Materials and methods Preparation o

Materials and methods
Preparation of silk fibroin/sericin (FIS) solutions. In part 1, silk fibroin (F) solutions were prepared form 2 types of Thai silk cocoons, Bombyk mori Nangnoi Srisaket 1 and Bombyx mori Jul 1/1. Briefly, cocoons of Nangno Srisaket 1 (yellow shell) and Jul 1/1 (white-shell) were degummed in 0.02 M Na2CO3. Dried silk fibroin was dissolved in 93 M LiBr solution at 60°C for 4 h silk fibroin solution was then dialyzed against deionized water for 2 days to remove LiBr and centrifuged at 10,000 rpm, 4°C for 20 min to remove impurities. The final concentration of silk fibroin solution was around 6.5% (w/v) [6]. Commercial sericin powder (heat extraction, Suranaree fibroin solution was around University of Technology) was dissolved in deionized water at 60°C for 30 min and blended with silk fibroin solution at 0,1,2 and 5% sericin.


Extraction of sericin using differrent methods. In part 2, silk sericin was extracted using different methods including heat, acid, alkali and urea treatments as following. Heat treatment. A high temperature and high pressure degumming technique was used to prepare heat-degraded silk sericin solution. Cocoons of Bombyx mori silkworms were cut into square pieces (about 5 mm and silk sericin was extracted in purified water g of dry silk cocoon: 30 ml of water) using autoclaving (SS-320, Tomy Seiko Co., Ltd., Tokyo, Japan) at 120°C r 60 min. The silk sericin solution was filtered to remove fibroin Acid treatment. Citric acid solution was used to prepare acid-degraded silk sericin solution. Cocoons of Bombyx mori silkworms were cut into small pieces, added with 1.25% citric acid solution and boiled for 30 min. After filtration to remove insoluble fibers, the clear filtrate was immediately dialyzed in distilled water for 3 days using cellulose membrane (Cellusep T2, MWCO 6,000-8,000, Sequin, Texas, USA) Alkali treatment. Sodium carbonate solution was used to prepare alkali-degraded silk sericin solution. Cocoons of Bombym mori silkworms were cut into small pieces and added with 0.5% sodium carbonate solution. Other details were same as described in acid treatment. Urea treatment. Freshly cut cocoon shells were soaked into 8 M urea aqueous solution for 30 min and then refluxed at 85 C for 30 min. Centrifugation and filtration were used to