Continuous CultureIt is possible to

Continuous Culture

It is possible to have culture of bacteria in the exponential growth phase and hold them there. This is done by continuously adding more nutrients and remove wastes. This is done in a chemostat. Appendix 7 shows a chemostat.

Inputs to a chemostat are sterile media and sterile air. Outputs are spent media which contains waste products, some nutrients and some bacteria.

Flow rate of media and nutrient concentration are controlled. This allows control of the specific growth rate over a wide range. If the flow is too fast, the microorganisms cannot keep up. They leave the chemostat more rapidly than they are produced. Eventually they are all gone. This condition is called ‘washout’. If the nutrient flow is too slow, then it behaves much like a batch culture.

Batch culture means that the volume of media is constant and there is no media added or taken away.

Counting Microbial Cells

Microbial cells can be counted directly or cell count plating methods can be used.

In the direct count method a Petroff-Hauser counting chamber is used. This is glass slide that fits on the stage of a microscope. It has a small depression of known volume. There is a grid on the slide. By determining the number of organisms per square in the grid, an estimate of the number of microorganisms can be made.

There are a number of problems with this method.

1) Dead cells cannot be distinguished from live cells.
2) Small cells are difficult to see.
3) Precision is difficult to attain ภาษาไทย

 
4) A Phase contrast microscope is necessary,
5) Cells with low densities may be difficult.
6) Motile cells may be difficult to count,
7) Debris can be mistaken for microorganisms

The good things are that results can be obtained very quickly.

There is a substance known as Agar. It is obtained from seaweed. It is added to liquid media to make it solid. Usually a concentration of Agar is added to media at a level of 1.5%. Examples of agar media are shown in Appendix 9.

There are two ways to use agar media. These are the pour plate technique and the spread plate technique.

For pour plates, culture broth is aseptically added to a sterile container called a Petrie dish (Appendix 10). These may be made of either glass or plastic. Then a small amount (1 ml) of agar media at about 45 oC is added to the Petrie dish and the dish gently agitated to mix media and culture. Allow the Agar to harden. Incubate the plates upside down at the desired temperature for the time required.

For the spread plate technique, agar aseptically is poured into sterile Petrie dishes and allowed to harden. A very small amount of culture (0.1 – 0.2 ml) is added to the surface of the hardened agar. It is then spread across the agar surface with a sterile glass rod. (We call these rods, ‘hockey sticks’ in the US.) These plates are also incubated upside down.

Appendix 11 shows a schematic of these two techniques.

ภาษาไทย


 

