Sensitivity of the m-PCRThe sensiti

Sensitivity of the m-PCR
The sensitivity of the m-PCR method was determined by
using serial dilutions of each bacterial culture. DNA was
extracted from overnight cultures of each pathogen grown
in TSB. The results showed that the reliability of the
m-PCR amplification was satisfactory for pure cultures,
down to 10 cfu/mL for Salmonella (Fig. 2a), L. monocytogenes
(Fig. 2b), E. coli O157:H7 (Fig. 2c), S. aureus
(Fig. 2d) and Y. enterocolitica (Fig. 2e).
The number of colony-forming units (cfu) per mL was
identified by plating onto selective media based on ISO
standard microbiological methods for Salmonella, L.
monocytogenes, E. coli O157:H7, S. aureus and Y. enterocolitica
[25–30] (data not shown).
Efficiency of the m-PCR
The efficiency of the m-PCR was evaluated for the
simultaneous detection of the target pathogenic microorganisms.
The m-PCR was developed by using a mixture of
DNA extracts from the five selected pathogens and compared
using the same test performed on the individual
pathogens (Fig. 3). The results showed that the efficiency
was not influenced when detecting mixtures of multiple
target pathogens in comparison with the individual
pathogens.
Optimization of the m-PCR
Optimization of the number of PCR cycles is shown in the
image (not shown). Four of the five genomic DNA samples
were proved to provide better templates. The results also
showed a gradual increase in the yield of each band with
increasing number of cycles. The greatest increase in the
amount of products was found at about 32 cycles, while 35
cycles were optimal for the amplification of the target gene
sequences.
The findings for the optimization of annealing temperature
are shown in the image (not shown). It can be seen
that lowering the annealing temperature by 5 C was required for the same loci to be co-amplified in multiplex
mixtures for the m-PCR in the test. Based on yield of PCR
products for the five target genes, the results showed an
optimal multiplex annealing temperature of 54 C.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ความไวของ m PCR
กำหนดความไวของวิธี m PCR โดย
ใช้ dilutions ประจำของแต่ละวัฒนธรรมเชื้อแบคทีเรีย ดีเอ็นเอถูก
สกัดจากค้างคืนวัฒนธรรมของแต่ละการศึกษาโต
ใน TSB ผลพบว่าความน่าเชื่อถือของการ
m-PCR ขยายถูกพอสำหรับวัฒนธรรมบริสุทธิ์,
ลง 10 cfu/mL สำหรับซัล (Fig. 2a), L. monocytogenes
(Fig. 2b), E. coli O157:H7 (ฟิก 2 ซี), S.
(Fig. 2d) หมอเทศข้างลายและ Y. enterocolitica (Fig. 2e)
จำนวนโคโลนีขึ้นหน่วย (cfu) ต่อมิลลิลิตร
ระบุ โดยชุบลงบนสื่อใช้ตาม ISO
มาตรฐานทางจุลชีววิทยาวิธีซัล L.
monocytogenes, O157:H7 E. coli, S. หมอเทศข้างลาย และ Y. enterocolitica
[25 – 30] (ข้อมูลไม่แสดง)
ประสิทธิภาพของ m-PCR
ถูกประเมินประสิทธิภาพของ m-PCR
ตรวจสอบเวลาของเป้าหมายอุบัติจุลินทรีย์
m-PCR ได้รับการพัฒนาโดยการผสมผสานระหว่าง
สารสกัดดีเอ็นเอจากห้าเลือกโรค และเปรียบเทียบ
ใช้ทดสอบเดียวกันดำเนินการในแต่ละ
โรค (Fig. 3) ผลพบว่าประสิทธิภาพ
ได้รับเมื่อตรวจผสมหลาย
เป้าหมายโรคเมื่อเปรียบเทียบกับบุคคล
โรค
เพิ่มประสิทธิภาพของ m PCR
แสดงประสิทธิภาพสูงสุดของจำนวนรอบของ PCR ในการ
รูป (ไม่แสดง) 4 ตัวอย่าง 5 genomic DNA
ได้พิสูจน์ให้แม่ดีกว่า ผลลัพธ์ยัง
พบเพิ่มขึ้นผลตอบแทนของแต่ละวงมี
เพิ่มจำนวนรอบ การเพิ่มขึ้นมากที่สุด
พบจำนวนผลิตภัณฑ์ที่รอบประมาณ 32 ในขณะที่ 35
รอบเหมาะสมสำหรับการขยายยีนเป้าหมาย
ลำดับ.
พบสำหรับการเพิ่มประสิทธิภาพของการอบเหนียวอุณหภูมิ
แสดงในรูป (ไม่แสดง) สามารถเห็น
ว่า ลดอุณหภูมิหลอม โดย 5 C ไม่ต้อง loci เดียวกันต้องร่วมเอาต์ล็ก
น้ำยาผสมสำหรับ PCR เมตรในการทดสอบได้ ตามผลผลิตของ PCR
ผลิตภัณฑ์ยีนเป้าหมายห้า แสดงให้เห็นผลลัพธ์การ
ล็กสุดการอบเหนียวอุณหภูมิค. 54