remove insoluble residues. The solution was thoroughly dialyzed in distilled water using cellulose membrane (Cellusep T2, MWCO 6,000-8,000, Sequin, Texas, USA) for 3 days Preparation of silk fibroin/sericin and pure sericin films Silk fibroin/sericin solutions at various sericin concentrations were cast on glass slips (176 mm and air-dried overnignt to prepare the films. Pure silk sericin solution (0.1 mg/100 Hl) obtained from different extraction methods were cast on glass slips (176 mm and air-dried overnight also. Thin films of silk sericins coated on glass slips were then crosslinked by exposing to the UV crosslinker (Bio-Rad, GS Gene Linker UV Chamber, USA) at 50 mJ for 30 min. All films were sterilized by ethylene oxide prior to cell seeding Viability test of L929 fibroblast cells. For in vitro biocompatibility test, L929 mouse fibroblasts were seeded onto the films (5x10 cells/film) placed in 24-well plate and cultured in DMEM supplemented with 10%FBS and 1 Penicillin/Streptomycin at 370C, 5% CO2. Non-coated glass slips (G) were used as positive control. After 6, 24 and 48 h of culture, number of cells attached and proliferated on the films were using 3 bromide assay l7) The absorbance of the solution was determined using a microplate reader (Biohit 830, Biohit and Helsinki, Finland) at wavelength of 570 nm. Percentage of initial cell attachment at 6 h was calculated from following equation:

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Materials and methods Preparation of silk fibroin/sericin (FIS) solutions. In part 1, silk fibroin (F) solutions were prepared form 2 types of Thai silk cocoons, Bombyk mori Nangnoi Srisaket 1 and Bombyx mori Jul 1/1. Briefly, cocoons of Nangno Srisaket 1 (yellow shell) and Jul 1/1 (white-shell) were degummed in 0.02 M Na2CO3. Dried silk fibroin was dissolved in 93 M LiBr solution at 60°C for 4 h silk fibroin solution was then dialyzed against deionized water for 2 days to remove LiBr and centrifuged at 10,000 rpm, 4°C for 20 min to remove impurities. The final concentration of silk fibroin solution was around 6.5% (w/v) [6]. Commercial sericin powder (heat extraction, Suranaree fibroin solution was around University of Technology) was dissolved in deionized water at 60°C for 30 min and blended with silk fibroin solution at 0,1,2 and 5% sericin. แยกของใช้วิธี differrent ทองบริสุทธิ์ ในส่วนที่ 2 ไหมทองบริสุทธิ์ถูกสกัดโดยใช้วิธีการต่าง ๆ รวมทั้งบำบัดความร้อน กรด ด่าง และยูเรียดังต่อไปนี้ การรักษาความร้อน อุณหภูมิสูงและความดันสูงเทคนิคการเอายางออกใช้เพื่อเตรียมแก้ปัญหาความร้อนเสื่อมโทรมไหมทองบริสุทธิ์ รังของ Bombyx mori silkworms ถูกตัดเป็นชิ้นสี่เหลี่ยม (ประมาณ 5 มม.