3. Quantitative determination of GV

3. Quantitative determination of GV and aglycones 1–7 present in vanillons at different stages of development
The presence of GV and phenolic compounds 1–7 in extracts of V. pompona ssp. grandiflora was demonstrated through comparisons of their HPLC-retention times, UV-DAD profiles, and ESI-MS spectra against that of authentic samples. The alcohols were identified through the ion [M+H−H2O]+, whereas all others showed the [M+H]+ signal. In the case of GV, its structure was verified through the presence of m/z 353, 337 and 153, corresponding to the ions [M+K]+, [M+Na]+ and [M+1–162]+, respectively. The latter ion fragment corresponds to loss of glucose.

The HPLC-quantitative study was performed on twenty-four green intact fruits at seven different stages of maturation. The quantities of GV and free and total aglycones 1–7, were calculated based on the amount present on enzyme-treated and non-treated extracts. The results, plotted against time after pollination, are shown in Fig. 3. The data suggest that vanillin and the other six phenolic compounds accumulate in the fruit as both glucosides and free forms throughout maturation. This result coincides with previous observations (Brodelius, 1994). In the case of 4-hydroxybenzyl alcohol, 4-hydroxybenzoic acid, and anisyl alcohol, it is clear, based on the ratio of free/total aglycone, that these compounds exist mainly as glucosides throughout fruit development. For all other compounds, the glucoside form begins to predominate towards the end of maturation. These findings support unsubstantiated data, recently referred to by Lapeyre-Montes, Conejero, Verdeil, and Odoux (2011), which were associated with the evolution of vanillin/glucovanillin during V. planifolia fruit development. Only three glucosides, in addition to GV, were recognised by comparing the HPLC-DAD chromatograms of crude and enzyme-treated extracts ( Fig. 2B and C). These were glucosides of 3, 4, and 7 that appeared as broad peaks at retention times of 6.2–6.4 min (3′), 3.9–4.3 min (4′), and 16.9–17.4 min (7′). These glucosides have been reported earlier in V. planifolia extracts ( Dignum et al., 2004, Kanisawa, 1993 and Odoux, 2011) and in order to unequivocally confirm their presence in extracts of V. pompona ssp. grandiflora, an LC–MS study was conducted. The ions m/z [M+K]+, [M+Na]+, and [M+H-162]+ in the MS spectra corroborated their glucosidic nature (see Supplementary data). In addition, and due to the unusual behaviour exhibited by 7′ – glucoside eluting after the aglycone – this compound was isolated by semipreparative HPLC. The NMR data (1H NMR, 13C NMR, COSY and HSQC) agree with that reported in the literature ( Itokawa et al., 1982 and Kitajima et al., 1998). Glucosides of the other minor constituents, 2, 5 and 6, were not identified possibly because of signal loss due to broadening or overlapping.