Jatropha curcas, the energy plant has attained great attention in recent years because of its biodiesel production potential and medicinal value. This makes it imperative to search for techniques rapid propagation. In the present investigation an efficient and reproducible method for plant regeneration through
direct shoot bud induction from cotyledonary petiole explants of elite
genotypes (CSMCRI-JC1, CSMCRI-JC-2 and CSMCRI-JC-3) of J. curcas was developed. The best shoot buds induction (51.19%) and number of shoot buds (9.75) per explant was observed when in vitro petiole explants were placed horizontally on MS medium supplemented with 2.27 M TDZ after 6 weeks. The induced shoot buds were transferred to MS medium containing 10 M kinetin (Kn), 4.5 M 6-benzyl (BAP) and 5.5 M -naphthaleneacetic acid (NAA) for shoot proliferation. The proliferated shoots could be elongated on MS medium supplemented with different concentrations and for aminopurine combinations indole3-acetic acid (IAA), NAA and indole-3-butyric acid (IBA). MS medium with 2.25 M BAP and 8.5 M IAA was found to be best combination for shoot elongation and 3.01–3.61 cm elongation was achieved after 6 weeks. However, significant differences in plant regeneration and shoot elongation were observed among the genotypes studied. Orientation (horizontal or vertical)
and source (in vitro or in vivo) also significantly influenced plant regeneration. The elongated shoots could be rooted on half-strength MS medium supplemented with 0.25 mg/L activated charcoal and different concentrations and combinations of IBA, IAA and NAA. Half strength of MS medium with 5 M IBA, 5.7 M IAA and 11 M NAA was found to be best for rooting. The rooted plants could be established in soil with more than 90% of of BAP, its
explants survival rate.
1. Introduction
Tree-borne oilseeds are the best and potential alternative to mitigate the current and future energy crisis and also to transform the vast stretches of wasteland into green oil fields. The potential sources identified so far include Jatropha curcas, Pongamia pinnata, Madhuca latifolia, Azadirachta indica, Calophyllum inophyllum and Simarouba glauca. Among these J. curcas emerges as the most promising tree-borne oilseed on the basis of adaptability to wide range of edapho-climatic conditions, high oil content with the suitability of Jatropha oil as a source of biodiesel. J. curcas, a multipurpose large shrub belongs to the family Euphorbiaceae, is native to South America and widely distributed in South and coupled Central America, Africa and Asia. Biodiesel prepared from J. curcas has been sucessfully tested in both mobile and
stationary engines without modification in any of the engine parts. Now there is a surge of interest in J. curcas as a biodiesel “miracle tree” to help alleviate the energy crisis and generate income in rural areas of developing countries (Francis et al., 2005). Commercial plantations of this important crop are raised through seedlings and stem cuttings. The seed viability and rate of germination are
low, and quality seed screening another laborious task thus, propagation through seed may not provide quality planting material for sustainable use. It was also observed that huge quantities of seed is being used for raising of planting material, if any alternative propagation technique is is developed
the seed can be diverted for biodiesel preparation. Propagation can be also carried out by stem cutting but the limitation in generation of large scale
planting material is (a) availability of sufficient quantity of material and
(b) propagation is seasonal. Thus, conventional propagation through seeds is not reliable and vegetative cuttings are inadequate to meet the demand of large scale quality planting material. Therefore, J. curcas improvement programme
by modern methods of agrobiotechnology are of interest worldwide. This has increased the importance of developing tissue culture methods to facilitate large scale production of quality planting material and for the improvement of the species using genetic engineering technique. Attempts have been made to regenerate J. curcas (Sujatha and Mukta, 1996; Wei et al., 2004; Sujatha et al., 2005; Rajore and Batra, 2007; Jha et al., 2007; Kumar, 2009; Kumar and Reddy, 2010; Kumar et al., 2010a,b,c, 2011a,b) either through callus mediated regeneration or direct shoot morphogenesis. In all the above reports, the frequency of regeneration has been low and unsatisfactory. It is also reported that regeneration in J. curcas is highly genotype dependent (da Camara Machado et al., 1997; Kumar et al., 2008; Kumar and Reddy, 2010; Kumar et al., 2010a, 2011b). Keeping the economical importance of J. curcas in mind and critical analysis of earlier reports, the objective of this study was to develop an in vitro regeneration method without formation of intervening callus in J. curcas for mass propagation and genetic improvement. This study also compared the regeneration efficiency of in vitro and in vivo cotyledonary petiole explants.