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ความไวของ M-PCR
ความไวของวิธี M-PCR ถูกกำหนดโดย
ใช้เจือจางอนุกรมของแต่ละวัฒนธรรมแบคทีเรีย ดีเอ็นเอ
ที่สกัดจากวัฒนธรรมในชั่วข้ามคืนของเชื้อโรคแต่ละชนิดที่ปลูก
ใน TSB ผลการศึกษาพบว่าความน่าเชื่อถือของ
การขยาย M-PCR เป็นที่น่าพอใจสำหรับวัฒนธรรมบริสุทธิ์
ลงไป 10 cfu / ml สำหรับ Salmonella (รูปที่ 2a)., L. monocytogenes
, E. coli O157 (รูปที่ 2b.) H7 (รูปที่ 2c), S. aureus
(รูปที่ 2d.) และวาย enterocolitica (รูปที่ 2e).
จำนวนหน่วยอาณานิคมขึ้นรูป (cfu) ต่อมิลลิลิตร
ระบุชุบลงบนสื่อที่เลือกขึ้นอยู่กับมาตรฐาน ISO
วิธีทางจุลชีววิทยามาตรฐานสำหรับเชื้อ Salmonella, L .
monocytogenes, E. coli O157: H7, S. aureus และวาย enterocolitica
[25-30] (ไม่ได้แสดงข้อมูล)
ประสิทธิภาพของ M-PCR
ประสิทธิภาพของ M-PCR ที่ได้รับการประเมินผล
การตรวจสอบพร้อมกันของเป้าหมาย จุลินทรีย์ที่ทำให้เกิดโรค
M-PCR ได้รับการพัฒนาโดยใช้ส่วนผสมของ
สารสกัดดีเอ็นเอจากเชื้อโรคที่เลือกห้าและเมื่อเทียบกับ
การใช้การทดสอบเดียวกันดำเนินการในแต่ละ
เชื้อโรค (รูปที่ 3). ผลการศึกษาพบว่าประสิทธิภาพ
ไม่ได้รับอิทธิพลเมื่อการตรวจสอบส่วนผสมของหลาย
เชื้อโรคเป้าหมายในการเปรียบเทียบกับบุคคล
เชื้อโรค
เพิ่มประสิทธิภาพของ M-PCR
การเพิ่มประสิทธิภาพของจำนวนรอบ PCR ที่ปรากฏอยู่ใน
ภาพ (ไม่แสดง) สี่ห้าตัวอย่างดีเอ็นเอจีโนม
ได้รับการพิสูจน์แล้วว่าให้แม่แบบที่ดีขึ้น ผลที่ได้ยัง
แสดงให้เห็นว่าค่อยๆเพิ่มขึ้นในอัตราของแต่ละวงที่มี
จำนวนเพิ่มมากขึ้นของรอบ เพิ่มขึ้นมากที่สุดใน
จำนวนของผลิตภัณฑ์ที่ถูกพบในประมาณ 32 รอบในขณะที่ 35
รอบเป็นที่เหมาะสมสำหรับการขยายของยีนเป้าหมาย
ลำดับ
ผลการวิจัยสำหรับการเพิ่มประสิทธิภาพของอุณหภูมิการหลอม
จะถูกแสดงในภาพ (ไม่แสดง) จะเห็นได้
ว่าการลดอุณหภูมิการหลอมด้วย 5 องศาเซลเซียสจำเป็นสำหรับสถานะเดียวกันที่จะร่วมขยายในหลาย
ผสมสำหรับ M-PCR ในการทดสอบ ขึ้นอยู่กับผลตอบแทนของ PCR
ผลิตภัณฑ์สำหรับห้ายีนเป้าหมายผลการศึกษาพบ
อุณหภูมิที่เหมาะสมหลายหลอมจาก 54 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ความไวของ m-pcr
ความไวของวิธีวิเคราะห์ m-pcr
ใช้วิธีการแต่ละอนุกรมแบคทีเรียวัฒนธรรม ดีเอ็นเอที่สกัดจากวัฒนธรรมค้างคืนกัน

