2.4. Purification of xylanasesThe c

2.4. Purification of xylanases
The crude culture filtrate (200 mL) was dialyzed against 0.05 M Tris–
HCl buffer pH 7.0 for 8 h,with buffer changes each 2 h, in order to exclude
small molecules and obtain a buffered solution in this pH. This sample
was submitted to ion exchange chromatography on a DEAE Sephadex
A-50 column (1.1 × 14.5 cm), previously equilibrated with the same
dialysis buffer; at 50 mL/h flow rate. Adsorbed proteins were then
eluted with a 0.0–0.5 M NaCl linear gradient in the same buffer. Proteins
were detected by reading absorbance at 280 nm and xylanase activity
was assayed in the collected 3 mL fractions. Fractions with high
xylanase activity were pooled and submitted to electrophoresis
(SDS-PAGE). The sample corresponding to the not retained fractions
was further dialyzed against 0.05 M ammonium acetate buffer pH 6.8
for 8 h, with buffer changes each 2 h, and then lyophilized. The sample
was re-dissolved in a small volume of this buffer and applied to size
exclusion chromatography on a Sephadex G-75 (1.8 × 60.5 cm) column
equilibrated and eluted in the same buffer, at 19 mL/h flow rate.
Proteins were detected by reading absorbance at 280 nm and xylanase
activity was assayed in the collected 3 mL fractions. Fractions with high
xylanase activity were pooled and submitted to electrophoresis
(SDS-PAGE). All purification steps were carried out at 4°C.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4 การฟอกของ xylanasesการวัฒนธรรมดิบสารกรอง (200 มล) มี dialyzed กับ 0.05 M ตรี –HCl บัฟเฟอร์ pH 7.0 สำหรับ 8 h กับบัฟเฟอร์เปลี่ยน h แต่ละ 2 เพื่อแยกโมเลกุลขนาดเล็ก และได้รับการแก้ปัญหาถูกบัฟเฟอร์ใน pH นี้ ตัวอย่างนี้ส่งไป chromatography แลกเปลี่ยนไอออนในการ DEAE Sephadexคอลัมน์ A 50 (1.1 × 14.5 ซม.), equilibrated ก่อนหน้านี้ ด้วยเหมือนกันบัฟเฟอร์หน่วย ที่อัตราการไหล 50 mL/h โปรตีน adsorbed ได้แล้วeluted กับ 0.0-0.5 M NaCl ไล่ระดับเส้นในบัฟเฟอร์เดียวกัน โปรตีนตรวจพบ โดยการอ่าน absorbance ที่ 280 nm และไซลาเนสกิจกรรมมี assayed บางส่วนรวบรวม 3 mL เศษส่วนกับสูงกิจกรรมไซลาเนสถูกทางถูกพู และส่ง electrophoresis(SDS-หน้า) ตัวอย่างที่สอดคล้องกับการไม่สะสมเศษมี dialyzed เพิ่มเติมกับ 0.05 M แอมโมเนีย acetate บัฟเฟอร์ pH 6.8สำหรับ 8 h กับบัฟเฟอร์เปลี่ยนแปลงแต่ละ 2 h และ lyophilized แล้ว ตัวอย่างการละลายในปริมาตรเล็ก ๆ นี้บัฟเฟอร์ และกับขนาดchromatography แยกคอลัมน์ Sephadex G-75 (1.8 × 60.5 ซม.)equilibrated และ eluted ในบัฟเฟอร์ที่เดียวกัน ที่ 19 mL/h อัตราการไหลตรวจพบโปรตีน โดยอ่าน absorbance ที่ 280 nm และไซลาเนสกิจกรรมถูก assayed บางส่วนรวบรวม 3 mL เศษส่วนกับสูงกิจกรรมไซลาเนสถูกทางถูกพู และส่ง electrophoresis(SDS-หน้า) ขั้นตอนฟอกทั้งหมดได้ดำเนินการที่ 4 