3. ResultsThe production of enzymes

3. Results
The production of enzymes from microorganisms is strongly influenced by the composition of the medium temperature, pH, percentage of culture inoculated and length of incubation. B. subtilis showed higher proteolytic activity on 0.03 (w/v) gelatin than on casein or skimmed milk in nutrient agar medium (Fig. 1). Carbon and nitrogen sources are also important factors for the production of protease in culture medium. Of the five carbon and nitrogen sources tested, galactose and peptone resulted in the highest protease activity (236.31 and 175.083 U/mL per min, respectively), while the least enzyme activity was observed with starch and ammonium chloride (Fig. 2). In tests to optimize the time, protease production increased gradually from 0 to 36 h, at which it was maximal, at 243.28 U/mL per min; it then decreased with time (Fig. 3). To determine the optimal H+ concentration for protease production, B. subtilis was cultivated Fig. 4. Effect of pH on activity of protease from B. subtilis. Fig. 5. Effect of temperature on activity of protease from B. subtilis. over the pH range 5–9 at room temperature. The highest protease activity was found at pH 7.4 (143.73 U/mL per min; Fig. 4). Residual protease activity was determined at different temperatures and was maximal at 40–50 ◦C, although considerable residual activity (50%) was observed even after incubation at 80 ◦C for 30 min (Fig. 5). Hence, protease obtained from B. subtilis can be considered a thermostable enzyme. To obtain proteins from the cell-free culture filtrate, they were precipitated with ammonium sulphate at 75% (w/v) saturation by adding powdered ammonium sulphate slowly with continuous shaking and a magnetic stirrer to avoid bubble formation. The protein precipitate was then dissolved and dialysed for 24 h against phosphate buffer. The yield of protein was 2.31 mg/mL, with a total activity of 475.56 U/mL per min.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3. ผลลัพธ์อิทธิพลการผลิตเอนไซม์จากจุลินทรีย์ประกอบปานกลางอุณหภูมิ pH เปอร์เซ็นต์ของวัฒนธรรม inoculated และระยะเวลาการกกไข่ B. subtilis พบกิจกรรมย่อยโปรตีนที่สูงขึ้นจากเจลาติน (w/v) 0.03 กว่าเคซีนหรือนมขาดมันเนยในวุ้นอาหารกลาง (1 รูป) แหล่งคาร์บอนและไนโตรเจนก็เป็นปัจจัยสำคัญสำหรับการผลิตโปรติเอสในวัฒนธรรม ผลของแหล่งคาร์บอนและไนโตรเจนห้าทดสอบ กาแล็กโทส และ peptone ในกิจกรรมโปรติเอสสูงสุด (236.31 และ 175.083 U/mL ต่อนาที ตามลำดับ), ใน ขณะที่เอนไซม์อย่างน้อยพบว่า แป้งและแอมโมเนียมคลอไรด์ (2 รูป) ในการทดสอบการปรับปรุงเวลา การผลิตโปรติเอสเพิ่มขึ้นเรื่อย ๆ จาก 0 เป็น 36 h ซึ่งมันเป็นความสูงสุด ที่ 243.28 U/mL ต่อนาที แล้วมันลดลงกับเวลา (รูป 3) การตรวจสอบที่เหมาะสม