Moreover, sequencing of partial Psa

Moreover, sequencing of partial PsaD 5' UTR, full ble CDS, and 3' UTR of PsaD verified insertion of PsaD-ble cassette in all tested colonies (data not shown). In addition, Southern blot analysis using a ble specific probe (corresponding to the full ble CDS and the 3′ UTR region of the PsaD–ble cassette) was performed using isolated gDNA of transformed colonies digested by BamHI and BglII. At least one clear ble copy was detected in the gDNA of six out of eight colonies tested (in three of them, additional copy was detected); WT and empty vector negative control colonies did not display a ble copy, as expected (data not shown). All together these results confirm the successful introduction of the pPlat–pds derived mutated gene into the genome. This confirms the usefulness of the pBS–pds transformation vectors for stably inserting transgenes added both 3′ and 5′ to the selection marker into the genome of H. pluvialis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

นอกจากนี้ ลำดับเบสของ PsaD บางส่วน 5' UTR เต็ม ble ซีดี และ 3' UTR PsaD verified แทรก PsaD ble เทปในอาณานิคมผ่านการทดสอบทั้งหมด (ข้อมูลไม่แสดง) นอกจากนี้ วิเคราะห์ภาคใต้คืนในตาที่ใช้โพรบ specific ble (ที่สอดคล้องกับ ble เต็มรูปแบบซีดีและภูมิภาค UTR 3′ ของเทป PsaD – ble) ที่ดำเนินการใช้ gDNA แยกของอาณานิคมแปรย่อย BamHI และ BglII น้อยหนึ่งสำเนา ble ชัดเจนพบใน gDNA ของอาณานิคมของหกแปดทดสอบ (ในสามของพวกเขา การตรวจพบ); ละเว้นและเวกเตอร์ว่างลบควบคุมอาณานิคมได้แสดงสำเนา ble เป็นต้น (ข้อมูลไม่แสดง) ทั้งหมดเข้าด้วยกัน confirm ผลลัพธ์เหล่านี้แนะนำ pPlat – pds ประสบความสำเร็จได้รับยีนที่กลายเป็นกลุ่ม ประโยชน์ของเวกเตอร์การแปลง pBS – pds การแทรก transgenes stably confirms นี้เพิ่ม 3′ และ 5′ เพื่อทำเครื่องหมายเลือกในจีโนมของ H. pluvialis

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

นอกจากนี้ยังมีการจัดลำดับของบางส่วน psad 5 'UTR, CDS เบิ้เต็มรูปแบบและ 3' UTR ของ psad Veri แทรกเอ็ดสายเทป psad-เบิ้ในอาณานิคมทดสอบทั้งหมด (ไม่ได้แสดงข้อมูล) นอกจากนี้การวิเคราะห์ blot ภาคใต้ใช้ระบุไว้เบิ้สอบสวนค (ตรงกับ CDS เบิ้เต็มรูปแบบและ 3 'UTR ภูมิภาคของเทป psad-เบิ้ล) ได้รับการดำเนินการโดยใช้ gDNA แยกอาณานิคมเปลี่ยนย่อยโดย BamHI และ BglII อย่างน้อยหนึ่งสำเนาเบิ้ชัดเจนถูกตรวจพบใน gDNA หกแปดอาณานิคมทดสอบ (ในสามของพวกเขาสำเนาเพิ่มเติมที่ตรวจพบ); WT และว่างเปล่าเวกเตอร์อาณานิคมควบคุมเชิงลบไม่ได้แสดงสำเนาเบิ้ลเป็นไปตามคาด (ไม่ได้แสดงข้อมูล) ทั้งหมดเข้าด้วยกันผลลัพธ์เหล่านักโทษไฟ RM แนะนำที่ประสบความสำเร็จของ pPlat-PDS ได้มากลายพันธุ์ของยีนเข้าไปในจีโนม ไฟต้มตุ๋นนี้ RMS ประโยชน์ของพีบีเอส-PDS พาหะเปลี่ยนแปลงสำหรับใส่ transgenes เสถียรเพิ่มทั้ง 3 และ 5 'เพื่อเลือกเครื่องหมายลงในจีโนมของเอช pluvialis

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

นอกจากนี้ การใช้บางส่วน psad 5 ' UTR เต็ม ble ซีดี 3 ' UTR ของ psad ข้อมูลจึงเอ็ดแทรก psad ble เทปในการทดสอบทั้งหมดอาณานิคม ( ข้อมูลไม่แสดง ) โดยการทำ Southern blot analysis โดยใช้จกาจึงคโพรบ ( ตรงกับเต็มรูปแบบ ble แผ่นซีดีและได้รับ 3 UTR ภูมิภาคของ psad – ble เทป ) มีการใช้แยก gdna อาณานิคมของแปลงย่อย และ bglii BamHI .อย่างน้อยหนึ่งชัดเจน ble คัดลอกที่ตรวจพบใน gdna หกจากแปดอาณานิคมทดสอบ ( สามของพวกเขา , คัดลอกเพิ่มเติมพบ ) ; WT และเวกเตอร์ที่ว่างเปล่าลบควบคุมอาณานิคมไม่แสดงสำเนา ble , ตามที่คาดไว้ ( ข้อมูลไม่แสดง ) ทั้งหมดเข้าด้วยกัน ผลลัพธ์เหล่านี้หลอกลวงจึง RM แนะนำที่ประสบความสำเร็จของ pplat – PDS ได้ยีนกลายพันธุ์ในจีโนม .คอนนี้ถ่ายทอดเรื ประโยชน์ของ PBS – PDS แปลงเวกเตอร์ transgenes เสถียรใส่เพิ่มทั้ง 3 และ 5 นั้นจะได้รับการทำเครื่องหมายลงในจีโนมของ H . สีเขียว .