2. Materials and methods
2.1. Plant material and source of explant
The seeds of elite genotypes (CSMCRI-JC-1, CSMCRI-JC-2 and CSMCRI-JC-3) of J. curcas were obtained from Central Salt & Marine Chemicals Research Institute (CSMCRI) experimental plantation on wastelands at Chorvadla, India (21◦75N, 72◦
14E) for the present study. Seedcoats were removed and then surface sterilized with 0.1% mercuric chloride (HgCl2) for 15 min and rinsed five times in sterile distilled water. The sterilized decoated seeds were germinated on growth regulators free MS liquid medium (Murashige and Skoog, 1962) with the support of filter paper boats. After 2 weeks of germination, cotyledonary petiole explants were collected from cotyledonary leaves of germinated seedlings and used as in vitro explants. For in vivo explants, seedlings were raised in the nursery and cotyledonary petiole explants were collected from cotyledonary leaves of
2-week old seedlings, and sterilized 0.1% mercuric chloride (HgCl) for 3 min and rinsed five times in sterile distilled water.
2.2. Shoot bud induction
The in vitro and in vivo cotyledonary petiole explants of all the three genotypes were cultured on MS medium supplemented with different concentrations of thidiazuron (TDZ) to find an optimum concentration of TDZ for shoot bud induction (Kumar and Reddy, 2010; Kumar et al., 2010a,b,c). Cotyledonary
petiole by explants were inoculated on medium surface in 200 mm x 38 mm culture tubes (Borosil, India) both in horizontal and vertical position. The percentage of induction of shoot bud and the number of shoot buds per explant were recorded after 6 weeks of culture.
2.3. Shoot proliferation and elongation from induced shoot buds
The induced shoot buds were transferred on MS medium supplemented
M kinetin (Kn), 4.5 M BAP and 5.5 M -naphthaleneacetic acid (NAA) for 4 weeks for shoot proliferation (Reddy et al., 2008; Kumar and Reddy, 2010; Kumar et al., 2010a,b,c). with Shoots 10 were individually separated and further
tested for their elongation on MS medium supplemented with different concentrations and combinations of BAP, indole-3-acetic acid (IAA), NAA and IBA.
The length of elongated shoots was recorded 6 weeks of culture. after
2.4. Rooting and acclimatization
Green and healthy elongated shoots with three to four leaves were excised and cultured on half strength MS medium supplemented with different concentrations and combinations of auxins, i.e. IBA (5–15 M), IAA (5.7–11.4 M) and NAA (5.5–11 M) rooting (Kumar and Reddy, 2010; Kumar et al., 2010a,b,c). The percentage of root induction per shoot was recorded after 4 weeks. Rooted shoots were carefully taken out of the medium and washed thoroughly in sterile distilled water to remove basal MS medium attached to the roots. The plants were transferred to plastic bags containing sterilized sand and soil in the ratio 1:1 and wetted with 0.02% (w/v) carbendazim and covered with transparent plastic bags to maintain humidity. After 3–4 weeks, the established plants were transferred to a greenhouse (temperature 25 + 3C and relative humidity 70–80%) for further growth and the numbers of surviving plants were recorded after an additional 6–8 weeks.
2.5. Culture conditions and data analysis
Uniform culture conditions were applied in all experiments. The pH of the medium was adjusted to 5.7 using 1 N KOH or HCl, prior to autoclaving at
1.05 kg/cm2pressure at 121C for 20 min. The cultures were maintained at 25 + 2◦C under a 16 h photoperiod with light intensity of 35–40 mol m−2s−1
(cool white fluorescent tubes).All the experiments were set up in a factorial
completely randomized design (FCRD) and repeated three times with 25 replicates per treatment, with one explant per test tube. Data were subjected to analysis of variance (ANOVA), analyzed by four factor FCRD analysis for shoot bud induction and two factor CRD analysis for shoot elongation and rooting using a BASIC software package (Anand Agricultural University, Gujarat, India) at the 5% probability level. Statistical difference among the means was analyzed by Duncan’s multiple range test using the SPSS (version 7.5). The results were expressed as mean standard error of three independent experiments.