H + ความเข้มข้นสำหรับการผลิตโปรติเอส B. subtilis ถูกปลูกมะเดื่อ 4 ผลของ pH ในกิจกรรมของโปรติเอสจาก B. subtilis รูป 5 ผลของอุณหภูมิในกิจกรรมของโปรติเอสจาก B. subtilis กว่าค่า pH ช่วง 5 – 9 ที่อุณหภูมิห้อง พบกิจกรรมโปรติเอสสูงสุดที่ pH 7.4 (143.73 U/มิลลิลิตร ต่อนาที ทางรูปที่ 4) กิจกรรมโปรติเอสที่เหลือกำหนดที่อุณหภูมิต่าง ๆ และก็สูงสุดที่ 40 – 50 ◦C แม้ว่ากิจกรรมส่วนที่เหลือจำนวนมาก (50%) พบว่า หลังจากบ่มที่ 80 ◦C 30 นาที (5 รูป) ด้วยเหตุนี้ โปรติเอสที่ได้รับจาก B. subtilis ถือได้ว่าเอนไซม์ thermostable ต้องได้รับโปรตีนจากการกรองปราศจากเซลล์ ที่พวกเขาถูกตกตะกอน ด้วยแอมโมเนียมซัลเฟตอิ่มตัว 75% (w/v) ที่ โดยเพิ่มผงแอมโมเนียมซัลเฟตช้ากับสั่นอย่างต่อเนื่องและช้อนคนเป็นแม่เหล็กเพื่อหลีกเลี่ยงการก่อตัวของฟอง ตะกอนโปรตีนละลายแล้ว และ dialysed ใน 24 h กับฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ผลผลิตของโปรตีนคือ 2.31 mg/mL มีกิจกรรมการรวมของ 475.56 U/mL ต่อนาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3. ผลการทดลอง
การผลิตเอนไซม์จากจุลินทรีย์ที่มีอิทธิพลอย่างมากโดยองค์ประกอบของอุณหภูมิปานกลางที่ค่า pH ค่าร้อยละของวัฒนธรรมเชื้อและระยะเวลาของการบ่ม B. subtilis แสดงให้เห็นว่ากิจกรรมโปรตีนที่สูงขึ้นใน 0.03 (w / v) เจลาตินกว่าบนเคซีนหรือนมไขมันต่ำในสื่อสารอาหารวุ้น (รูปที่ 1). คาร์บอนและไนโตรเจนแหล่งที่มานอกจากนี้ยังมีปัจจัยที่สำคัญสำหรับการผลิตเอนไซม์โปรติเอในอาหารเลี้ยงเชื้อ ของห้าคาร์บอนและไนโตรเจนแหล่งที่มาทดสอบและกาแลคโตเปปโตนส่งผลให้กิจกรรมโปรติเอสสูงสุด (236.31 175.083 และ U / มิลลิลิตรต่อนาทีตามลำดับ) ในขณะที่การทำงานของเอนไซม์น้อยเป็นข้อสังเกตที่มีแป้งและแอมโมเนียมคลอไร (รูปที่. 2) ในการทดสอบเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพของเวลาการผลิตเอนไซม์โปรติเอค่อยๆเพิ่มขึ้น 0-36 ชั่วโมงซึ่งมันเป็นสูงสุดที่ 243.28 U / มิลลิลิตรต่อนาที; จากนั้นก็ลดลงด้วยเวลา (รูปที่. 3) เพื่อตรวจสอบความ H ที่ดีที่สุด + เข้มข้นสำหรับการผลิตเอนไซม์โปรติเอบี subtilis รูปที่ได้รับการปลูกฝัง 4. ผลของค่า pH เกี่ยวกับกิจกรรมของโปรติเอสจาก B. subtilis มะเดื่อ. 5. ผลของอุณหภูมิในการทำงานของโปรติเอสจาก B. subtilis ช่วงค่า pH 5-9 ที่อุณหภูมิห้อง กิจกรรมโปรติเอสที่สูงที่สุดก็พบว่าที่ pH 7.4 (143.73 U / มิลลิลิตรต่อนาที. รูปที่ 4) กิจกรรมโปรติเอสที่เหลือก็ตัดสินใจที่อุณหภูมิที่แตกต่างกันและเป็นที่สูงสุด 40-50 ◦Cแม้ว่ากิจกรรมที่เหลือมาก (50%) พบว่าแม้หลังจากการบ่มที่ 80 ◦Cเป็นเวลา 30 นาที (รูปที่. 5) ดังนั้นโปรติเอสที่ได้รับจากบี subtilis สามารถพิจารณาเอนไซม์ทนต่อความร้อน ที่จะได้รับโปรตีนจากเซลล์ฟรีกรองวัฒนธรรมพวกเขาถูกตกตะกอนด้วยแอมโมเนียมซัลเฟตที่ 75% (w / v) โดยการเพิ่มความอิ่มตัวของแอมโมเนียมซัลเฟตผงช้าเขย่าอย่างต่อเนื่องและเครื่องกวนแม่เหล็กเพื่อหลีกเลี่ยงการก่อฟอง ตะกอนโปรตีนก็เลือนหายไปแล้วและไตเป็นเวลา 24 ชั่วโมงกับฟอสเฟตบัฟเฟอร์ อัตราผลตอบแทนของโปรตีน 2.31 ​​mg / ml กับกิจกรรมทั้งหมดของ 475.56 U / มิลลิลิตรต่อนาที