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 การทำให้บริสุทธิ์ของไซแลนเนสกรองวัฒนธรรมดิบ (200 มิลลิลิตร) ถูก dialyzed กับ 0.05 M Tris- ค่า pH บัฟเฟอร์ HCl 7.0 เป็นเวลา 8 ชั่วโมงที่มีการเปลี่ยนแปลงในแต่ละบัฟเฟอร์ 2 ชั่วโมงในการสั่งซื้อที่จะไม่รวมโมเลกุลขนาดเล็กและได้รับการแก้ปัญหาในบัฟเฟอร์pH นี้ ตัวอย่างนี้ถูกส่งไปยังโคแลกเปลี่ยนไอออนบน DEAE Sephadex A-50 คอลัมน์ (1.1 × 14.5 เซนติเมตร) equilibrated ก่อนหน้านี้แบบเดียวกับกันชนฟอกไต; 50 มิลลิลิตร / ชั่วโมงอัตราการไหล โปรตีนที่ถูกดูดซับแล้วชะกับ 0.0-0.5 M NaCl ลาดเชิงเส้นในบัฟเฟอร์เดียวกัน โปรตีนที่ถูกตรวจพบโดยการอ่านการดูดกลืนแสงที่ 280 นาโนเมตรและกิจกรรมไซลาเนสได้รับการวิเคราะห์ในการเก็บรวบรวม3 มิลลิลิตรเศษส่วน เศษส่วนที่มีสูงกิจกรรมไซลาเนสที่ได้รวบรวมและส่งไปยัง electrophoresis (SDS-PAGE) กลุ่มตัวอย่างที่สอดคล้องกับเศษส่วนไม่ได้เก็บไว้เป็นที่ dialyzed เพิ่มเติมกับ 0.05 M แอมโมเนียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ pH 6.8 เป็นเวลา 8 ชั่วโมงที่มีการเปลี่ยนแปลงในแต่ละบัฟเฟอร์ 2 ชั่วโมงและแห้งแล้ว กลุ่มตัวอย่างเป็นอีกครั้งที่ละลายในปริมาณขนาดเล็กของบัฟเฟอร์นี้และนำไปใช้กับขนาดโคยกเว้นในSephadex G-75 (1.8 × 60.5 เซนติเมตร) คอลัมน์equilibrated และชะในบัฟเฟอร์เดียวกัน ณ วันที่ 19 มิลลิลิตร / ชั่วโมงอัตราการไหล. โปรตีนเป็น ตรวจพบโดยการดูดกลืนแสงที่อ่าน 280 นาโนเมตรและไซลาเนสกิจกรรมที่ได้รับการวิเคราะห์ในการเก็บรวบรวม3 มิลลิลิตรเศษส่วน เศษส่วนที่มีสูงกิจกรรมไซลาเนสที่ได้รวบรวมและส่งไปยัง electrophoresis (SDS-PAGE) ขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ทั้งหมดได้รับการดำเนินการที่ 4 ° C

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . บริสุทธิ์ชนิด
ดิบ culture filtrate ( 200 ml ) คือผ่านกับ 0.05 M HCl บัฟเฟอร์ pH 7.0 สำหรับ–
8 H , บัฟเฟอร์การเปลี่ยนแปลงทุก 2 ชั่วโมง ในการแยกโมเลกุลเล็ก และขอรับ
ในสารละลาย pH นี้ตัวอย่าง
ถูกส่งไปยังบทร้องบน DEAE Sephadex
เอคอลัมน์ ( 1 × 14.5 ซม. ) ก่อนหน้านี้ equilibrated กับบัฟเฟอร์ฟอกเลือดเหมือนกัน
;ที่ 50 มิลลิลิตร / ชั่วโมง อัตราการไหล การดูดซับโปรตีนแล้ว
ตัวอย่างด้วย 0.0 – 0.5 M NaCl เส้นไล่ระดับสีในบัฟเฟอร์เดียวกัน โปรตีน
ถูกตรวจพบโดยการอ่านค่าการดูดกลืนแสงที่ 280 nm และไซลาเนส
ซีรั่มใน 3 ml จำนวนเศษส่วน เศษส่วนกับกิจกรรมเอนไซม์สูง
ถูก pooled และยื่นเรส
( SDS-PAGE ) ตัวอย่างที่ไม่เก็บเศษส่วน
ต่อผ่านกับ 0.05 M แอมโมเนียมอะซิเตทบัฟเฟอร์พีเอช 6.8
8 H , บัฟเฟอร์การเปลี่ยนแปลงแต่ละ 2 H , และโปรตีน . ตัวอย่าง
เป็นอีกครั้งที่ละลายในปริมาณขนาดเล็กของบัฟเฟอร์นี้ และใช้กับขนาด
ยกเว้นโครมบนนี้ g-75 ( 1.8 × 60.5 ซม. ) และคอลัมน์
equilibrated ตัวอย่างในบัฟเฟอร์เดียวกันที่ 19 ml / h
อัตราการไหลโปรตีนที่ถูกตรวจพบโดยการอ่านค่าการดูดกลืนแสงที่ 280 nm และกิจกรรมของไซลาเนส
ซีรั่มใน 3 ml จำนวนเศษส่วน เศษส่วนกับกิจกรรมเอนไซม์สูง
ถูก pooled และยื่นเรส
( SDS-PAGE ) ทุกขั้นตอนการทดลองที่ 4 องศา