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัฒนธรรมอย่างต่อเนื่องสามารถจะมีวัฒนธรรมของแบคทีเรียในระยะเรขา และค้างมีได้ นี้ทำ โดยการเพิ่มสารอาหารเพิ่มเติมอย่างต่อเนื่อง และเอากากออก นี้จะต้องกระทำใน chemostat เป็น ภาคผนวกที่ 7 แสดงการ chemostatอินพุตการ chemostat จะสื่อผ่านการฆ่าเชื้อและฆ่าเชื้ออากาศ แสดงผลเป็นสื่อใช้จ่ายซึ่งประกอบด้วยเสีย สารอาหารบางอย่าง และแบคทีเรียบางมีควบคุมอัตราการไหลของสื่อและความเข้มข้นของธาตุอาหาร นี้ช่วยให้ควบคุมอัตราการเจริญเติบโตเฉพาะหลากหลาย ถ้าไหลเร็วเกินไป จุลินทรีย์ไม่สามารถให้ค่า พวกเขาปล่อย chemostat รวดเร็วกว่าจะมีผลิต ในที่สุดพวกเขาจะหายไปทั้งหมด เงื่อนไขนี้จะเรียกว่า 'ไปกวาดออก' ถ้ากระแสธาตุอาหารช้าเกินไป แล้วมันทำงานมากเช่นวัฒนธรรมชุด ชุดวัฒนธรรมหมายความ ว่า ปริมาณของสื่อเป็นค่าคง และมีสื่อไม่เพิ่ม หรือนำออกไปตรวจนับเซลล์จุลินทรีย์สามารถนับเซลล์จุลินทรีย์โดยตรง หรือสามารถใช้นับจำนวนเซลล์ที่ชุบวิธีในวิธีการนับโดยตรง เป็นใช้หอนับ Petroff ซังท์ นี่คือภาพนิ่งแก้วที่พอดีกับระยะของกล้องจุลทรรศน์ มีภาวะซึมเศร้าเล็ก ๆ ของไดรฟ์ข้อมูลรู้จัก ยังมีเส้นตารางบนภาพนิ่ง โดยกำหนดหมายเลขของสิ่งมีชีวิตสำหรับแต่ละตารางในตาราง การประเมินจำนวนของจุลินทรีย์สามารถทำ มีปัญหาด้วยวิธีนี้1) เซลล์ตายไม่แตกต่างจากเซลล์สด2) เซลล์ขนาดเล็กยากดู3) ความแม่นยำเป็นเรื่องยากที่จะบรรลุภาษาไทย 4 ระยะคมชัดกล้องจุลทรรศน์มีความจำเป็น5) เซลล์ที่ มีความหนาแน่นต่ำอาจเป็นเรื่องยาก6 เซลล์ motile อาจยากที่จะนับ7) เศษสามารถหลงสำหรับจุลินทรีย์สิ่งดีจะให้ผลได้อย่างรวดเร็วมีสารที่เรียกว่า Agar จะได้รับจากสาหร่าย นั้นจะถูกเพิ่มไปยังสื่อของเหลวจะทำให้แข็ง โดยปกติแล้วความเข้มข้นของ Agar เพิ่มสื่อในระดับ 1.5% ตัวอย่างของสื่อ agar จะแสดงในภาคผนวก 9มีสองวิธีในการใช้สื่อ agar เหล่านี้เป็นแผ่นเทเทคนิคและเทคนิคจานแพร่กระจาย สำหรับแผ่นเท วัฒนธรรมซุป aseptically เพิ่มคอนเทนเนอร์ใส่เรียกว่าจาน Petrie (ภาคผนวก 10) เหล่านี้อาจทำจากแก้วหรือพลาสติก จำนวนเล็กน้อย (1 ml) สื่อ agar ที่ประมาณ 45 องศาเซลเซียสเพิ่มจาน Petrie และจานเบา ๆ agitated ผสมสื่อและวัฒนธรรมด้วย อนุญาต Agar เพื่อเริ่ม ฟักการแผ่นคว่ำอุณหภูมิระบุเวลาที่ใช้สำหรับเทคนิคการกระจายแผ่น agar aseptically poured เป็นอาหาร Petrie กอซ และสามารถเริ่ม ปริมาณที่น้อยมากของวัฒนธรรม (0.1 – 0.2 ml) พื้นผิวของ agar เสริมเพิ่ม แล้วมันจะแพร่กระจายไปทั่วพื้นผิว agar กับร็อดแก้วกอซ (เราเรียกก้านเหล่านี้ 'ไม้ฮอกกี้' ในสหรัฐอเมริกา) แผ่นเหล่านี้จะยัง incubated คว่ำลงภาคผนวกที่ 11 แสดงแผนผังวงจรของเทคนิคเหล่านี้สอง ภาษาไทย 

