MethodsMicrobial strainsS. cerevisi

Methods
Microbial strains
S. cerevisiae PYCC 4455, K. marxianus PYCC 3886T and C. tropicalis
PYCC 3097T were obtained from Biology Department – University
of Minho. Yeast were cultivated at 30 ◦C for 48 h and maintained on
YPDA medium [yeast extract 1% (w/v), peptone 2% (w/v), glucose
2% (w/v) and agar 2% (w/v)].
Hypholoma fasciculare (Huds.) P. Kumm. was isolated from
chestnut orchards at Braganc¸ a (Northeast Portugal) and molecularly
identified by the amplification and sequencing of the internal
transcribed spacer (ITS) region (Pereira et al. 2011). Fungal axenic
cultures were maintained on Potato Dextrose Agar (PDA, Difco)
medium or on modified Melin-Norkans (MMN) agar medium [NaCl
0.0025% (w/v); (NH4)2HPO4 0.025% (w/v); KH2PO4 0.05% (w/v);
FeCl3 0.005% (w/v); CaCl2 0.05% (w/v); MgSO4·7H2O 0.015% (w/v);
thiamine 0.01% (w/v); casamino acids 0.1% (w/v); malt extract 0.1%
(w/v); glucose 1% (w/v); agar 2% (w/v), at pH 6.6]. Cultures were
maintained at 25 ◦C, in the dark, being sub-cultured periodically.
Evaluation of fungal antimicrobial activity in standard conditions
An inoculum of H. fasciculare fungus was transferred to the centre
of a PDA plate and incubated at 25 ◦C, in the dark, for 6 days.
After incubation, the plates were overlaid with the sensitive indicator
strain. To prepare the sensitive microbial suspension, yeast
biomass was scraped from a 48 h YPDA culture plate and suspended
in 0.5 ml of NaCl 0.85% (w/v). The titre of yeast suspension was calculated
using a Neubauer chamber and the suspension was mixed
with melted-agar 0.8% (w/v) in order to obtain 106 CFU (colony
forming units)/ml. A volume of 8 ml of the mixture was then seeded
as a lawn onto the surface of the plates previously inoculated with
H. fasciculare. Incubation was performed at 25 ◦C for 48 h. Anti-yeast
activity was observed when the fungal inoculum was surrounded
by a clear zone of growth inhibition, and evaluated by determining
both the diameter of the fungal colony and the diameter of the
inhibition halo. Values were used to calculate the areas occupied by
the fungus and by the inhibition halo formed by its antimicrobial
activity. Fungal antimicrobial potential (AP) was arbitrarily defined
as the ratio between both diameter values (diameter of the inhibition
halo/diameter of the fungal colony). Data are presented as
the mean of 3–4 independent experiments, with 3 replicas. The
corresponding standard error values are displayed.
Antimicrobial assay optimization
Antimicrobial activity assay was optimized using different fungal
culture media (MMN or PDA). After optimization of the assay
medium, the yeast inoculum size to be used in the bioassay was

