To confirm that the folding charact

To confirm that the folding characteristics of HP35 and HP35st are preserved when the peptides are inserted between two fluorophores, we purified HP35-based tension sensor modules from cells and performed single-molecule force spectroscopy calibration. Those experiments corroborated the previously observed folding/unfolding kinetics of the isolated peptides and revealed the mid-force transition to be at about 7.4 pN for HP35 and 10.6 pN for HP35st (Austen et al., 2015). The observed folding transitions were well described by a theoretical model assuming HP35/HP35st to be either in a folded, half-folded/half-unfolded or unfolded state, and the resulting probabilities for HP35/HP35st to be in any of these conformations at a given force were then used to calculate the sensor module force-FRET responses (Fig. 3). Furthermore, force spectroscopy experiments showed that the employed fluorophores (YPet and mCherry) do not unfold at low pN forces and even remained stably folded when exposed to a constant force of 24 pN for more than 5 min.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เพื่อยืนยันว่า ลักษณะพับของ HP35 และ HP35st มีเก็บเปปไทด์จะแทรกระหว่างสอง fluorophores เราบริสุทธิ์ความตึงเครียดตาม HP35 เซนเซอร์โมดูจากเซลล์ และดำเนินการสอบเทียบสเปกโทรสโกแรงโมเลกุลเดี่ยว การทดลองที่เวลาพับ/แฉจลนพลศาสตร์สังเกตก่อนหน้าของเปปไทด์แยก และเปิดเผยการเปลี่ยนแปลงแรงกลางอยู่ที่ประมาณ 7.4 pN สำหรับ HP35 และ pN 10.6 สำหรับ HP35st (ออสเต็น et al. 2015) ช่วงการเปลี่ยนภาพพับสังเกตดีถูกอธิบาย โดยแบบจำลองทางทฤษฎีที่สมมติว่า HP35/HP35st ได้ในสถานะพับ ครึ่งพับ/ครึ่งกางออก หรือกางออก แล้วน่าจะเป็นผลลัพธ์สำหรับ HP35/HP35st จะใน conformations เหล่านี้ที่เป็นแรงที่กำหนดแล้วใช้ในการคำนวณการเซนเซอร์โมดูหงุดหงิดแรงตอบสนอง (3 รูป) นอกจากนี้ บังคับสเปกโทรสโกการทดลองแสดงให้เห็นว่า fluorophores ส่วน (YPet และ mCherry) ไม่แฉที่กองกำลังต่ำ pN และแม้แต่ยังคงสามารถพับเมื่อสัมผัสแรงคงที่ของหมายเลขสินค้า 24 มากกว่า 5 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อยืนยันว่าลักษณะของการพับ HP35 และ HP35st จะถูกเก็บไว้เมื่อเปปไทด์จะถูกแทรกระหว่างสอง fluorophores เราบริสุทธิ์ HP35-based โมดูลเซ็นเซอร์ความตึงเครียดจากเซลล์และดำเนินการโมเลกุลเดี่ยวสอบเทียบแรงสเปกโทรสโก การทดลองยืนยันพับสังเกตก่อนหน้านี้ / แฉจลนศาสตร์ของเปปไทด์โดดเดี่ยวและเผยให้เห็นการเปลี่ยนแปลงกลางแรงที่จะอยู่ที่ประมาณ 7.4 PN สำหรับ HP35 และ 10.6 PN สำหรับ HP35st (ออสเตน et al., 2015) สังเกตการเปลี่ยนพับได้อธิบายไว้อย่างดีจากรูปแบบทางทฤษฎีสมมติ HP35 / HP35st จะเป็นอย่างใดอย่างหนึ่งในพับครึ่งพับ / ครึ่งกางออกหรือรัฐกางออกและความน่าจะเป็นผลที่ได้สำหรับ HP35 / HP35st ที่จะอยู่ในส่วนใดของ conformations เหล่านี้ใน แรงที่กำหนดถูกนำมาใช้ในการคำนวณโมดูลเซ็นเซอร์ตอบสนองแรงฉลุ (รูปที่. 3) นอกจากนี้การทดลองแรงสเปกโทรสโกแสดงให้เห็นว่าการจ้างงาน fluorophores (YPet และ mCherry) ไม่ได้แฉที่กองกำลัง PN ต่ำและแม้ยังคงพับเสถียรเมื่อสัมผัสกับแรงคงที่ของ 24 PN นานกว่า 5 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อยืนยันว่า ลักษณะของ hp35 hp35st พับและจะยังคงอยู่เมื่อเปปไทด์จะถูกแทรกระหว่างสอง fluorophores เราบริสุทธิ์ตามแรง hp35 เซนเซอร์โมดูลจากเซลล์และดำเนินการเชิงโมเลกุลเดี่ยวบังคับสเปกโทรสโกปีในการสอบเทียบ การทดลองที่ยืนยันก่อนหน้านี้ว่าพับ / แฉจลนศาสตร์ของการแยกเปปไทด์และเปิดเผยกลางบังคับเปลี่ยนอยู่ที่ประมาณ 7.4 และ PN สำหรับ hp35 10.6 PN สำหรับ hp35st ( ออสติน et al . , 2015 ) วิธีพับเปลี่ยนเป็นอย่างดีอธิบายโดยทฤษฎีแบบจำลองสมมติว่า hp35 / hp35st จะเหมือนกันในพับครึ่ง พับครึ่ง หรือคลี่กางออกรัฐ และผลของความน่าจะเป็น hp35 / hp35st อยู่ในใด ๆของโครงสร้างเหล่านี้ที่ได้รับพลังแล้วใช้คำนวณโมดูลเซ็นเซอร์แรงทำให้การตอบสนอง ( รูปที่ 3 ) นอกจากนี้ บังคับสเปกโทรสโกปี พบว่า ในการทดลอง fluorophores ( ypet และ mcherry ) ไม่แฉที่กำลังต่ำและแม้ยังคงแน่นแฟ้น PN พับเมื่อถูกบังคับให้คงที่ตลอดช่วงกว่า 5 นาที