเชื้อฟอลคอนหลอดบรรจุ 30 มล. fasw
, ด้วยกันกับปริมาณอาหารที่กำหนดไว้สำหรับวันที่ 1 .
ทุกการตกแต่ง ได้ดำเนินการภายใต้การ
FL . เครื่องดูดควันและทุกเครื่องมือที่จำเป็นก่อนหน้านี้
สังเคราะห์ที่ 120 °องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาที

ปลอดเชื้อแบคทีเรียสารแขวนลอยเชื้อ 60 ml ฟอลคอนหลอดบรรจุ 10 axenic
nauplii ที่สองโดยปลูกเชื้อด้วย benefi ่
แบคทีเรีย ( 107-108 CFU / ml )
( โรควิบริโอ 106 cfu / ml ) จากเชื้อบริสุทธิ์ใน
ระยะการเจริญเติบโตที่ชี้แจง