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีการสายพันธุ์จุลินทรีย์S. cerevisiae PYCC 4455, marxianus คุณ PYCC 3886T และ C. tropicalisPYCC 3097T ได้รับจากแผนกชีววิทยา – มหาวิทยาลัยของ Minho ยีสต์มีปลูกที่ 30 ◦C สำหรับ 48 h และอยู่ในYPDA กลาง [ยีสต์สารสกัด 1% (w/v) peptone 2% (w/v), กลูโคส2% (w/v) และ agar 2% (w/v)]Hypholoma fasciculare (Huds) P. ที่ Kumm ถูกแยกต่างหากจากสวน chestnut ที่ Braganc¸ (โปรตุเกสตะวันออกเฉียงเหนือ) และ molecularlyโดยขยายการจัดลำดับของการภายในทับเป็นตัวเว้นวรรค (ของ) ภูมิภาค (Pereira et al. 2011) เชื้อรา axenicวัฒนธรรมที่มีอยู่ในมันฝรั่งขึ้น Agar (PDA, Difco)ขนาดกลาง หรือกลาง agar Melin Norkans (MMN) แก้ไข [NaCl0.0025% (w/v); (NH4) 2HPO4 0.025% (w/v); KH2PO4 0.05% (w/v);FeCl3 0.005% (w/v); CaCl2 0.05% (w/v); MgSO4·7H2O 0.015% (w/v);ไทอามีน 0.01% (w/v); casamino กรด 0.1% (w/v); มอลต์สกัด 0.1%(w/v); กลูโคส 1% (w/v); agar 2% (w/v), ค่า pH 6.6] มีวัฒนธรรมรักษาที่ 25 ◦C ในมืด การย่อยอ่างเป็นระยะ ๆการประเมินกิจกรรมจุลินทรีย์เชื้อราในภาวะมาตรฐานการ inoculum ของเชื้อรา H. fasciculare ถูกถ่ายโอนไปศูนย์ของ PDA แผ่น และ incubated ที่ 25 ◦C ในมืด 6 วันหลังจากบ่ม แผ่นถูก overlaid กับตัวบ่งชี้ที่สำคัญต้องใช้ การเตรียมการระงับจุลินทรีย์สำคัญ ยีสต์ชีวมวลถูกขูดจากจาน 48 h YPDA วัฒนธรรม และหยุดชั่วคราวใน 0.5 ml ของ NaCl 0.85% (w/v) Titre ของยีสต์ระงับไม่ได้ใช้หอ Neubauer และระงับการถูกผสมหลอม agar 0.8% (w/v) เพื่อให้ได้ 106 CFU (อาณานิคมเป็นหน่วย) / ml แล้วถูก seeded ปริมาตรของ ml 8 ของผสมเป็นสนามหญ้าบนพื้นผิวของแผ่น inoculated ก่อนหน้านี้ ด้วยH. fasciculare ทำการบ่มที่ 25 ◦C สำหรับ 48 h. ต้านยีสต์กิจกรรมที่ถูกตรวจสอบเมื่อถูกล้อมรอบ inoculum เชื้อราโดยโซนชัดเจนของการยับยั้งการเจริญเติบโต และประเมิน โดยกำหนดทั้งเส้นผ่าศูนย์กลางของโคโลนีเชื้อราและเส้นผ่าศูนย์กลางของการhalo ยับยั้ง ค่าใช้ในการคำนวณพื้นที่ด้วยเชื้อรานี้ และ halo ยับยั้งการเกิดขึ้น โดยการยับยั้งจุลินทรีย์กิจกรรมการ โดยได้กำหนดศักยภาพจุลินทรีย์เชื้อรา (AP)เป็นอัตราส่วนระหว่างค่าทั้งสองเส้น (เส้นผ่าศูนย์กลางของการยับยั้งการhalo/เส้น ผ่าศูนย์กลางของโคโลนีเชื้อรา) ข้อมูลจะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย 3 – 4 อิสระทดลอง กับแบบจำลอง 3 ที่มีแสดงค่าข้อผิดพลาดมาตรฐานสอดคล้องกันเพิ่มประสิทธิภาพการวิเคราะห์จุลินทรีย์ทดสอบกิจกรรมจุลินทรีย์ถูกปรับการใช้แตกต่างกันเชื้อราสื่อวัฒนธรรม (MMN หรือ PDA) หลังจากเพิ่มประสิทธิภาพของการทดสอบขนาดกลาง ขนาด inoculum ยีสต์ใช้ใน bioassay ถูก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธี
จุลินทรีย์สายพันธุ์
เอ cerevisiae PYCC 4455, K. marxianus PYCC 3886T และ C. tropicalis
PYCC 3097T ที่ได้รับจากกรมชีววิทยา - มหาวิทยาลัย
ของมินโฮ ยีสต์ได้รับการปลูกฝังวันที่ 30 ◦Cเวลา 48 ชั่วโมงและการบำรุงรักษาใน
ยีสต์กลาง [YPDA สารสกัดจาก 1% (w / v), เปปโตน 2% (w / v) กลูโคส
2% (w / v) และวุ้น 2% (w / V)].
Hypholoma fasciculare (Huds.) P. Kumm ที่แยกได้จาก
สวนผลไม้เกาลัดที่Braganc¸ (ภาคตะวันออกเฉียงเหนือโปรตุเกส) และโมเลกุล
ระบุการขยายและการเรียงลำดับของภายใน
spacer คัดลอก (ITS) ภูมิภาค (Pereira et al. 2011) เชื้อราปลอดเชื้อ
วัฒนธรรมที่ถูกเก็บรักษาในมันฝรั่ง Dextrose Agar (PDA, Difco)
กลางหรือแก้ไข Melin-Norkans (MMN) กลางวุ้น [โซเดียมคลอไรด์
0.0025% (w / v); (NH4) 2HPO4 0.025% (w / v); KH2PO4 0.05% (w / v);
FeCl3 0.005% (w / v); CaCl2 0.05% (w / v); MgSO4 · 7H2O 0.015% (w / v)
วิตามินบี 0.01% (w / v); กรด casamino 0.1% (w / v); สารสกัดจากมอลต์ 0.1%
(w / v); กลูโคส 1% (w / v); วุ้น 2% (w / v) ที่ pH 6.6] วัฒนธรรมที่ถูก
เก็บรักษาไว้ที่อุณหภูมิ 25 ◦C, ในความมืดที่ถูกย่อยที่เพาะเลี้ยงเป็นระยะ ๆ .
