The transport of amino acid across

The transport of amino acid across the membranes has great importance in cell metabolism. Specific experimental methodologies are required for measuring the vectorial reactions catalyzed by the membrane transporters. So far, the most widely used technique to study amino acid transport was the measure of amino acid flux in intact cell systems expressing a specific transporter. Some limitations in this procedure are caused by the presence of endogenous transporters and intracellular enzymes and by the inaccessibility of the intracellular compartment. Alternative experimental strategies which allow to reducing the interferences and improving the handling of the internal compartment would be useful to the amino acid transport knowledge.
An experimental protocol, which makes use of liposomes to study the transport of amino acid mediated by the glutamine/amino acid (ASCT2) transporter, solubilized from rat kidney brush borders, is described. The procedure is based on the reconstitution of the transporter in liposomes by removal of detergent from mixed micelles of detergent, solubilized protein, and phospholipid. The transport is assayed in the formed proteoliposomes measuring the Na+ dependent uptake of l-[3H]glutamine in antiport with internal l-glutamine. This method allows measuring the transport activity under well controlled experimental conditions and permits performing experiments which cannot be realized in intact cell systems.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การขนส่งกรดอะมิโนผ่านสารมีความสำคัญในเมแทบอลิซึมของเซลล์ วิธีการทดลองเฉพาะจำเป็นสำหรับวัดปฏิกิริยา vectorial กระบวน โดยผู้เยื่อ เพื่อห่างไกล เทคนิคที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในการศึกษาการขนส่งกรดอะมิโนถูกวัดฟลักซ์กรดอะมิโนในระบบเซลล์เหมือนเดิมที่กำลังขนส่งเฉพาะ ข้อจำกัดบางประการในกระบวนการนี้เกิดขึ้น โดยสถานะของผู้ endogenous และ intracellular เอนไซม์ และ inaccessibility ของช่อง intracellular การขนส่งกลยุทธ์การทดลองอื่นซึ่งช่วยให้ลด interferences ที่ และปรับปรุงการจัดการของช่องภายในจะมีประโยชน์ให้กรดอะมิโน รู้
การทดลองการใช้โพรโทคอล ซึ่งทำให้ใช้ liposomes ศึกษาการขนส่งกรดอะมิโน mediated โดยขนส่งกรด (ASCT2) glutamine/อะ มิโน solubilized จากหนูไตแปรงเส้นขอบ อธิบาย กระบวนการนี้จะขึ้นอยู่กับการ reconstitution ขนส่งใน liposomes โดยเอาผงซักฟอกจาก micelles ผสมผงซักฟอก โปรตีน solubilized และฟอสโฟลิพิด การขนส่งเป็น assayed ใน proteoliposomes รูปแบบการดูดซับขึ้นอยู่กับนาของ l- [3H] glutamine ใน antiport กับ l glutamine ภายในวัด วิธีนี้ช่วยให้การวัดกิจกรรมการขนส่งภายใต้เงื่อนไขการทดลองที่ดีควบคุม และอนุญาตให้ทำการทดลองที่ไม่สามารถรับรู้ในระบบเซลล์เหมือนเดิม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การขนส่งกรดอะมิโนผ่านเมมเบรนที่มีความสำคัญมากในการเผาผลาญของเซลล์ วิธีการทดลองที่เฉพาะเจาะจงจะต้องวัดเป็นปฏิกิริยาที่เร่งปฏิกิริยาด้วยเมมเบรนขนส่ง . ดังนั้นไกล , ใช้กันอย่างแพร่หลายเทคนิคศึกษาการขนส่งกรดอะมิโนเป็นวัดของฟลักซ์กรดอะมิโนในเซลล์ ระบบขนส่งเหมือนเดิม แสดงเฉพาะข้อจำกัดในขั้นตอนนี้จะเกิดจากการขนส่งภายในเซลล์และเอนไซม์ และโดยความฉลาดของช่องภายในเซลล์ . ทดลองกลยุทธ์ทางเลือกที่อนุญาตให้ลดการแทรกแซงและการปรับปรุงการจัดการของ ช่องภายในอาจเป็นประโยชน์กับกรดอะมิโน
โปรโตคอลการขนส่งความรู้ ทดลองซึ่งทำให้การใช้ไลโปโซมเพื่อศึกษาการขนส่งกรดอะมิโนกลูตามีน / ) โดยกรดอะมิโน ( asct2 ) ขนส่ง สร้างจากไตหนูแปรงเส้นขอบจะอธิบาย กระบวนการบนพื้นฐานของการฟื้นฟูของขนส่งในไลโปโซม โดยการกำจัดผงซักฟอกจากไมเซลล์ผสมผงซักฟอก สร้างโปรตีน และฟอสโฟลิปิด .ปริมาณการขนส่งในรูปแบบ proteoliposomes วัดนาขึ้นอยู่กับการดูดซึมของ L - [ 3 ] และใน antiport และ Glutamine . วิธีนี้จะช่วยให้วัดกิจกรรมการขนส่งที่ควบคุมด้วยเงื่อนไขการทดลองและอนุญาตให้ทดลอง ซึ่งไม่สามารถรับรู้ในระบบเซลล์เหมือนเดิม