และไหมทองบริสุทธิ์ถูกสกัดในน้ำ g ของรังไหมแห้ง: 30 ml น้ำ) ใช้ autoclaving (SS-320, Tomy Seiko Co., Ltd. โตเกียว ญี่ปุ่น) ที่ 120° C r 60 นาที การแก้ปัญหาไหมทองบริสุทธิ์ถูกกรองเอารักษากรด fibroin กรดซิตริกโซลูชันที่ใช้เตรียมกรดเสื่อมโทรมไหมทองบริสุทธิ์โซลูชัน รังของ Bombyx mori silkworms ถูกตัดเป็นชิ้นเล็ก ๆ เพิ่ม ด้วยโซลูชัน 1.25% กรดซิตริก และต้มสำหรับ 30 นาที หลังจากกรองเอาเส้นใยที่ไม่ละลายน้ำ สารกรองล้างได้ทันที dialyzed ในน้ำกลั่นสำหรับ 3 วันใช้รักษาด่างเมมเบรน (Cellusep T2, MWCO 6000 8000 เลื่อมสี เท็กซัส สหรัฐอเมริกา) เซลลูโลส โซเดียมคาร์บอเนตโซลูชั่นที่ใช้ในการเตรียมแก้ปัญหาเสื่อมโทรมด่างไหมทองบริสุทธิ์ รัง silkworms Bombym โมริถูกตัดเป็นชิ้นเล็ก ๆ และเพิ่ม ด้วย 0.5% โซเดียมคาร์บอเนตโซลูชั่น รายละเอียดอื่น ๆ เหมือนในรักษากรดได้ รักษายูเรีย เปลือกรังสดตัดเป็น 8 เมตร urea ละลายใน 30 นาทีที่เปี่ยมล้นไปด้วยแล้ว refluxed ที่ C 85 สำหรับ 30 นาที Centrifugation และใช้กรองเอาตกละลาย แก้ปัญหาได้อย่างละเอียด dialyzed ในน้ำกลั่นที่ใช้เยื่อเซลลูโลส (Cellusep T2, MWCO 6000 8000 เลื่อมสี เท็กซัส สหรัฐอเมริกา) 3 วันเตรียมของ fibroin ไหมทองบริสุทธิ์และเซฟิล์มไหม fibroin/ทองบริสุทธิ์ แก้ปัญหาที่ความเข้มข้นต่าง ๆ ของทองบริสุทธิ์มีโยนบนใบแก้ว (176 mm และ overnignt air-dried การเตรียมฟิล์ม โซลูชั่นเซไหม (0.1 มิลลิกรัม / 100 Hl) ได้จากการสกัดต่างกันที่วิธีถูกโยนในแก้วใบ (176 mm และ air-dried แอร์พอร์ตโอเวอร์ไนท์ยัง ฟิล์มบางของ sericins ไหมที่เคลือบบนใบแก้วได้แล้ว crosslinked โดยเปิดเผยเพื่อ crosslinker UV (Bio Rad, GS ยีนตัวเชื่อมโยงข้อมูล UV หอการค้า สหรัฐอเมริกา) ที่ mJ 50 สำหรับ 30 นาที ภาพยนตร์ทั้งหมดถูก sterilized โดยเอทิลีนออกไซด์ก่อนปลูกทดสอบชีวิตของเซลล์ fibroblast L929 เซลล์ สำหรับการทดสอบใน biocompatibility, L929 เมาส์ fibroblasts ถูก seeded ลงบนฟิล์ม (5 x 10 เซลล์/ฟิล์ม) วางในดี 24 แผ่น และอ่างใน DMEM เสริม ด้วย 10% FBS และยาเพนนิซิลลิน 1 Streptomycin ที่ 370C, 5% CO2 จัดส่งไม่ใช่เคลือบแก้ว (G) ถูกใช้เป็นตัวควบคุมบวก หลังจาก 6, 24 และ 48 h ของวัฒนธรรม จำนวนเซลล์แนบ และ proliferated ในภาพยนตร์ใช้หมายเลข l7 วิเคราะห์โบรไมด์ 3) กำหนด absorbance ของโซลูชันใช้อ่าน microplate (Biohit 830, Biohit และเฮลซิงกิ ฟินแลนด์) ที่ความยาวคลื่นของ 570 nm มีคำนวณเปอร์เซ็นต์ของเซลล์เริ่มต้นที่แนบมาที่ 6 h จากสมการต่อไปนี้:

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการเตรียมความพร้อมของไฟโบรอินไหม / เซริซิน (FIS) โซลูชั่น
ในส่วนที่ 1, ไฟโบรอินไหม (F) การแก้ปัญหาได้จัดทำรูปแบบที่ 2 ประเภทของรังไหมผ้าไหมไทย Bombyk อริแน่งน้อยศรีสะเกษที่ 1 และ Bombyx สุดตากรกฎาคม 1/1 สั้น ๆ , รังไหมของ Nangno ศรีสะเกษ 1 (เปลือกสีเหลือง) และกรกฎาคม 1/1 (สีขาวเปลือก) มี degummed ใน Na2CO3 0.02 M ผ้าไหมไฟโบรอินแห้งถูกละลายใน 93 แก้ปัญหา M Libr ที่ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4 ชั่วโมงไหมไฟโบรอินโซลูชั่นที่ได้รับการ dialyzed แล้วกับน้ำปราศจากไอออนเป็นเวลา 2 วันในการลบ Libr และหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาที 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาทีเพื่อขจัดสิ่งสกปรก ความเข้มข้นสุดท้ายของการแก้ปัญหาไฟโบรอินไหมอยู่ที่ประมาณ 6.5% (w / v) [6] ผงเซริซินพาณิชย์ (สกัดความร้อนสุรนารีแก้ปัญหาไฟโบรอินเป็นรอบมหาวิทยาลัยเทคโนโลยี) ถูกละลายในน้ำปราศจากไอออนที่ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีและผสมด้วยผ้าไหมไฟโบรอินวิธีการแก้ปัญหาที่ 0,1,2 และ 5% เซริซิน. สกัดเซริซินที่ใช้แตกต่าง วิธีการ ในส่วนที่ 2, เซริซินผ้าไหมถูกสกัดโดยใช้วิธีการที่แตกต่างกันรวมทั้งความร้อนกรดด่างและการรักษายูเรียดังต่อไปนี้ การรักษาความร้อน อุณหภูมิสูงและเทคนิคการลอกกาวแรงดันสูงถูกใช้ในการเตรียมความพร้อมผ้าไหมความร้อนสลายการแก้ปัญหาเซริซิน รังไหมของหนอนไหม Bombyx สุดตาถูกตัดเป็นชิ้นสี่เหลี่ยม (ประมาณ 5 มมและเซริซินผ้าไหมถูกสกัดในน้ำบริสุทธิ์กรัมของรังไหมแห้ง: 30 ml ของน้ำ) โดยใช้นึ่งฆ่าเชื้อ (SS-320, Tomy Seiko จำกัด โตเกียว ญี่ปุ่น) ที่ 120 องศาเซลเซียส 60 นาทีอาร์ วิธีการแก้ปัญหาไหมเซริซินถูกกรองเพื่อเอาไฟโบรอินรักษากรด สารละลายกรดซิตริกถูกใช้ในการเตรียมความพร้อมผ้าไหมกรดเสื่อมโทรมเซริซินวิธีการแก้ปัญหา รังไหมของหนอนไหม Bombyx สุดตาถูกตัดเป็นชิ้นเล็ก ๆ เพิ่มเข้ามาด้วย 1.25% สารละลายกรดซิตริกและต้มเป็นเวลา 30 นาที หลังจากการกรองเพื่อเอาเส้นใยที่ไม่ละลายน้ำที่กรองได้ชัดเจน dialyzed ทันทีในน้ำกลั่นเป็นเวลา 3 วันโดยใช้เยื่อเซลลูโลส (Cellusep T2, MWCO 6,000-8,000, เลื่อม, เท็กซัสสหรัฐอเมริกา) การรักษาอัลคาไล วิธีการแก้ปัญหาโซเดียมคาร์บอเนตถูกใช้ในการเตรียมความพร้อมผ้าไหมด่างแก้ปัญหาเสื่อมโทรมเซริซิน รังไหมของ Bombym สุดตาดักแด้ถูกตัดเป็นชิ้นเล็ก ๆ และเพิ่ม 0.5% วิธีการแก้ปัญหาโซเดียมคาร์บอเนต รายละเอียดอื่น ๆ ได้เหมือนกันตามที่อธิบายไว้ในการรักษากรด รักษายูเรีย ตัดสดใหม่เปลือกรังแช่เป็น 8 M สารละลายยูเรียเป็นเวลา 30 นาทีแล้ว