การประเมินผลของฤทธิ์ต้านจุลชีพของเชื้อราในเงื่อนไขมาตรฐาน
ของเชื้อเอช fasciculare เชื้อราถูกย้ายไปที่ศูนย์
ของแผ่นพีดีเอและบ่มที่อุณหภูมิ 25 ◦Cใน ความมืดเป็นเวลา 6 วัน.
หลังจากการบ่มแผ่นถูกซ้อนทับกับตัวบ่งชี้ที่ไวต่อ
ความเครียด เพื่อเตรียมความพร้อมระงับจุลินทรีย์ที่มีความสำคัญยีสต์
ชีวมวลที่ถูกคัดลอกมาจาก 48 ชั่วโมงแผ่นวัฒนธรรม YPDA และระงับ
ใน 0.5 มิลลิลิตรของโซเดียมคลอไรด์ 0.85% (w / v) titre การระงับยีสต์ที่คำนวณ
โดยใช้ห้อง Neubauer และระงับผสม
กับวุ้นละลาย 0.8% (w / v) เพื่อให้ได้ 106 CFU (อาณานิคม
อดีตหน่วย) / ml ปริมาณของ 8 มิลลิลิตรผสมเป็นเมล็ดแล้ว
เป็นสนามหญ้าบนพื้นผิวของแผ่นเชื้อก่อนหน้านี้กับ
เอช fasciculare บ่มเพาะเป็นที่ 25 ◦Cเวลา 48 ชั่วโมง ต่อต้านยีสต์
กิจกรรมก็สังเกตเห็นเมื่อเชื้อเชื้อราถูกล้อมรอบ
โดยโซนที่ชัดเจนของการยับยั้งการเจริญเติบโตและการประเมินโดยการกำหนด
ทั้งขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางของอาณานิคมของเชื้อราและเส้นผ่าศูนย์กลางของ
รัศมีการยับยั้ง ค่าถูกนำมาใช้ในการคำนวณพื้นที่ที่ถูกครอบครองโดย
เชื้อราและรัศมีการยับยั้งที่เกิดขึ้นจากยาต้านจุลชีพของ
กิจกรรม เชื้อราที่มีศักยภาพต้านจุลชีพ (AP) ได้รับการกำหนดโดยพล
เป็นอัตราส่วนระหว่างทั้งค่าเส้นผ่าศูนย์กลาง (เส้นผ่าศูนย์กลางของการยับยั้ง
รัศมี / เส้นผ่าศูนย์กลางของอาณานิคมของเชื้อรา) ข้อมูลจะถูกนำเสนอเป็น
ค่าเฉลี่ยของการทดลองอิสระ 3-4 มี 3 แบบจำลอง
ค่าความคลาดเคลื่อนมาตรฐานที่สอดคล้องจะปรากฏ.
การเพิ่มประสิทธิภาพการทดสอบยาต้านจุลชีพ
ทดสอบกิจกรรมต้านจุลชีพถูกปรับให้เหมาะสมโดยใช้เชื้อราที่แตกต่างกัน
สื่อวัฒนธรรม (MMN หรือ PDA) หลังจากการเพิ่มประสิทธิภาพของการทดสอบ
ขนาดกลางขนาดหัวเชื้อยีสต์ที่จะใช้ในการทดสอบฤทธิ์ทางชีวภาพเป็น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีจุลินทรีย์สายพันธุ์

S . cerevisiae pycc 4455 K 3886t pycc marxianus และ C . tropicalis มีผลต่อ
pycc 3097t ได้จากภาควิชาชีววิทยา ) มหาวิทยาลัย
ของมินโฮ . ยีสต์ปลูก 30 ◦องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมงและรักษา
ypda ขนาดกลาง [ ยีสต์สกัดร้อยละ 1 ( w / v ) เปปโตน 2 % ( w / v ) กลูโคส
2 % ( w / v ) และวุ้น 2% ( w / v ) ] .