3. Results
3.1. Effect of TDZ on shoot bud induction
The concentration of TDZ in the medium significantly influenced the response of shoot bud induction irrespective of genotype studied. The percentage of induction of shoot buds and the of induced shoot buds per explant were directly proportional to the concentrat
สบู่ curcas พืชพลังงานได้รับความสนใจมากในปีที่ผ่านมาเนื่องจากไบโอดีเซลผลิตยา และเป็นค่า นี้ช่วยให้ความจำเป็นเพื่อค้นหาเทคนิคการแพร่กระจายอย่างรวดเร็ว ในปัจจุบัน การ efficient และวิธีจำลองสำหรับพืชฟื้นฟูผ่าน เหนี่ยวนำดอกตูมยิงตรงจาก explants cotyledonary petiole ของอีลิท ศึกษาจีโนไทป์ (CSMCRI JC1, CSMCRI-เจซี-2 และ CSMCRI-เจซี-3) ของ J. curcas ได้รับการพัฒนา ดีที่สุดยิง เหนี่ยวนำอาหาร (51.19%) และจำนวนยิงอาหาร (9.75) ต่อ explant ที่สังเกตเมื่อ petiole ใน explants ถูกวางตามแนวนอนบน MS สื่อเสริม 2.27 เมตร TDZ หลังจาก 6 สัปดาห์ อาหารยิงอาจถูกโอนย้ายไป MS ขนาดกลางที่มี 10 M kinetin (ช็อปปิ้ง), M 6-benzyl (BAP) 4.5 และ 5.5 เมตร - naphthaleneacetic กรด (NAA) สำหรับการงอกยิง สามารถมี elongated ยอด proliferated ใน MS สื่อเสริม มีความเข้มข้นต่าง ๆ และกรดอะซิติก indole3 ชุดใน aminopurine (IAA), NAA และกรดอินโดล-3-butyric (อิบา) พบปานกลาง MS กับ IAA BAP และ 8.5 M M หุ้น 2.25 เป็น ชุดที่ดีที่สุดสำหรับยิง elongation และ elongation 3.01 – 3.61 ซม.สำเร็จหลังจาก 6 สัปดาห์ อย่างไรก็ตาม ความแตกต่างของ significant ในพืชฟื้นฟูและยิง elongation สุภัคระหว่างศึกษาจีโนไทป์ที่ศึกษา การวางแนว (แนวนอน หรือแนวตั้ง) แหล่งที่มา (การเพาะเลี้ยง หรือในสัตว์ทดลอง) และยัง significantly influenced พืชฟื้นฟู ถ่ายภาพอีลองเกตอาจจะรากบนกลาง MS ครึ่งแรงเสริม ด้วยถ่าน 0.25 mg/L และความเข้มข้นแตกต่างกัน และชุด ของอิบา IAA, NAA พบครึ่งแรงของ MS กลางกับอิบา M 5, IAA 5.7 M และ NAA 11 เมตรจะดีที่สุดสำหรับ rooting สามารถสร้างพืช rooted ในดินมากกว่า 90% ของ BAP ของ explants อัตราอยู่รอด1. บทนำOilseeds เชื่อว่าต้นไม้ที่ดีสุด และเป็นทางเลือก เพื่อบรรเทาวิกฤตพลังงานในปัจจุบัน และในอนาคต และแปลงใหญ่เหยียด wasteland เป็นน้ำมันสีเขียว fields Identified แหล่งศักยภาพจนรวม curcas สบู่ Pongamia pinnata, Madhuca latifolia สะเดา กระทิง และ Simarouba glauca ในหมู่เหล่านี้ J. curcas บ่งบอกเป็น oilseed เชื่อว่าต้นไม้ที่ว่าตามหลากหลายช่วงกว้างของเงื่อนไข edapho climatic น้ำมันสูงเนื้อหา มีความเหมาะสมของน้ำมันสบู่ดำเป็นแหล่งของไบโอดีเซล J. curcas พุ่มไม้ใหญ่ที่อเนกประสงค์ของครอบครัวน้ำ พื้นถิ่นของอเมริกาใต้ และกระจายอย่างกว้างขวางในเอเชียใต้ และควบคู่อเมริกากลาง แอฟริกา และเอเชีย ไบโอดีเซลที่เตรียมจาก J. curcas ได้สำเร็จในการทดสอบโทรศัพท์มือถือทั้งสอง และ เครื่องยนต์เครื่องเขียน โดย modification ในชิ้นส่วนเครื่องยนต์ ขณะนี้มีกระแสที่น่าสนใจใน J. curcas เป็นไบโอดีเซล "ต้นไม้มหัศจรรย์" เพื่อช่วยบรรเทาวิกฤตพลังงาน และสร้างรายได้ในชนบทของประเทศกำลังพัฒนา (Francis et al., 2005) ปลูกเชิงพาณิชย์ของพืชที่สำคัญนี้ขึ้นโดยใช้กล้าไม้ และเกิด cuttings เมล็ดนี้และอัตราการงอก ต่ำ และคุณภาพเมล็ดพันธุ์คัดกรองงานลำบากอีกดังนั้น การเผยแพร่ผ่านเมล็ดอาจมีการคุณภาพวัสดุปลูกสำหรับการใช้อย่างยั่งยืน มันยังถูกตรวจสอบว่า