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัฒนธรรมอย่างต่อเนื่องมันเป็นไปได้ที่จะมีวัฒนธรรมของเชื้อแบคทีเรียที่อยู่ในขั้นตอนการเจริญเติบโตและถือพวกเขามี ซึ่งจะดำเนินการอย่างต่อเนื่องโดยการเพิ่มสารอาหารมากขึ้นและลบของเสีย นี้จะกระทำใน chemostat ภาคผนวกที่ 7 แสดง chemostat. ปัจจัยการผลิตเพื่อ chemostat เป็นสื่อผ่านการฆ่าเชื้อและอากาศผ่านการฆ่าเชื้อ เอาท์พุทมีการใช้จ่ายสื่อบันทึกซึ่งมีของเสียสารอาหารบางอย่างและแบคทีเรียบางชนิด. อัตราของสื่อและความเข้มข้นของสารอาหารที่มีการควบคุมการไหล นี้จะช่วยให้การควบคุมของอัตราการเจริญเติบโตโดยเฉพาะในช่วงที่กว้าง ถ้าไหลเป็นเร็วเกินไปจุลินทรีย์ที่ไม่สามารถเก็บขึ้น พวกเขาออกจาก chemostat มากขึ้นอย่างรวดเร็วกว่าที่พวกเขามีการผลิต ในที่สุดพวกเขาจะหายไปทั้งหมด สภาพนี้เรียกว่า 'ชะล้าง' ถ้าการไหลของสารอาหารจะช้าเกินไปแล้วมันจะทำงานมากเช่นวัฒนธรรมชุด. หมายถึงวัฒนธรรมรุ่นที่ว่าปริมาณของสื่อที่จะคงที่และมีสื่อที่ไม่มีการเพิ่มหรือเอาออกไป. นับเซลล์จุลินทรีย์เซลล์จุลินทรีย์สามารถนับโดยตรงหรือเซลล์ชุบนับ วิธีการที่สามารถใช้. ในวิธีการนับโดยตรง Petroff-Hauser นับห้องถูกนำมาใช้ นี่คือสไลด์แก้วที่เหมาะกับขั้นตอนของกล้องจุลทรรศน์ มันมีภาวะซึมเศร้าเล็ก ๆ ของปริมาณที่รู้จัก มีตารางบนภาพนิ่งเป็น โดยการกำหนดจำนวนของสิ่งมีชีวิตต่อตารางในตารางประมาณการของจำนวนจุลินทรีย์ที่สามารถทำ. มีจำนวนของปัญหาด้วยวิธีนี้. 1) เซลล์ที่ตายแล้วไม่สามารถจะแตกต่างจากเซลล์สด. 2) เซลล์ขนาดเล็กเป็นเรื่องยาก เพื่อดู. 3) ความแม่นยำเป็นเรื่องยากที่จะบรรลุภาษาไทย4) กล้องจุลทรรศน์เฟสตรงกันข้ามเป็นสิ่งที่จำเป็น5) เซลล์ที่มีความหนาแน่นต่ำอาจเป็นเรื่องยาก. 6) เซลล์ Motile อาจจะเป็นเรื่องยากที่จะนับ7) เศษสามารถจะเข้าใจผิดจุลินทรีย์สิ่งที่ดีที่ผลการสามารถรับได้อย่างรวดเร็ว. มีสารที่รู้จักกันเป็นวุ้นเป็น มันจะได้รับจากสาหร่ายทะเล มันจะถูกเพิ่มไปยังสื่อที่มีสภาพคล่องที่จะทำให้มันเป็นของแข็ง โดยปกติความเข้มข้นของวุ้นจะถูกเพิ่มไปยังสื่อที่ระดับ 1.5% ตัวอย่างของอาหารวุ้นจะปรากฏในภาคผนวก 9. มีสองวิธีที่จะใช้วุ้นสื่อ เหล่านี้เป็นเทคนิคการเทแผ่นและการแพร่กระจายเทคนิคแผ่น. สำหรับแผ่นเทน้ำซุปวัฒนธรรมจะมีการเพิ่มการปลอดเชื้อภาชนะปราศจากเชื้อที่เรียกว่าจานเพท (ภาคผนวก 10) เหล่านี้อาจจะทำจากแก้วหรือพลาสติก จากนั้นในปริมาณเล็กน้อย (1 ml) ของสื่อวุ้นที่ประมาณ 45 องศาเซลเซียสจะถูกเพิ่มในจานและจานเพทสบายใจเบา ๆ เพื่อผสมสื่อและวัฒนธรรม อนุญาตให้วุ้นแข็ง ฟักแผ่นคว่ำลงที่อุณหภูมิที่ต้องการสำหรับเวลาที่จำเป็น. สำหรับการแพร่กระจายเทคนิคจานปลอดเชื้อวุ้นเทลงในจานเพทผ่านการฆ่าเชื้อและได้รับอนุญาตให้แข็ง ปริมาณที่น้อยมากของวัฒนธรรม (0.1-0.2 ml) ถูกเพิ่มเข้าไปในพื้นผิวของวุ้นแข็ง มันจะถูกกระจายไปทั่วพื้นผิวแล้ววุ้นกับก้านแก้วผ่านการฆ่าเชื้อ (เราเรียกแท่งเหล่านี้ 'ไม้ฮอกกี้' ในสหรัฐฯ.) แผ่นเหล่านี้ยังบ่มคว่ำ. ภาคผนวก 11 แสดงแผนผังของทั้งสองเทคนิค. ภาษาไทย





















 




















 

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัฒนธรรมอย่างต่อเนื่อง มันเป็นไปได้ที่จะมีวัฒนธรรมของแบคทีเรียในขั้นตอนการเจริญเติบโตและเก็บไว้ที่นั่น นี้จะทำอย่างต่อเนื่องโดยการเพิ่มสารอาหารมากขึ้นและกำจัดของเสีย นี้จะกระทำในการเพาะเลี้ยงแบบต่อเนื่อง . ภาคผนวก 7 แสดงการเพาะเลี้ยงแบบต่อเนื่อง

กระผมกับการเพาะเลี้ยงแบบต่อเนื่อง เป็นสื่อที่เป็นหมันและอากาศปลอดเชื้อ โดยจะใช้สื่อที่มีของเสีย มีสารอาหารและแบคทีเรียบางชนิด .