hypholoma fasciculare ( huds ) หน้า kumm . ที่แยกได้จาก
สวนเกาลัดที่ braganc ¸ ( ภาคตะวันออกเฉียงเหนือของโปรตุเกส ) และโมเลกุล
ระบุโดยเครื่องขยายเสียงและลำดับของภายใน
และ spacer ( ITS ) ภูมิภาค ( Pereira et al . 2011 ) วัฒนธรรม axenic
ราถูกเก็บรักษาไว้ในอาหารเลี้ยงเชื้อ potato dextrose agar ( PDA , difco )
) หรือแก้ไข norkans เมลิน ( MMN ) อาหารวุ้น [ เกลือ
0.0025 % ( w / v ) ; ( NH4 ) 2hpo4 0.025 % ( w / v ) ; kh2po4 0.05% ( w / v ) ;
FeCl3 0005 % ( w / v ) ; CaCl2 0.05% ( w / v ) ; MgSO4 ใด้วย 7h2o 0.015 % ( w / v ) ;
วิตามินบี1 0.05 % ( w / v ) ; casamino กรด 0.1% ( w / v ) ; สารสกัดจากมอลต์
0.1% ( w / v ) กลูโคส 1% ( w ; / V ) ; วุ้น 2% ( w / v ) ที่ pH 6.6 ] วัฒนธรรมคือ
ไว้ที่ 25 ◦ C , ในที่มืด , ถูกย่อยอาหารเป็นระยะ ๆ
การประเมินฤทธิ์ต้านจุลชีพเชื้อราในเงื่อนไขมาตรฐาน
เป็นเชื้อเอช fasciculare เชื้อรา ถูกย้ายไปศูนย์
ของ PDA จานและบ่มที่อุณหภูมิ 25 ◦องศาเซลเซียสในที่มืดเป็นเวลา 6 วัน
หลังจากบ่ม จานถูกวางทับด้วยตัวบ่งชี้
อ่อนไหวเมื่อย เตรียมระงับเชื้อยีสต์ที่มีชีวมวล
โดนขูดจาก 48 ชั่วโมง ypda วัฒนธรรมจานและระงับ
ใน 0.5 มล. เกลือ 0.85 % ( w / v ) การ titre เซลล์ยีสต์ได้คำนวณ
ใช้ห้องนูเบาเออร์และช่วงล่างผสม
ละลายวุ้น 0.8 % ( w / v ) เพื่อให้ได้ 106 cfu ( อาณานิคม
รูปหน่วย / มล. ปริมาณ 8 มิลลิลิตร ผสมส่วนผสมแล้วเมล็ด
เป็นสนามหญ้าบนพื้นผิวของแผ่นก่อนหน้านี้ใส่
h fasciculare . ระยะเวลาดำเนินการโดย 25 ◦เป็นเวลา 48 ชั่วโมง ต้านยีสต์
กิจกรรมพบว่าเมื่อปริมาณเชื้อราล้อม
โดยโซนที่ชัดเจนของการยับยั้งการเจริญเติบโตและประเมินโดยกำหนด
เส้นผ่าศูนย์กลางของโคโลนีของเชื้อราและเส้นผ่าศูนย์กลางของ
ยับยั้งรัศมี ค่าถูกใช้เพื่อคำนวณพื้นที่ที่ถูกครอบครองโดย
เชื้อราและสารฮาโลที่เกิดจากฤทธิ์ต้านจุลชีพ
. ศักยภาพของเชื้อราสารต้านจุลชีพ ( AP ) คือโดยพลการกำหนดอัตราส่วนระหว่างเส้นผ่าศูนย์กลาง
เป็นทั้งค่า ( เส้นผ่าศูนย์กลางของการยับยั้ง
ทรงกลด / เส้นผ่าศูนย์กลางโคโลนีของเชื้อรา ) ข้อมูลจะถูกนำเสนอเป็น
ค่าเฉลี่ยของ 3 – 4 อิสระในการทดลองกับ 3 แบบจําลอง
ข้อผิดพลาดมาตรฐานที่สอดคล้องกันค่าจะแสดง โดยการเพิ่มประสิทธิภาพ

กิจกรรมการยับยั้งเชื้อทดสอบคือปรับใช้อาหารเลี้ยงเชื้อรา
แตกต่างกัน ( MMN หรือ PDA ) หลังจากการเพิ่มประสิทธิภาพของการทดสอบ
ขนาดกลาง ยีสต์เชื้อขนาดเพื่อใช้ในการทดสอบคือ