ใน TSB เชื้อโรคโต . ผลการศึกษาพบว่า ค่า
m-pcr Amplification เป็นที่พอใจของวัฒนธรรมที่บริสุทธิ์
ลง 10 CFU / ml Salmonella ( รูปที่ 2A ) , L . monocytogenes
( รูปที่ 2B ) , E . coli เป็นสมาชิก ) ( ภาพ :2C ) , S . aureus
( รูปที่ 2 ) และ Y enterocolitica ( รูปที่ 2 ) .
จำนวนสร้างอาณานิคม ( CFU ) หน่วยต่อมิลลิลิตร มีระบุชุบลงบนสื่อ

เลือกตาม ISO มาตรฐานจุลชีววิทยาวิธีการ monocytogenes เชื้อ L .
, E . coli เป็นสมาชิก ) และ S . aureus enterocolitica
Y [ 25 – 30 ] ( ข้อมูลไม่แสดง ) m-pcr

ประสิทธิภาพของประสิทธิภาพของ m-pcr ถูกประเมินสำหรับ
การตรวจหาเชื้อจุลินทรีย์เป้าหมายพร้อมกัน
m-pcr พัฒนาโดยใช้ดีเอ็นเอที่สกัดจากส่วนผสมของ
5 เลือกเชื้อโรคและเปรียบเทียบ
ใช้แบบทดสอบการเชื้อโรคแต่ละ
( รูปที่ 3 ) ผลการศึกษาพบว่า ประสิทธิภาพ
ไม่ได้รับอิทธิพลเมื่อการผสมหลาย
เป้าหมายเชื้อโรคในการเปรียบเทียบกับเชื้อโรคแต่ละคน

การเพิ่มประสิทธิภาพของการเพิ่มประสิทธิภาพของ m-pcr
จำนวนรอบของ PCR จะแสดงใน
ภาพ ( ไม่แสดง ) สี่ในห้าของจีโนมดีเอ็นเอตัวอย่าง
ถูกพิสูจน์ให้แม่แบบที่ดี ผลยัง
พบค่อยๆเพิ่มขึ้นในอัตราผลตอบแทนของแต่ละวงด้วย
เพิ่มจํานวนรอบ การเพิ่มปริมาณของผลิตภัณฑ์ที่ยิ่งใหญ่ที่สุดใน
พบประมาณ 32 รอบ ในขณะที่ 35
ที่เหมาะสมสำหรับการเพิ่มปริมาณของรอบ คือเป้าหมายลำดับยีน
.
ข้อมูลสำหรับการเพิ่มประสิทธิภาพของอุณหภูมิการอบอ่อน
แสดงในรูป ( ไม่แสดง ) จะเห็นได้ว่า การลดอุณหภูมิการอบอ่อน
5 C  จำเป็นสำหรับตำแหน่งเดียวกันเป็น Co ได้มา multiplex
ผสมสำหรับ m-pcr ในการทดสอบ ขึ้นอยู่กับผลผลิตของผลิตภัณฑ์ PCR
สำหรับห้าเป้าหมายยีนพบการมัลติเพล็กซ์
ที่เหมาะสมอุณหภูมิการอบอ่อน 54  C