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3. เชิงปริมาณกำหนดจีวีและ aglycones ปัจจุบัน 1 – 7 ใน vanillons ในระยะต่าง ๆ ของการพัฒนาของจีวีและสารฟีนอ 1 – 7 ในบางส่วนของ V. pompona ssp. ซากได้แสดงถึงการเปรียบเทียบ ของ HPLC รักษาเวลา พ่อ UV โพรไฟล์ แรมสเป็คตรา ESI MS กับที่อย่างแท้จริง Alcohols ที่ระบุผ่านไอออน [M + H−H2O] +, ใน ขณะที่คนอื่น ๆ ทั้งหมดแสดงให้เห็นว่า [M + H] + สัญญาณ ในกรณีของจีวี โครงสร้างถูกตรวจสอบผ่านของ m/z 353, 337 และ 153 ที่สอดคล้องกับประจุ [M + K] +, [M + นา] + [M + 1-162] และ +, ตามลำดับ ส่วนไอออนหลังตรงการสูญเสียของกลูโคสการศึกษาเชิงปริมาณ HPLC ถูกดำเนินการบนผลไม้เหมือนเดิมยี่สิบสี่เขียวที่เจ็ดขั้นตอนแตกต่างกันของพ่อแม่ จีวีและฟรี และรวม aglycones 1 – 7 ปริมาณมีคำนวณตามยอดเงินปัจจุบันในสารสกัด รักษาเอนไซม์ และไม่ถือว่า มีแสดงผล พล็อตกับเวลาหลัง pollination ใน Fig. 3 ข้อมูลแนะนำว่า วานิลลินและอื่น ๆ 6 ม่อฮ่อมสะสมอยู่ในผลไม้เป็น glucosides และฟรีฟอร์มตลอดพ่อแม่ ผลลัพธ์นี้กรุณาสังเกตก่อนหน้านี้ (Brodelius, 1994) ในกรณีที่แอลกอฮอล์ 4 hydroxybenzyl กรด 4-hydroxybenzoic และแอลกอฮอล์ anisyl เป็นที่ชัดเจน ตามอัตราส่วนของฟรี/รวม aglycone ที่สารประกอบเหล่านี้มีอยู่ส่วนใหญ่เป็น glucosides ตลอดพัฒนาผลไม้ สำหรับสารอื่น ๆ ทั้งหมด แบบฟอร์ม glucoside เริ่ม predominate ในตอนท้ายของพ่อแม่ ผลการวิจัยนี้สนับสนุนข้อมูล unsubstantiated เพิ่ง อ้างอิง โดย Lapeyre Montes, Conejero, Verdeil และ Odoux (2011), ซึ่งเกี่ยวข้องกับวิวัฒนาการของวานิลลิ น/glucovanillin ระหว่าง V. planifolia ผลไม้พัฒนา เพียงสาม glucosides นอกจากจีวี ถูกยัง โดยการเปรียบเทียบ chromatograms HPLC-พ่อของสารสกัดหยาบ และ รักษาเอนไซม์ (Fig. 2B และ C) เหล่านี้ถูก glucosides 3, 4 และ 7 ที่ปรากฏเป็นยอดกว้างรักษาเวลา 6.2 – 6.4 นาที (3′), 3.9-4.3 นาที (4′), และ 16.9-17.4 นาที (7′) Glucosides เหล่านี้มีการรายงานก่อนหน้านี้ใน V. planifolia สารสกัด (Dignum et al., 2004, Kanisawa, 1993 และ Odoux, 2011) และได้ดำเนินการศึกษา LC – MS เพื่อยืนยันสถานะของตนในบางส่วนของ V. ซาก ssp. pompona, unequivocally ประจุ m/z [M + K] +, [M + นา] +, และ [M + H-162] + ใน MS แรมสเป็คตรา corroborated ธรรมชาติของพวกเขา glucosidic (ดูข้อมูลเพิ่มเติม) นอกจากนี้ และเนื่อง จากพฤติกรรมผิดปกติที่จัดแสดง โดย 7′ – glucoside eluting หลังจาก aglycone – บริเวณนี้ถูกแยกต่างหาก โดย semipreparative HPLC ข้อมูล NMR (1H NMR, 13C NMR โคซี่ และ HSQC) เห็นด้วยกับที่รายงานในวรรณคดี (Itokawa et al., 1982 และ Kitajima et al., 1998) Glucosides ของอื่น ๆ รอง constituents, 2, 5 และ 6 ไม่ระบุอาจเนื่องจากการสูญเสียสัญญาณจาก broadening หรือซ้อนทับกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3. การกำหนดปริมาณและ GV aglycones 1-7 อยู่ใน vanillons ในแต่ละขั้นตอนของการพัฒนา