refluxed ที่ 85 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที ปั่นและกรองถูกนำมาใช้ในการลบสารตกค้างที่ไม่ละลายน้ำ วิธีการแก้ปัญหาที่ได้รับการ dialyzed อย่างทั่วถึงในน้ำกลั่นโดยใช้เยื่อเซลลูโลส (Cellusep T2, MWCO 6,000-8,000, เลื่อม, เท็กซัสสหรัฐอเมริกา) เป็นเวลา 3 วันในการจัดทำผ้าไหมไฟโบรอิน / เซริซินและภาพยนตร์เซริซินบริสุทธิ์ไหมไฟโบรอิน / โซลูชั่นเซริซินที่ความเข้มข้นเซริซินต่างๆถูกปลด บนสลิปแก้ว (176 มิลลิเมตรและ overnignt อากาศแห้งเพื่อเตรียมความพร้อมภาพยนตร์. ผ้าไหมบริสุทธิ์แก้ปัญหาเซริซิน (0.1 มก. / 100 Hl) ที่ได้จากวิธีการสกัดที่แตกต่างกันถูกโยนบนสลิปแก้ว (176 มิลลิเมตรและมีอากาศแห้งในชั่วข้ามคืนยัง. ฟิล์มบางของ sericins ผ้าไหมเคลือบบนบิลแก้วถูกเชื่อมขวางแล้วโดยการเปิดเผยไปเชื่อมขวางยูวี (Bio-Rad, GS ยีน Linker หอการค้ายูวี, USA) ที่ 50 mJ เวลา 30 นาที. ภาพยนตร์ทุกเรื่องที่ได้รับการฆ่าเชื้อโดยเอทิลีนออกไซด์ก่อนที่จะมีเซลล์เพาะทดสอบความมีชีวิตของ L929 เซลล์ fibroblast. สำหรับการทดสอบในหลอดทดลองกันได้ทางชีวภาพ, L929 รบราเมาส์เมล็ดลงบนฟิล์ม (5x10 เซลล์ / ภาพยนตร์) วางไว้ในจาน 24 หลุมและเพาะเลี้ยงใน DMEM เสริมด้วย FBS 10% และ 1 Penicillin / นี้ streptomycin ที่ 370C, CO2 5% บิลแก้วไม่เคลือบ (G) ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมในเชิงบวก หลังจากที่ 6, 24 และ 48 ชั่วโมงของวัฒนธรรมจำนวนของเซลล์ที่แนบมาและแพร่กระจายในภาพยนตร์ที่ถูกใช้ l7 ทดสอบโบรไมด์ 3) การดูดกลืนแสงของการแก้ปัญหาที่ได้รับการพิจารณาโดยใช้เครื่องอ่าน microplate (Biohit 830, Biohit และเฮลซิงกิฟินแลนด์) ที่ความยาวคลื่น 570 นาโนเมตร ร้อยละของเซลล์เริ่มต้นสิ่งที่แนบมาใน 6 ชั่วโมงที่คำนวณได้จากสมการดังต่อไปนี้:

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการเตรียมผ้าไหมไฟโบรอิน
/ เซริซิน ( 6 ) โซลูชั่น ในส่วนที่ 1 ผ้าไหมไฟโบรอิน ( F ) โซลูชั่นเตรียมแบบฟอร์มที่ 2 ประเภทของดักแด้ไหมพันธุ์นางน้อยศรีสะเกษ 1 ในไทย bombyk โมริ และ Bombyx mori ก.ค. 1 / 1 สั้น ๆ , ดักแด้ของ nangno ศรีสะเกษ 1 ( เปลือกหอย ) และ ก.ค. 1 / 1 ( เปลือกสีขาว ) ถูกล้างใน 0.02 M Na2CO3 .ไฟโบรอิน ผ้าแห้งละลายในสารละลายที่ libr 93 M 60 ° C 4 H ไหมไฟโบรอินโซลูชั่น จากนั้นผ่านคล้ายเนื้อเยื่อประสานกับน้ำ 2 วัน เอา libr ไฟฟ้าที่ 10 , 000 รอบต่อนาที 4 ° C เป็นเวลา 20 นาที เพื่อขจัดสิ่งสกปรก ความเข้มข้นของสารละลายไฟโบรอินไหม สุดท้ายอยู่ที่ประมาณ 6.5 % ( w / v ) [ 6 ] โฆษณาผงซิริซิน ( การสกัดความร้อนสารละลายไฟโบรอินรอบมหาวิทยาลัยสุรนารีเทคโนโลยี ) ถูกละลายในน้ำคล้ายเนื้อเยื่อประสาน 60 ° C เป็นเวลา 30 นาที และผสมกับสารละลายไฟโบรอินไหมใน 0,1,2 และ 5 % โปรตีน .