ขนาดใหญ่ปริมาณของเมล็ดถูกใช้สำหรับการก่อตัวของวัสดุปลูก ถ้าเทคนิคการเผยแพร่ทางเลือกพัฒนา เมล็ดสามารถได้รับการโอนสำหรับเตรียมสอบไบโอดีเซล เผยแพร่สามารถยังทำ โดยตัดก้านแต่ข้อจำกัดในการสร้างขนาดใหญ่ วัสดุปลูกคือ (ก) ความพร้อมของ sufficient ปริมาณวัสดุ และ (ข) เผยแพร่ได้ตามฤดูกาล ดังนั้น เผยแพร่ทั่วไปผ่านเมล็ดพืชไม่น่าเชื่อถือ และ cuttings ผักเรื้อรังจะไม่เพียงพอเพื่อตอบสนองความต้องการของคุณภาพขนาดใหญ่วัสดุปลูก ดังนั้น J. curcas ปรับปรุงหลักสูตร โดยวิธีการสมัยใหม่ของ agrobiotechnology ที่น่าสนใจทั่วโลก นี้ได้เพิ่มความสำคัญของการพัฒนาวิธีการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อเพื่อช่วยในการผลิตขนาดใหญ่ของวัสดุปลูก และ การปรับปรุงพันธุ์โดยใช้เทคนิคพันธุวิศวกรรม ได้ทำความพยายามฟื้นฟู J. curcas (Sujatha และ Mukta, 1996 Wei et al., 2004 Sujatha และ al., 2005 Rajore และ Batra, 2007 Al. Jha ร้อยเอ็ด 2007 Kumar, 2009 Kumar และเรดดี 2553 Kumar et al., 2010a, b, c, 2011a, b) อย่างใดอย่างหนึ่งให้ถึง mediated morphogenesis ยิงตรงหรือฟื้นฟู ในรายงานทั้งหมดด้านบน ความถี่ของการฟื้นฟูได้ต่ำ และเฉย ๆ แต่ก็ยังมีรายงานว่า ฟื้นฟูใน J. curcas คือ ลักษณะทางพันธุกรรมขึ้นอยู่ (Camara ดามาชาโดและ al., 1997 Al. Kumar et, 2008 Kumar และเรดดี 2553 Kumar et al., 2010a, 2011b) รักษาความสำคัญประหยัดของ J. curcas ในจิตใจและวิเคราะห์ความสำคัญของรายงานก่อนหน้า วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้ได้พัฒนาวิธีการเพาะเลี้ยงฟื้นฟูโดยไม่ก่อให้อยู่ระหว่างกลางใน J. curcas โดยรวมเผยแพร่และปรับปรุงพันธุกรรม การศึกษานี้ยังเปรียบเทียบ efficiency ฟื้นฟูของการเพาะเลี้ยง และสัตว์ทดลองใน petiole cotyledonary explants2. วัสดุและวิธีการ2.1 การปลูกวัสดุและแหล่งที่มาของ explantเมล็ดของ elite (CSMCRI-เจซี-1, CSMCRI-เจซี-2 และ CSMCRI-เจซี-3) ของ J. curcas ได้รับมาจากไร่ทดลองกลางเกลือและทางทะเลเคมีวิจัยสถาบัน (CSMCRI) บน wastelands Chorvadla อินเดีย (21◦75N, 72◦14E) สำหรับการศึกษาปัจจุบัน Seedcoats ถูกเอาออก และจากนั้น ผิว sterilized ด้วย 0.1% mercuric คลอไรด์ (HgCl2) สำหรับ 15 นาทีและเวลา rinsed five ในกอซกลั่นน้ำ เมล็ด decoated sterilized ถูกเปลือกงอกบนเร็คกูเลเตอร์ฟรี MS เหลวเชื้อ (Murashige และ Skoog, 1962) ด้วยการสนับสนุนของ filter กระดาษเรือ หลังจาก 2 สัปดาห์ของการงอก explants cotyledonary petiole ถูกรวบรวมไว้จาก cotyledonary ใบของกล้าไม้เปลือกงอก และใช้ใน explants หลอด สำหรับในสัตว์ทดลอง explants ขึ้นกล้าไม้ในเรือนเพาะชำที่ และ explants cotyledonary petiole ถูกเก็บรวบรวมจากใบไม้ cotyledonary กล้าไม้ที่ 2 เก่า - สัปดาห์ และ sterilized 0.1% mercuric คลอไรด์ (HgCl) สำหรับ 3 นาทีและเวลา rinsed five ในน้ำกลั่นที่ฆ่าเชื้อ2.2 การยิงเหนี่ยวนำดอกตูมExplants petiole cotyledonary ในหลอดทดลอง และในสัตว์ทดลองทั้งหมดศึกษาจีโนไทป์สามมีอ่างบน MS สื่อเสริม ด้วยความเข้มข้นแตกต่างกันของ thidiazuron (TDZ) เพื่อ find ที่ความเข้มข้นสูงสุดของ TDZ สำหรับยิงเหนี่ยวนำดอกตูม (Kumar และ Reddy, 2010 Kumar et al., 2010a, b, c) Cotyledonary โดย explants petiole มี inoculated บนพื้นผิวขนาด 200 มม. x 38 มม.