อัตราการไหลของสื่อ และความเข้มข้นของธาตุอาหารจะถูกควบคุม นี้จะช่วยให้ควบคุมอัตราการเจริญเติบโตจำเพาะในช่วงกว้าง ถ้าไหลเร็วไป จุลินทรีย์ไม่สามารถให้ขึ้น พวกเขาออกจากการเพาะเลี้ยงแบบต่อเนื่องมากขึ้นอย่างรวดเร็วกว่าที่พวกเขาผลิต ในที่สุดพวกเขาจะหายไปทั้งหมด สภาพนี้เรียกว่า ' คนที่ล้มเหลว ' ถ้าการไหลของสารอาหารจะช้าเกินไป ก็ทำตัวเหมือนชุดวัฒนธรรม

วัฒนธรรมชุดหมายความว่าปริมาณของสื่อ คือ คงที่ และไม่มีสื่อเพิ่มหรือเอา



นับจุลินทรีย์เซลล์จุลินทรีย์เซลล์สามารถนับโดยตรงหรือนับเซลล์ชุบวิธีสามารถใช้

ในการนับโดยตรง วิธีการเกี่ยวกับเฮาเซอร์นับห้องใช้ นี่คือสไลด์แก้วที่พอดีกับระยะของกล้องจุลทรรศน์ มันมีภาวะซึมเศร้าเล็กน้อยทราบปริมาณมีตารางบนสไลด์ โดยการกำหนดจำนวนสิ่งมีชีวิตต่อสี่เหลี่ยมในตาราง การประมาณจำนวนจุลินทรีย์ที่สามารถทำ

มีจำนวนของปัญหาด้วยวิธีนี้

1 ) เซลล์ที่ตายแล้วจะแตกต่างจากเซลล์อยู่ .
2 ) เซลล์ขนาดเล็กยากที่จะเห็น .
3 ) ความแม่นยำเป็นเรื่องยากที่จะบรรลุภาษาไทย

 
4 ) ระยะชัด
กล้องจุลทรรศน์ที่จําเป็น5 ) เซลล์มีความหนาแน่นต่ำอาจจะยาก .
6 ) เคลื่อนที่ เซลล์อาจจะยากที่จะนับ ,
7 ) เศษอาจเข้าใจผิดว่าเป็นจุลินทรีย์

สิ่งดีๆที่ผลลัพธ์ได้รวดเร็วมาก

มีสารที่เรียกว่าวุ้น มันได้มาจากสาหร่ายทะเล มันเป็นอาหารเหลวที่จะให้มันทึบ มักจะมีความเข้มข้นของวุ้นจะถูกเพิ่มไปยังสื่อที่ระดับ 1.5%ตัวอย่างของอาหารวุ้นจะแสดงในภาคผนวกที่ 9

มีสองวิธีที่จะใช้อาหารวุ้น . เหล่านี้เป็นเทคนิคให้จานและการแพร่กระจายแผ่นเทคนิค

สำหรับเทลงจาน น้ำซุปวัฒนธรรมเพิ่ม aseptically เพื่อฆ่าเชื้อภาชนะที่เรียกว่า เพทรีจาน ( ภาคผนวกที่ 10 ) เหล่านี้อาจจะทำให้ทั้ง แก้ว หรือพลาสติกจากนั้นเล็กน้อย ( 1 มิลลิลิตรของอาหารวุ้นที่ประมาณ 45 องศาเซลเซียส เพิ่มจาน เพทรีและจานเบา ๆตื่นเต้นผสมสื่อและวัฒนธรรม ให้วุ้นแข็ง . บ่มเพาะจานคว่ำที่อุณหภูมิที่ต้องการในเวลาที่ต้องการ

สำหรับการแพร่กระจายแผ่นเทคนิคต่างๆ aseptically เทลงในจานเป็นหมัน เพทรี และได้รับอนุญาตให้แข็ง ปริมาณที่น้อยมากของวัฒนธรรม ( 0.1 – 02 มล. ) จะถูกเพิ่มไปยังพื้นผิวของชุบวุ้น มันก็กระจายทั่วผิวหน้าวุ้นด้วยแท่งแก้วที่เป็นหมัน ( เราเรียกสิ่งเหล่านี้ว่า ' ' แท่งไม้ฮอกกี้ในสหรัฐอเมริกา ) แผ่นเหล่านี้ยังบ่มกลับหัว

ภาคผนวก 11 แสดงแผนผังของทั้งสองเทคนิค ภาษาไทย