2.4.2. Determination of ascorbic ac

2.4.2. Determination of ascorbic acid oxidase (AAO) activity
Spectrophotometric analysis was undertaken to measure the enzyme
activity of AAO as described in the previous work (Leong & Oey,
2012) using L-AA as substrate. One unit of AAO activity was defined as
the amount of enzyme AAO required to catalyse the oxidation of
1 μmol of L-AA to dehydro-L-ascorbic acid (DHAA) per minute at 25 °C
and pH 6.0. The reaction mixture consisted of 2500 μl phosphate buffer
(0.1 M NaH2PO4, pH 6.0 containing 0.5 mM EDTA), 100 μl of dailyprepared
5 mM L-AA substrate solution (dissolved in 0.1 M NaH2PO4
buffer, pH 5.6) and 400 μl of carrot extract mixed in a 4 mL quartz
cuvette (path length of 1 cm) (Starna, NSW, Australia). For the blank solution
used as reference, the substrate solution was replaced by 100 μl of
phosphate buffer solution (0.1 M NaH2PO4, pH 6.0 containing 0.5 mM
EDTA). Each measurement was conducted at 265 nm in triplicates
using a UV/vis spectrophotometer (Ultrospec 3300 pro, Amersham
Biosciences, Sweden).
(a)
(e)
(c) (d)
(b)
Fig. 1. Vertical (a) and parallel (b) position of carrots inside the PEF chamber (d) placed in the ELCRACK-HVP 5 equipment (c) and carrots before PEF treatment (e).
S.Y. Leong et al. / Innovative Food Science and Emerging Technologies 26 (2014) 159–167 161
2

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4.2 การกำหนดกิจกรรม oxidase (AAO) กรดแอสคอร์บิคดำเนินการวิเคราะห์ spectrophotometric วัดเอนไซม์นี้กิจกรรมของ AAO ในงานก่อนหน้า (กรรมและ Oey2012) ใช้ L AA เป็นพื้นผิว กิจกรรม AAO หน่วยหนึ่งถูกกำหนดเป็นจำนวนเอนไซม์ AAO ต้อง catalyse ออกซิเดชันของΜmol 1 ของ L-AA กับกรด dehydro-L-แอสคอร์บิค (DHAA) ต่อนาทีที่ 25 ° Cและ pH 6.0 ประกอบด้วยส่วนผสมของปฏิกิริยา 2500 μl ฟอสเฟตบัฟเฟอร์(0.1 M NaH2PO4 ค่า pH 6.0 ประกอบด้วย 0.5 mM EDTA), μl 100 ของ dailypreparedแก้ปัญหาพื้นผิว 5 มม. L-AA (ละลายใน 0.1 M NaH2PO4บัฟเฟอร์ pH 5.6) และ μl 400 ของสารสกัดจากแครอทผสมในควอตซ์ 4 mLcuvette (ความยาวเส้นทางของ 1 cm) (Starna นิวเซาธ์เวลส์ ออสเตรเลีย) สำหรับโซลูชันที่ว่างเปล่าใช้เป็นข้อมูลอ้างอิง แก้ปัญหาพื้นผิวถูกแทนที่ ด้วย μl 100 ของฟอสเฟตบัฟเฟอร์โซลูชัน (0.1 M NaH2PO4 ค่า pH 6.0 ประกอบด้วย 0.5 mMEDTA) วิธีการวัดแต่ละที่ 265 nm ใน triplicatesโดยใช้เครื่องทดสอบกรดด่างมี UV/vis (Ultrospec 3300 pro, Amershamเวลาออก สวีเดน)(a)(e)(c) (d)(b)Fig. 1 แนวตั้ง (ก) และแบบขนาน (b) ตำแหน่งของแครอทภายในหอ PEF (d) ไว้ในอุปกรณ์ 5 ELCRACK HVP (c) และแครอทก่อนรักษา PEF (e)S.Y. เข้าร้อยเอ็ด al. / นวัตกรรมวิทยาศาสตร์การอาหารและเทคโนโลยี 26 (2014) 159-167 1612