การปรากฏตัวของ GV และสารประกอบฟีนอล 1-7 ในสารสกัดจากวีเอสเอส pompona grandiflora ได้รับการแสดงให้เห็นถึงการเปรียบเทียบครั้ง HPLC-การเก็บรักษาของพวกเขาโปรไฟล์ UV-DAD และสเปกตรัม ESI-MS ต่อว่าของกลุ่มตัวอย่างที่แท้จริง แอลกอฮอล์ที่ถูกระบุผ่านไอออน [M + H-H2O] + ในขณะที่คนอื่น ๆ ทั้งหมดแสดงให้เห็น [M + H] + สัญญาณ ในกรณีของการ GV โครงสร้างได้รับการตรวจสอบผ่านการปรากฏตัวของม. / z 353, 337 และ 153 ซึ่งสอดคล้องกับไอออน [M + K] + [M + นา] + และ [M + 1-162] + ตามลำดับ ส่วนไอออนหลังสอดคล้องกับการสูญเสียของกลูโคส. การศึกษาเชิงปริมาณ HPLC ได้ดำเนินการในยี่สิบสี่ผลไม้สีเขียวเหมือนเดิมที่เจ็ดขั้นตอนต่างๆของการเจริญเติบโต ปริมาณ GV และ aglycones ฟรีและรวม 1-7 จะถูกคำนวณขึ้นอยู่กับจำนวนเงินในปัจจุบันได้รับการรักษาเอนไซม์และสารสกัดที่ไม่ได้รับการรักษา ผลพล็อตกับเวลาหลังจากการผสมเกสรจะแสดงในรูป 3. ข้อมูลที่ชี้ให้เห็นว่าวานิลและอื่น ๆ หกสารประกอบฟีนอสะสมในผลไม้เป็น glucosides ทั้งสองและรูปแบบฟรีทั่วเจริญเติบโต ผลที่ได้นี้สอดคล้องกับข้อสังเกตก่อนหน้านี้ (Brodelius, 1994) ในกรณีของเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ 4 hydroxybenzyl กรด 4 hydroxybenzoic และเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ anisyl ก็เป็นที่ชัดเจนขึ้นอยู่กับอัตราส่วนของฟรี / รวม aglycone ว่าสารเหล่านี้มีอยู่ส่วนใหญ่เป็น glucosides ตลอดการพัฒนาผลไม้ สำหรับสารประกอบอื่น ๆ ทุกรูปแบบ glucoside เริ่มที่จะมีอิทธิพลเหนือในช่วงปลายของการเจริญเติบโต การค้นพบนี้สนับสนุนข้อมูลพร้อมเพรียงเมื่อเร็ว ๆ นี้เรียกตาม Lapeyre-Montes, Conejero, Verdeil และ Odoux (2011) ซึ่งมีความสัมพันธ์กับวิวัฒนาการของวานิล / glucovanillin โวลต์ในช่วง planifolia พัฒนาผลไม้ เพียงสาม glucosides นอกเหนือไปจาก GV, ได้รับการยอมรับโดยการเปรียบเทียบ chromatograms HPLC-DAD น้ำมันดิบและสารสกัดจากเอนไซม์ที่ได้รับการรักษา (รูป. 2B และ C) เหล่านี้เป็น glucosides 3, 4 และ 7 ยอดเขาที่ปรากฏในวงกว้างอย่างครั้งก่อนการเก็บรักษา 6.2-6.4 นาที (3) 3.9-4.3 นาที (4) และ 16.9-17.4 นาที (7) glucosides เหล่านี้ได้รับการรายงานก่อนหน้านี้ในโวลต์สกัด planifolia (Dignum et al., 2004 Kanisawa, 1993 และ Odoux 2011) และเพื่อที่จะแจ่มแจ้งยืนยันสถานะของตนในสารสกัดจากวีเอสเอส pompona grandiflora, การศึกษา LC-MS ได้ดำเนินการ ไอออนเมตร / z [M + K] + [M + นา] + และ [M + H-162] + ใน MS สเปกตรัมยืนยัน glucosidic ธรรมชาติของพวกเขา (ดูข้อมูลเพิ่มเติม) นอกจากนี้และเนื่องจากพฤติกรรมที่ผิดปกติแสดงโดย 7 '- eluting glucoside หลังจาก aglycone - สารนี้ถูกแยกออกโดย semipreparative HPLC ข้อมูล NMR (1H NMR, 13C NMR, โคซี่และ HSQC) เห็นด้วยกับที่รายงานในวรรณคดี (อิโตคาวา et al., 1982 และ Kitajima et al., 1998) glucosides ขององค์ประกอบย่อยอื่น ๆ , 2, 5 และ 6 ยังไม่ได้ระบุอาจจะเป็นเพราะการสูญเสียสัญญาณเนื่องจากการขยายหรือทับซ้อนกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3 . การวิเคราะห์ปริมาณ GV aglycones 1 – 7 และปัจจุบันใน vanillons ในระยะต่างๆของการพัฒนา
แสดง 1 – 7 ผสมสารประกอบฟีนอลและสารสกัดของโวลต์ pompona ssp . grandiflora ) ผ่านการเปรียบเทียบของตน 2 ครั้ง สภาพ uv-dad และ esi-ms Spectra กับตัวอย่างจริง แอลกอฮอล์ถูกระบุผ่าน M H −ไอออน [ H2O ]ในขณะที่คนอื่นให้ [ M ] สัญญาณ ในกรณีของ GV , โครงสร้างของยืนยันผ่านการแสดงตนของ M / Z 353 และ 153 , สอดคล้องกับไอออน [ M K ] , [ M na ] และ [ 1 ] ( 162 ) ส่วนรายละเอียดหลังสอดคล้องกับการสูญเสียกลูโคส .