การสกัดเซริซินโดยใช้วิธีการที่แตกต่างกัน . ในส่วนที่ 2 โปรตีนไหมสกัดโดยใช้วิธีการที่แตกต่างกัน ได้แก่ ความร้อน กรด ด่าง และ urea รักษาดังนี้ การรักษาความร้อนที่อุณหภูมิสูงและความดันสูงใช้เทคนิคลอกกาวไหมเซริซินเตรียมสลายความร้อนสารละลาย ดักแด้ของหนอนไหม Bombyx mori ที่ถูกตัดเป็นชิ้นสี่เหลี่ยมประมาณ 5 มิลลิเมตร และโปรตีนไหมสกัดด้วยน้ำบริสุทธิ์ต่อรังไหมแห้ง 30 มล. ของน้ำ ) โดยใช้อัตราส่วนโฟกัส ( ss-320 , Tomy Seiko จำกัด , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) ที่ 120 ° C R 60 นาทีผ้าไหมเซริซินในสารละลายกรองเอารักษากรดไฟโบรอิน . สารละลายกรดซิตริกที่ใช้เตรียมกรดทรามไหมเซริซินโซลูชั่น ดักแด้ของหนอนไหม Bombyx mori ถูกตัดเป็นชิ้นเล็กๆ เติมสารละลายกรดซิตริก 1.25 % และต้มเป็นเวลา 30 นาที หลังจากการกรองเพื่อเอาเส้นใยไม่ละลายส่วนกรองใสทันทีซิน้ำกลั่น 3 วันโดยใช้เยื่อแผ่นเซลลูโลส ( cellusep T2 , mwco 6000-8000 , เลื่อม , Texas , USA ) และการรักษา สารละลายโซเดียมคาร์บอเนตใช้ด่างลายผ้าไหมเซริซินเตรียมสารละลาย ดักแด้ของ bombym โมริไหมมาตัดเป็นชิ้นเล็ก ๆและเพิ่ม 0.5 เปอร์เซ็นต์โซเดียมคาร์บอเนตโซลูชั่นรายละเอียดอื่น ๆเช่นเดียวกับที่อธิบายไว้ในกรดในการรักษา ตลอดการรักษา ตัดสดเปลือกรังไหมถูกแช่ลงในสารละลาย 8 M ยูเรีย 30 นาทีจากนั้น refluxed ที่ 85 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที ปั่นและกรองเอากากนำมาละลายน้ำ สารละลายที่ผ่านอย่างละเอียดในน้ำกลั่นโดยใช้เยื่อแผ่นเซลลูโลส ( cellusep T2 , mwco 6000-8000 , เลื่อม , เท็กซัสสหรัฐอเมริกา ) สำหรับการเตรียมการ 3 วันของไฟโบรอินไหม / เซริซินและบริสุทธิ์โปรตีนไหมไฟโบรอินภาพยนตร์ / เซริซินที่ความเข้มข้นโปรตีนต่าง ๆโซลูชั่นถูกโยนบนกระจกหลุด ( 176 มม. และอากาศแห้งข้ามคืนเพื่อเตรียมภาพยนตร์ บริสุทธิ์ไหมเซริซินโซลูชั่น ( 0.1 มก. / 100 HL ) ที่ได้จากการสกัดด้วยวิธีที่แตกต่างกันถูกทิ้งลงบนกระจกหลุด ( 176 มม. และอากาศแห้งข้ามคืนด้วยฟิล์มบางของผ้าไหม sericins เคลือบบนกระจกหลุดแล้วเครื่อง โดยเปิดเผยเพื่อ UV รอบสหรัฐอเมริกาไบแรด , GS Gene โปรแกรมเชื่อมโยง UV ห้อง ) 50 MJ เป็นเวลา 30 นาที หนังทั้งหมดได้ผ่านกระบวนการฆ่าเชื้อด้วยเอธิลีนออกไซด์ก่อนเซลล์ทดสอบความมีชีวิตของเมล็ด l929 fibroblast เซลล์ สำหรับในการทดสอบ biocompatibility หลอดแก้วl929 เมาส์ไฟโบรบลาสต์ถูก seeded บนฟิล์ม ( 5x10 เซลล์ / ภาพยนตร์ ) วางในจานเพาะเลี้ยง dmem 24 ดีและเสริมด้วย FBS 10% และ 1 ใน 370c เพนนิซิลลิน / ยาสเตรปโตมัยซิน คาร์บอนไดออกไซด์ 5% กระจกเคลือบไม่หลุด ( G ) ที่ใช้ควบคุมบวก หลังจาก 6 , 24 และ 48 ชั่วโมงกระทรวงวัฒนธรรมจำนวนเซลล์ที่แนบมาและ proliferated บนฟิล์มโดยใช้ 3 L7 assay โบรไมด์ ) ค่าการดูดกลืนแสงของสารละลายที่กำหนดใช้พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ( อ่าน 830 biohit , และ biohit เฮลซิงกิ , ฟินแลนด์ ) ที่ความยาวคลื่น 570 นาโนเมตร เปอร์เซ็นต์ของสิ่งที่แนบเซลล์เริ่มต้นที่ 6 H คำนวณได้จากสมการต่อไปนี้ :