วัฒนธรรมหลอด (Borosil อินเดีย) ทั้งในแนวตั้ง และแนวนอนตำแหน่งใน เปอร์เซ็นต์ของการยิงดอกตูมและจำนวนอาหารยิงต่อ explant ถูกบันทึกหลังจาก 6 สัปดาห์ของวัฒนธรรม2.3 การขยายและ elongation จากอาหารอาจยิงยิงThe induced shoot buds were transferred on MS medium supplemented M kinetin (Kn), 4.5 M BAP and 5.5 M -naphthaleneacetic acid (NAA) for 4 weeks for shoot proliferation (Reddy et al., 2008; Kumar and Reddy, 2010; Kumar et al., 2010a,b,c). with Shoots 10 were individually separated and further tested for their elongation on MS medium supplemented with different concentrations and combinations of BAP, indole-3-acetic acid (IAA), NAA and IBA. The length of elongated shoots was recorded 6 weeks of culture. after2.4. Rooting and acclimatizationGreen and healthy elongated shoots with three to four leaves were excised and cultured on half strength MS medium supplemented with different concentrations and combinations of auxins, i.e. IBA (5–15 M), IAA (5.7–11.4 M) and NAA (5.5–11 M) rooting (Kumar and Reddy, 2010; Kumar et al., 2010a,b,c). The percentage of root induction per shoot was recorded after 4 weeks. Rooted shoots were carefully taken out of the medium and washed thoroughly in sterile distilled water to remove basal MS medium attached to the roots. The plants were transferred to plastic bags containing sterilized sand and soil in the ratio 1:1 and wetted with 0.02% (w/v) carbendazim and covered with transparent plastic bags to maintain humidity. After 3–4 weeks, the established plants were transferred to a greenhouse (temperature 25 + 3C and relative humidity 70–80%) for further growth and the numbers of surviving plants were recorded after an additional 6–8 weeks.2.5. Culture conditions and data analysisUniform culture conditions were applied in all experiments. The pH of the medium was adjusted to 5.7 using 1 N KOH or HCl, prior to autoclaving at 1.05 kg/cm2pressure at 121C for 20 min. The cultures were maintained at 25 + 2◦C under a 16 h photoperiod with light intensity of 35–40 mol m−2s−1(cool white fluorescent tubes).All the experiments were set up in a factorial completely randomized design (FCRD) and repeated three times with 25 replicates per treatment, with one explant per test tube. Data were subjected to analysis of variance (ANOVA), analyzed by four factor FCRD analysis for shoot bud induction and two factor CRD analysis for shoot elongation and rooting using a BASIC software package (Anand Agricultural University, Gujarat, India) at the 5% probability level. Statistical difference among the means was analyzed by Duncan’s multiple range test using the SPSS (version 7.5). The results were expressed as mean standard error of three independent experiments.3. Results3.1. Effect of TDZ on shoot bud inductionThe concentration of TDZ in the medium significantly influenced the response of shoot bud induction irrespective of genotype studied. The percentage of induction of shoot buds and the of induced shoot buds per explant were directly proportional to the concentrat
การแปล กรุณารอสักครู่..