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4.2 ความมุ่งมั่นของเอนไซม์วิตามินซี (AAO)
กิจกรรมการวิเคราะห์สเปกได้ดำเนินการในการวัดเอนไซม์กิจกรรมของ
AAO ที่อธิบายไว้ในการทำงานก่อนหน้า (ลีอองและ Oey,
2012) โดยใช้ L-AA เป็นสารตั้งต้น หนึ่งหน่วยของกิจกรรม AAO
ถูกกำหนดเป็นจำนวนเงินที่AAO เอนไซม์ที่จำเป็นในการกระตุ้นการเกิดออกซิเดชันของ
1 ไมโครโมลของ L-AA ถึง dehydro-L-วิตามินซีกรด (DHAA) ต่อนาทีที่ 25 ° C
และมีค่า pH 6.0 ผสมปฏิกิริยาประกอบด้วย 2,500 ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ไมโครลิตร
(0.1 M NaH2PO4 ค่า pH 6.0 ที่มี 0.5 มิลลิ EDTA) 100 ไมโครลิตรของ dailyprepared
5 มิลลิแก้ปัญหาพื้นผิว L-AA (ละลายใน 0.1 M NaH2PO4
บัฟเฟอร์ pH 5.6) และ 400 ไมโครลิตรของสารสกัดจากแครอท ผสมในควอทซ์มิลลิลิตร 4
cuvette (ความยาวเส้นทางของ 1 ซม.) (STARNA, NSW, ออสเตรเลีย) สำหรับการแก้ปัญหาว่างเปล่าใช้เป็นข้อมูลอ้างอิงการแก้ปัญหาสารตั้งต้นก็ถูกแทนที่ด้วย 100 ไมโครลิตรของสารละลายบัฟเฟอร์ฟอสเฟต(0.1 M NaH2PO4 ค่า pH 6.0 ที่มี 0.5 มิลลิEDTA) แต่ละวัดได้ดำเนินการที่ 265 นาโนเมตร triplicates ใช้ spectrophotometer UV / พิพาท (Ultrospec 3300 โปร Amersham ชีววิทยาศาสตร์สวีเดน). (ก) (จ) (ค) (ง) (ข) รูปที่ 1. แนวตั้ง (ก) และแบบขนาน (ข) ตำแหน่งของแครอทภายในห้อง PEF (ง) ไปวางไว้ใน ELCRACK HVP-5 อุปกรณ์ (ค) และแครอทก่อนการรักษา PEF (จ). SY Leong et al, / วิทยาศาสตร์การอาหารนวัตกรรมและเทคโนโลยีใหม่ 26 (2014) 159-167 161 2

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4.2 . การหาปริมาณกรดแอสคอร์บิค oxidase ( aao ) การวิเคราะห์กิจกรรม
) มีวัตถุประสงค์เพื่อวัดกิจกรรมของเอนไซม์
aao ตามที่อธิบายไว้ในผลงานที่ผ่านมา ( Leong &เอ l-aa
2012 ) ใช้เป็นวัตถุดิบ หน่วยหนึ่งของกิจกรรม aao เป็นเช่น
ปริมาณเอนไซม์ aao ต้องเร่งการเกิดออกซิเดชันของ
1 μโมลของกรด l-aa เพื่อ dehydro-l-ascorbic ( dhaa ) ต่อนาทีที่ 25 ° C
และ pH 6.0 . ปฏิกิริยาผสม จำนวน 2500 μ L
( 0.1 M phosphate buffer nah2po4 พีเอช 6.0 ที่มี 0.5 mM EDTA ) , 100 μ l dailyprepared
5 มม. l-aa พื้นผิวโซลูชั่น ( ละลายใน 0.1 M nah2po4
บัฟเฟอร์ pH 5.6 ) และ 400 μลิตรสารสกัดแครอทผสม 4 ml ควอตซ์
คิวเวตต์ ( ความยาว เส้นทางที่ 1 ซม. ) ( starna , NSW , ออสเตรเลีย ) สำหรับโซลูชั่นว่าง
ใช้เป็นอ้างอิงพื้นผิวโซลูชั่นถูกแทนที่ด้วย 100 μ l
สารละลายฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( 0.1 M nah2po4 pH 6.0 ที่มี 0.5 มม.
EDTA ) แต่ละวัดมีวัตถุประสงค์ที่ 265 NM 3 ซ้ำ
ใช้ UV / VIS Spectrophotometer ( ultrospec 3300 โปรชาม
ชีววิทยาศาสตร์ , สวีเดน )
( )
( E )
( C ) ( D )
( b )
รูปที่ 1แนวตั้ง ( ) และแบบขนาน ( B ) ตำแหน่งของแครอทใน PEF แชมเบอร์ ( D ) อยู่ในอุปกรณ์ elcrack-hvp 5 ( C ) และแครอทก่อน PEF บำบัด ( E )
s.y. Leong et al . วิทยาศาสตร์ เทคโนโลยีและนวัตกรรมอาหาร 26 ( 2014 ) 159 – 167 161
2