2.4. Interdelta polymorphisms of S.

2.4. Interdelta polymorphisms of S. cerevisiae
Molecular monitoring of the inoculated starter cultures was carried
out to determine the level of dominance over the indigenous S.
cerevisiae strains during the industrial fermentation (Li et al., 2012;
Mercado et al., 2011), using interdelta PCR amplification.
S. cerevisiae colonies were isolated randomly from YPD agar plates,
and used for cell counts at the end of the industrial fermentations. The
molecular characterisation by PCR-amplification of interdelta sequences
was performed on the isolate clones (20 for each tank). DNA was
extracted from the S. cerevisiae clones, cultured at 25 °C for 24 h on
YPD agar, and a cells heat-treatment was used. In particular, a loop
from each colony was re-suspended in 5 μL sterile distilled water in 0.2mL PCR tubes and heated to 95 °C for 5min,with a single step at 4 °C.
The amplification PCR reactions were performed on a Thermal
Cycler (Bio-Rad, Hercules, CA, USA), with the PCR mixture added
directly to these unpurified DNA suspensions. Interdelta sequences
were amplified according to the procedure described by Gobbi et al.
(2013) using δ- primers proposed by Ness et al. (1993) and optimized
by Legras and Karst (2003). The amplification products were separated
by electrophoresis on 1.5% (w/v) agarose gels at 75 V for 1 h in 0.5× TBE
buffer. The gels were stained with ethidium bromide and visualised
under UV light (Gel Doc 1000 transilluminator; Bio-Rad, Hercules, CA,
USA), equipped with a photographic system.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4. interdelta หลากหลายของ S. cerevisiaeตรวจสอบโมเลกุลของวัฒนธรรมที่เริ่มต้น inoculated การดำเนินการเพื่อกำหนดระดับของการครอบงำเหนือรักถิ่นcerevisiae สายพันธุ์ระหว่างการหมักอุตสาหกรรม (Li et al. 2012เมร์กาโด et al. 2011), ใช้กระบือ interdeltaS. cerevisiae อาณานิคมถูกแยกสุ่มจากแผ่นวุ้น YPDและใช้สำหรับนับจำนวนเซลล์เมื่อสิ้นสุดการหมักแหนมอุตสาหกรรม การตรวจลักษณะเฉพาะของโมเลกุล โดยกระบือ-interdelta ลำดับที่ดำเนินการในโคลนแยก (20 สำหรับแต่ละถัง) เป็นดีเอ็นเอสกัดจาก S. cerevisiae โคลน ล้างที่ 25 ° C ใน 24 h บนYPD วุ้น และ heat-treatment เซลล์ที่ถูกใช้ โดยเฉพาะอย่างยิ่ง วนจากอาณานิคมแต่ละถูกเลื่อนออกไปอีกใน 5 μL น้ำกลั่นปลอดเชื้อใน 0.2 mL หลอด PCR และอุณหภูมิ 95 ° C 5 นาที มีขั้นตอนเดียวที่ 4 องศาเซลเซียสปฏิกิริยา PCR ขยายได้ดำเนินการในความร้อนCycler (Bio-ล้อ เฮอร์คิวลิส CA, USA), ด้วยการผสมผสานของ PCR เพิ่มโดยตรงเหล่านี้ unpurified ดีเอ็นเอฟโร ลำดับที่ interdeltaถูกขยายตามขั้นตอนอธิบายไว้โดย Gobbi et al(2013) โดยใช้ไพรเมอร์δเสนอโดย Ness et al. (1993) และดีที่สุดโดย Legras และ Karst (2003) ผลิตภัณฑ์ขยายแยกตัวโดยอิบนเจ agarose 1.5% (w/v) ที่ 75 V สำหรับ h 1 ใน 0.5 × TBEบัฟเฟอร์ เจลถูกย้อม ด้วยโบรไมด์ ethidium และเพียงเล็กน้อยได้ภายใต้แสงยูวี (1000 Doc เจ transilluminator Bio-ล้อ เฮอร์คิวลิส CAสหรัฐอเมริกา), พร้อม ด้วยระบบถ่ายภาพ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 ความหลากหลายของ Interdelta S. cerevisiae
การตรวจสอบระดับโมเลกุลของเชื้อจุลินทรีย์เริ่มต้นได้ดำเนินการ
ออกไปตรวจสอบระดับของการมีอำนาจเหนือชนพื้นเมืองที่ S
สายพันธุ์ cerevisiae ในระหว่างการหมักอุตสาหกรรม (Li et al, 2012;.
Mercado et al, 2011.) โดยใช้ interdelta ขยาย PCR.