HPLC การศึกษาแสดงบนผลไม้เหมือนเดิม 24 สีเขียวในเจ็ดขั้นตอนที่แตกต่างกันของวุฒิภาวะปริมาณของ GV และฟรีและรวม aglycones 1 – 7 , คำนวณตามปริมาณที่มีอยู่ในเอนไซม์และไม่ปฏิบัติ สารสกัด ผลลัพธ์ วางแผนกับเวลาหลังจากการผสมเกสร , แสดงในรูปที่ 3 ข้อมูลแนะนำว่ายาสีฟันและอื่น ๆหกสารอินทรีย์สะสมอยู่ในผลไม้มีทั้ง กลูโคไซด์และฟรีฟอร์มตลอดทั้งวุฒิภาวะผลที่ได้นี้สอดคล้องกับข้อสังเกตก่อนหน้านี้ ( brodelius , 1994 ) ในกรณีของ 4-hydroxybenzyl แอลกอฮอล์ 4-hydroxybenzoic anisyl กรด และแอลกอฮอล์ มันชัดเจน ขึ้นอยู่กับอัตราส่วนของฟรีรวมี่ว่าสารประกอบเหล่านี้มีอยู่ส่วนใหญ่เป็นกลูโคไซด์ตลอดการพัฒนาผลไม้ สำหรับสารประกอบอื่น ๆ รูปแบบ และเริ่มมีอำนาจเหนือในตอนท้ายของวุฒิภาวะการค้นพบนี้สนับสนุนข้อมูลที่ยังไม่ได้ยืนยัน เมื่อเร็ว ๆ นี้เรียกว่า โดย lapeyre เญิน conejero verdeil , , , และ odoux ( 2011 ) ซึ่งมีความสัมพันธ์กับวิวัฒนาการของวานิล / glucovanillin ระหว่างการพัฒนาของผล V Planifolia . เพียงสาม กลูโคไซด์ นอกจาก GV , ได้รับการยอมรับโดยการเปรียบเทียบ hplc-dad กลิ่นของน้ำมันสกัดจากเอนไซม์ ( รูปที่ 2B และ C )เหล่านี้ คือ กลูโคไซด์ 3 , 4 , และ 7 ที่ปรากฏเป็นยอดคร่าว ๆที่เวลากัก 6.2 – 6.4 มิน ( 3 School ) , 3.9 และ 4.3 มิน ( 4 School ) และขายสินค้า ( 7 ) มิน’ ) กลูโคไซด์เหล่านี้ได้รับการรายงานก่อนหน้านี้ในโวลต์ Planifolia สารสกัด ( dignum et al . , 2004 , kanisawa , 2536 และ odoux 2011 ) และเพื่อที่จะเป็นการยืนยันสถานะของพวกเขาใน สารสกัดของโวลต์ pompona ssp . grandiflora ,มี LC – MS ศึกษา . ไอออน M / Z [ M K ] , [ M na ] และ [ M ] ใน h-162 MS spectra ยืนยันธรรมชาติของกลูโคส ( ดูข้อมูลเพิ่มเติม ) นอกจากนี้ และเนื่องจากการที่มีพฤติกรรมผิดปกติ โดย 7 ’–และ hexane หลังจากี่–สารนี้ได้ โดย semipreparative HPLC . ข้อมูล NMR ( 1H NMR , 13C NMR ,อบอุ่น และ hsqc ) เห็นด้วยกับรายงานในวรรณคดี ( โตคาวะ et al . , 1982 และคิตาจิม่า et al . , 1998 ) กลูโคไซด์ ของอื่น ๆเป็นองค์ประกอบเล็กน้อยเป็น 2 , 5 และ 6 ไม่ได้ระบุ อาจจะเป็นเพราะสัญญาณที่สูญเสียเนื่องจากการขยายหรือที่ทับซ้อนกัน .