An ARMS (amplification refractory m

An ARMS (amplification refractory mutation system) assay, described by (Hemmingsen et al., 2001) was performed to identify four alleles of GSTP1, using two different sets of primers amplifying exon 5 and exon 6. It included a forward Primer upstream of the codon 105 substitution (5′-ACC CCA GGG CTC TAT GGG AA-3′) and two reverse primers; primer ‘A’ (5′-TCA CAT AGT CAT CCT TGC CGG-3′) (Ala 114 specific) and primer ‘B’ (5′-TCA CAT AGT CAT CCT TGC CGA-3) (Val 114 specific). Two PCRs were performed for each DNA sample. PCRs were performed in 50 μl reaction volume containing 50–100 ng of genomic DNA, 50 mM KCl, 2.5 mM MgCl2, 200 mM Tris (pH 8.4), 200 μM of dNTP each, 1.5 units of Ampli Taq DNA polymerase (Bangalore Genei), forward primer and reverse primers A or B (0.3 μM each). PCR was performed with initial denaturation at 94 °C for 5 min, followed by 35 cycles of denaturation at 94 °C for 1 min, annealing at 62 °C for 1 min, elongation at 72 °C for 2 min, and a final extension at 72 °C for 7 min. A 998 bp fragment was amplified

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แขน (การขยายระบบการกลายพันธุ์อาละวาด) วิเคราะห์อธิบาย (Hemmingsen et al,., 2001) ได้ดำเนินการในการระบุสี่อัลลีลของ gstp1 ใช้สองชุดที่แตกต่างกันของไพรเมอร์ขยายเอกซ์ซอนที่ 5 และ 6 เอกซ์ซอน มันรวมไพรเมอร์ไปข้างหน้าต้นน้ำของ codon 105 ทดแทน (5'-ตามมาตรฐาน CCA ggg ctc ททท. ggg AA-3 ') และสองไพรเมอร์กลับ;ไพรเมอร์ '(5'-TCA CCT แมว AGT แมว tgc cgg-3') (ALA 114 เฉพาะ) และไพรเมอร์ 'b' (5'-TCA แมว AGT แมว CCT tgc cga-3) (114 วาลเฉพาะ) สอง PCRs ได้ดำเนินการสำหรับตัวอย่างดีเอ็นเอแต่ละ PCRs ได้ดำเนินการในปริมาณปฏิกิริยา 50 ไมโครลิตรที่มี 50-100 ng ของดีเอ็นเอจีโนม 50 มม. kcl 2.5 มม. MgCl2, 200 มิลลิเมตร tris (ph 8.4), 200 ไมโครเมตรของ dntp แต่ละ 1.5 หน่วยของแอมปลิโพลิเมอร์ taq dna (บังกาลอร์ genei) ,ไปข้างหน้าและย้อนกลับ primer ไพรเมอร์หรือ b (แต่ละ 0.3 ไมครอน) pcr ได้ดำเนินการกับ denaturation เริ่มต้นที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีตามด้วย 35 รอบของ denaturation ที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีอบที่ 62 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีการยืดตัวที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาทีและนามสกุลสุดท้าย ที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 7 นาที ส่วน 998 bp ถูกขยาย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิเคราะห์ (ขยายกลายพันธุ์ refractory ระบบ) แขน อธิบายด้วย (Hemmingsen et al., 2001) ที่ดำเนินการเพื่อระบุสี่ alleles ของ GSTP1 ใช้ชุดสองมือ exon 5 และ exon 6 ไพรเมอร์ รวมรองพื้นไปข้างหน้าเป็นต้นน้ำของการแทนที่รหัสพันธุกรรม 105 (5′-บัญชี CCA GGG CTC TAT GGG AA-3′) และไพรเมอร์กลับสอง รองพื้น 'A' (5′ TCA CAT AGT CAT CCT TGC CGG-3′) (114 อลาเฉพาะ) และพื้น 'B' (5′ TCA CAT AGT CAT CCT TGC CGA- (3) เฉพาะ Val 114) PCRs สองถูกดำเนินการสำหรับแต่ละตัวอย่างดีเอ็นเอ PCRs ได้ดำเนินการใน 50 μl ปฏิกิริยาปริมาตรประกอบด้วย ng 50–100 ของ genomic DNA, 50 mM KCl, 2.5 มม. MgCl2, 200 mM ตรี (pH 8.4), μM 200 ของ dNTP แต่ละ 1.5 หน่วย Ampli Taq DNA พอลิเมอเรส (บังกาลอร์ Genei), ส่งสีรองพื้นและไพรเมอร์กลับ A หรือ B (0.3 μM ละ) PCR ถูกทำกับ denaturation เริ่มต้นที่ 94 ° C 5 นาที ตาม ด้วยรอบ 35 ของ denaturation ที่ 94 ° C สำหรับ 1 นาที สำหรับการอบเหนียวที่ 62 ° C 1 นาที elongation ที่ 72 ° C สำหรับ 2 นาที และส่วนขยายสุดท้ายที่ 72 ° C สำหรับ 7 นาที ส่วน bp 998 ถูกขยาย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

(ระบบคือมันไม่ไหม้ไฟใช้การขยายเสียง)สอบที่ระบุไว้โดย( hemmingsen et al . 2001 )ได้ดำเนินการในการระบุสี่ alleles ของ gstp 1 โดยใช้แตกต่างกันสองชุดคือชุดของ primers exon ขยายเสียง ได้ใน 5 และ exon 6 . ที่คิดรวมถึงส่งต่อ primers เชื้อปะทุต้นน้ำของ 105 การทดแทน codon ( 5 ' - ACC cca ggg ททท.กระตุ้นชมเชย ggg AA - 3 ')และสองย้อนกลับเชื้อปะทุ''( 5 ' - tca แมว agt แมว cct tgc cgg - 3 ')(, 114 )และเชื้อปะทุ' B '( 5 ' - tca แมว agt แมว cct tgc นำ CGA - 3 )( VAL 114 ). สอง pcrs นั้นดำเนินการสำหรับตัวอย่างดีเอ็นเอแต่ละครั้ง pcrs นั้นดำเนินการใน 50 ระดับปฏิกริยา μl ประกอบด้วยไนจีเรีย 50-100 50-100 50-100 ของดีเอ็นเอ genomic kcl 50 มม.ขนาด 2.5 มม. mgcl 2 บริษัททริสเรทติ้งจำกัด 200 มม.( PH 8.4 ) 200 μ m ของ dntp แต่ละชุดของ 1.5 ampli taq ดีเอ็นเอ polymerase (บังคาลอร์ genei )เชื้อปะทุไปข้างหน้าและย้อนกลับ primers หรือ B ( 0.3 μ m ). pcr เป็นครั้งแรกด้วย denaturation ที่ 94 ° C สำหรับ 5 นาที,ตามด้วย 35 รอบของ denaturation ที่ 94 ° C สำหรับ 1 นาที, annealing ที่ 62 ° C สำหรับ 1 นาที, elongation ที่ 72 ° C สำหรับ 2 นาทีและสุดท้ายการขยายที่ 72 ° C สำหรับ 7 นาทีที่ 998 BP สักเท่าไหร่เป็นแอมพลิฟาย