สบู่ดำพืชพลังงานที่ได้บรรลุความสนใจอย่างมากในปีที่ผ่านมาเนื่องจากการผลิตไบโอดีเซลที่มีศักยภาพและความคุ้มค่าของยา นี้ทำให้ความจำเป็นในการค้นหาเทคนิคการขยายพันธุ์อย่างรวดเร็ว ในการตรวจสอบนำเสนอเพียงพอ EF fi
และวิธีการเลียนแบบสำหรับการฟื้นฟูโรงงานที่ผ่านการยิงเหนี่ยวนำตาโดยตรงจากcotyledonary
ก้านใบชิ้นส่วนของชนชั้นจีโนไทป์(CSMCRI-JC1, CSMCRI-JC-2 และ CSMCRI-JC-3) ของเจดำได้รับการพัฒนา ยิงเหนี่ยวนำตาที่ดีที่สุด (51.19%) และจำนวนของตายิง (9.75) ต่อชิ้นพบว่าเมื่ออยู่ในชิ้นส่วนก้านใบหลอดทดลองถูกวางไว้ในแนวนอนบน MS เสริมขนาดกลางที่มี TDZ 2.27 M หลังจาก 6 สัปดาห์ เหนี่ยวนำตายิงถูกย้ายไปสูตร MS ที่มี 10 M kinetin (Kn) 4.5 M 6 เบนซิล (BAP) และ 5.5 ล้าน -naphthaleneacetic กรด (NAA) สำหรับการขยายยิง หน่อแพร่กระจายอาจจะยืดออกบนอาหารสูตร MS เสริมที่มีความเข้มข้นแตกต่างกันและการรวม aminopurine indole3-กรดอะซิติก (IAA) NAA และกรดอินโดล-3-butyric (IBA) สูตร MS ที่มี 2.25 M BAP และ 8.5 M IAA พบว่าเป็นชุดที่ดีที่สุดสำหรับการยืดตัวยิงและการยืดตัว 3.01-3.61 ซม. ก็ประสบความสำเร็จหลังจาก 6 สัปดาห์ แต่ความแตกต่างที่มีนัยสำคัญลาดเทไฟในการฟื้นฟูโรงงานและการยืดตัวยิงถูกตั้งข้อสังเกตในกลุ่มยีนที่ศึกษา ปฐมนิเทศ (แนวนอนหรือแนวตั้ง)
และแหล่งที่มา (ในหลอดทดลองหรือในร่างกาย) นอกจากนี้ยังมีนัยสำคัญอย่างมีนัยในชั้นการฟื้นฟูโรงงาน uenced หน่อยาวอาจจะหยั่งรากลึกในครึ่งแรงสูตร MS เสริมด้วย 0.25 มิลลิกรัม / ลิตรผงถ่านและความเข้มข้นแตกต่างกันและการรวมกันของ IBA, IAA และ NAA ความแข็งแรงครึ่งหนึ่งของสูตร MS 5 M IBA 5.7 M IAA และ 11 M NAA พบว่าเป็นสิ่งที่ดีที่สุดสำหรับการขจัด ที่ฝังรากพืชจะได้รับการก่อตั้งขึ้นในดินที่มีมากกว่า 90% ของของ BAP,
ของอัตราการรอดตายชิ้น.