เอส อาณานิคม cerevisiae ถูกแยกโดยการสุ่มจากแผ่น YPD วุ้น
และใช้สำหรับจำนวนเซลล์ในตอนท้ายของการหมักแหนมอุตสาหกรรม
ลักษณะโมเลกุลโดยวิธี PCR-ขยายของลำดับ interdelta
กำลังดำเนินการโคลนแยก (20 สำหรับแต่ละถัง) ดีเอ็นเอ
ที่สกัดจากโคลน S. cerevisiae เพาะเลี้ยงที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงใน
YPD วุ้นและเซลล์รักษาความร้อนถูกนำมาใช้ โดยเฉพาะอย่างยิ่งห่วง
จากแต่ละอาณานิคมเป็นอีกครั้งที่ลอยอยู่ใน 5 ไมโครลิตรน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อในหลอด 0.2mL PCR และให้ความร้อนถึง 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีด้วยขั้นตอนเดียวที่ 4 ° C.
ขยายปฏิกิริยา PCR ได้ดำเนินการในการระบายความร้อน
Cycler (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) กับส่วนผสม PCR เพิ่ม
โดยตรงกับเหล่าแขวนลอยดีเอ็นเอ unpurified Interdelta ลำดับ
ถูกขยายไปตามขั้นตอนที่อธิบายโดย Gobbi et al.
(2013) โดยใช้ไพรเมอร์δ-เสนอโดยเนสส์, et al (1993) และเพิ่มประสิทธิภาพ
โดย Legras และ Karst (2003) ผลิตภัณฑ์เครื่องขยายเสียงที่ถูกแยกออกจากกัน
โดย electrophoresis บน 1.5% (w / v) เจล agarose ที่ 75 V เป็นเวลา 1 ชั่วโมงใน 0.5 × TBE
บัฟเฟอร์ เจลถูกย้อมด้วย ethidium bromide และมองเห็น
ภายใต้แสงยูวี (GEL หมอ 1000 transilluminator; Bio-Rad, Hercules, CA,
USA) พร้อมด้วยระบบการถ่ายภาพ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . interdelta ความหลากหลายของ S . cerevisiaeการตรวจสอบโมเลกุลของเชื้อวัฒนธรรมการเริ่มต้นเพื่อกำหนดระดับของการปกครองเหนือชาวพื้นเมือง .S . cerevisiae สายพันธุ์ในอุตสาหกรรมการหมัก ( Li et al . , 2012 ;Mercado et al . , 2011 ) , การใช้ interdelta PCR แบบ .S . cerevisiae อาณานิคมแยกแบบสุ่มจาก ypd วุ้นแผ่นและใช้เซลล์นับที่ส่วนท้ายของ fermentations อุตสาหกรรม ที่โมเลกุลเซลล์โดยวิธี PCR แบบ interdelta ลำดับมีการแยกโคลน ( 20 สำหรับแต่ละถัง ) ดีเอ็นเอคือสกัดมาจาก S . cerevisiae สายพันธุ์เลี้ยงที่ 25 ° C , 24 ชั่วโมงในypd วุ้น และ การรักษาความร้อน เซลล์ที่ใช้ โดยเฉพาะอย่างยิ่ง , ห่วงจากแต่ละกลุ่มก็จะหยุดชั่วคราวใน 5 μผมเป็นหมันน้ำกลั่นในหลอด 0.2ml PCR และร้อนถึง 95 องศา C เป็นเวลา 5 นาที กับก้าวแรกที่อุณหภูมิ 4 องศาโดยการเพิ่มจำนวนดีเอ็นเอปฏิกิริยาความร้อนวงจร ( ไบโอ ราด , Hercules , CA , USA ) กับวิธี PCR เพิ่มส่วนผสมเพื่อเหล่านี้โดยตรง unpurified ดีเอ็นเอสารแขวนลอย . interdelta ลำดับถูกขยายตามขั้นตอนที่อธิบายโดยก็อบบี้ et al .( 2013 ) โดยใช้ไพรเมอร์δ - เสนอโดย Ness et al . ( 2536 ) และเหมาะโดย legras และอารมณ์ ( 2003 ) ผลิตภัณฑ์แบบแยกกันโดยวิธีอิเล็กโทรโฟรีซีสบน 1.5 % ( w / v ) หรือเจลที่ 75 วีเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ใน 0.5 ×ทีบีบัฟเฟอร์ เจลใช้ย้อม และมองเห็นทิเดียมโบรไมด์ภายใต้แสงยูวี ( เจลหมอ 1000 transilluminator ; ไบแรด , Hercules , แคลิฟอร์เนียสหรัฐอเมริกา ) , ติดตั้งระบบถ่ายภาพ