1 บทนำเมล็ดพืชน้ำมันที่เกิดจากต้นไม้เป็นทางเลือกที่ดีที่สุดและมีศักยภาพในการบรรเทาวิกฤตพลังงานในปัจจุบันและอนาคตและยังเปลี่ยนเหยียดใหญ่ของดินแดนเข้ามาใน elds สายน้ำมันสีเขียว
แหล่งที่มาที่มีศักยภาพเอ็ดระบุสายเพื่อให้ห่างไกลรวมถึงสบู่ดำ, Pongamia pinnata, Madhuca latifolia, สะเดา, Calophyllum inophyllum และ Simarouba glauca กลุ่มคนเหล่านี้เจดำโผล่ออกมาเป็นน้ำมันที่เกิดจากต้นไม้ที่มีแนวโน้มมากที่สุดบนพื้นฐานของการปรับตัวเพื่อความหลากหลายของสภาพภูมิอากาศ edapho ปริมาณน้ำมันสูงที่มีความเหมาะสมของน้ำมันสบู่ดำเป็นแหล่งของการผลิตไบโอดีเซลที่ เจดำเป็นไม้พุ่มขนาดใหญ่อเนกประสงค์เป็นของครอบครัว Euphorbiaceae ที่มีถิ่นกำเนิดในอเมริกาใต้และกระจายอย่างกว้างขวางในภาคใต้และควบคู่อเมริกากลางแอฟริกาและเอเชีย ไบโอดีเซลที่ทำจากเจดำได้รับการทดสอบสำเร็จทั้งในมือถือและเครื่องมือนิ่งโดยไม่ต้องไอออนบวก Modi ไฟในใด ๆ ของชิ้นส่วนเครื่องยนต์
ขณะนี้มีการหลั่งไหลของความสนใจในเจดำเป็นไบโอดีเซล "มิราเคิต้นไม้" เพื่อช่วยบรรเทาวิกฤตพลังงานและสร้างรายได้ในพื้นที่ชนบทของประเทศกำลังพัฒนา (ฟรานซิส et al., 2005) พื้นที่เพาะปลูกในเชิงพาณิชย์ของการเพาะปลูกที่สำคัญนี้จะยกผ่านต้นกล้าและการตัดลำต้น
ความมีชีวิตของเมล็ดพันธุ์และอัตราการงอกอยู่ที่ต่ำและการตรวจคัดกรองเมล็ดพันธุ์ที่มีคุณภาพอีกงานที่ลำบากดังนั้นการขยายพันธุ์เมล็ดผ่านไม่อาจให้วัสดุปลูกที่มีคุณภาพสำหรับใช้ประโยชน์อย่างยั่งยืน มันก็ยังตั้งข้อสังเกตว่าปริมาณขนาดใหญ่ของเมล็ดจะถูกใช้สำหรับยกวัสดุปลูกถ้าเทคนิคการขยายพันธุ์ใด ๆ
ที่เป็นทางเลือกที่ได้รับการพัฒนาเมล็ดพันธุ์ที่สามารถหันเหความสนใจในการจัดทำไบโอดีเซล การขยายพันธุ์สามารถดำเนินการยังออกโดยตัดลำต้น แต่มีข้อ จำกัดในการสร้างขนาดใหญ่วัสดุปลูกคือ (ก) ความพร้อมของปริมาณที่พอเพียงเพียงพอไฟของวัสดุและ (ข) การขยายพันธุ์ตามฤดูกาล ดังนั้นการขยายพันธุ์เมล็ดธรรมดาผ่านไม่น่าเชื่อถือและตัดพืชมีไม่เพียงพอที่จะตอบสนองความต้องการของวัสดุปลูกที่มีคุณภาพขนาดใหญ่ ดังนั้นเจ curcas โครงการปรับปรุงโดยวิธีการที่ทันสมัยของagrobiotechnology เป็นที่สนใจของทั่วโลก นี้ได้เพิ่มความสำคัญของการพัฒนาวิธีการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อเพื่ออำนวยความสะดวกการผลิตขนาดใหญ่ของวัสดุปลูกที่มีคุณภาพและการปรับปรุงสายพันธุ์โดยใช้เทคนิคทางพันธุวิศวกรรม พยายามที่จะทำให้การงอกใหม่ดำเจ (Sujatha และ Mukta 1996; Wei et al, 2004;. Sujatha et al, 2005;. Rajore และ Batra, 2007; Jha et al, 2007;. มาร์ 2009; มาร์และเรดดี้ 2010. มาร์, et al, 2010a, B, C, 2011a, b) การฟื้นฟูทั้งผ่านสื่อกลางแคลลัสหรือ morphogenesis ยิงโดยตรง ในรายงานทั้งหมดข้างต้นความถี่ของการฟื้นฟูที่ได้รับต่ำและเป็นที่น่าพอใจ นอกจากนี้ยังมีรายงานว่าในการฟื้นฟูเจดำเป็นอย่างสูงที่ขึ้นอยู่กับจีโนไทป์ (ราดา Machado, et al, 1997;. Kumar et al, 2008;. มาร์และเรดดี้, 2010. มาร์, et al, 2010a, 2011b) การรักษาความสำคัญทางเศรษฐกิจของเจดำในใจและการวิเคราะห์ที่สำคัญของรายงานก่อนหน้านี้มีวัตถุประสงค์เพื่อพัฒนาวิธีการฟื้นฟูในหลอดทดลองโดยไม่แทรกแซงการก่อตัวของแคลลัสในเจดำสำหรับการขยายพันธุ์มวลและการปรับปรุงทางพันธุกรรม การศึกษาครั้งนี้ยังเปรียบเทียบประสิทธิภาพการฟื้นฟูของสายในหลอดทดลองและในร่างกาย cotyledonary ก้านใบชิ้น. 2 วัสดุและวิธีการ2.1 วัสดุปลูกและแหล่งที่มาของชิ้นส่วนเมล็ดของยีนที่ยอดเยี่ยม (CSMCRI-JC-1, CSMCRI-JC-2 และ CSMCRI-JC-3) ของเจดำที่ได้รับจากกลางทะเลเกลือและสารเคมี Research Institute (CSMCRI) ไร่ทดลอง ดินแดนรกร้างที่ Chorvadla, อินเดีย (21◦75N, 72◦ 14E) สำหรับการศึกษาปัจจุบัน Seedcoats ถูกถอดออกแล้วผิวฆ่าเชื้อด้วยคลอไรด์ 0.1% ปรอท (HgCl2) เป็นเวลา 15 นาทีและล้างไฟได้ครั้งในน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อ เมล็ด decoated ฆ่าเชื้อถูกงอกบนควบคุมการเจริญเติบโตฟรีอาหารเหลว MS (Murashige และ Skoog, 1962) ด้วยการสนับสนุนของสายเรือกระดาษกรอง หลังจาก 2 สัปดาห์ของการงอกชิ้นก้านใบ cotyledonary ถูกเก็บรวบรวมจากใบของต้นกล้า cotyledonary งอกและนำมาใช้เป็นชิ้นส่วนในหลอดทดลอง หาชิ้นส่วนร่างกายต้นกล้าถูกยกขึ้นในเรือนเพาะชำและชิ้นส่วนก้านใบ cotyledonary ถูกเก็บรวบรวมจากใบ cotyledonary ของ2 สัปดาห์ต้นกล้าเก่าและผ่านการฆ่าเชื้อ 0.1% ปรอท (HgCl) เป็นเวลา 3 นาทีและล้างไฟได้ครั้งในน้ำกลั่นปลอดเชื้อ. 2.2 ยิงเหนี่ยวนำตาในหลอดทดลองและในร่างกาย cotyledonary ก้านใบชิ้นส่วนของทั้งสามสายพันธุ์มาเลี้ยงบน MS เสริมขนาดกลางที่มีความเข้มข้นแตกต่างกันของ thidiazuron (TDZ) เพื่อ fi ครั้งที่ความเข้มข้นที่เหมาะสมของ TDZ สำหรับการถ่ายเหนี่ยวนำตา (มาร์และเรดดี้ 2010 มาร์ et al., 2010a, B, C) cotyledonary ก้านใบโดยชิ้นถูกเชื้อบนพื้นผิวขนาดกลางใน 200 mm x 38 มมหลอดวัฒนธรรม (Borosil, อินเดีย) ทั้งในตำแหน่งแนวนอนและแนว ร้อยละของการเหนี่ยวนำของตายิงและจำนวนของตายิงต่อชิ้นถูกบันทึกไว้หลังจาก 6 สัปดาห์ของวัฒนธรรม. 2.3 การแพร่กระจายและการยืดตัวยิงจากตายิงเหนี่ยวนำให้เกิดชักนำตายิงถูกย้ายใน MS เสริมกลาง M kinetin (Kn) 4.5 M BAP และ 5.5 ล้านกรด -naphthaleneacetic (NAA) เป็นเวลา 4 สัปดาห์สำหรับการขยายยิง (เรดดี้ et al, 2008. มาร์และเรดดี้, 2010. มาร์, et al, 2010a, B, C) กับข้าวกล้า 10 ถูกแยกออกเป็นรายบุคคลและต่อไปการทดสอบการยืดตัวของพวกเขาในMS เสริมขนาดกลางที่มีความเข้มข้นแตกต่างกันและการรวมกันของ BAP, indole-3-กรดอะซิติก (IAA) NAA และ IBA. ความยาวของหน่อยาวได้รับการบันทึก 6 สัปดาห์ของวัฒนธรรม หลังจากที่2.4 รากและเคยชินกับสภาพใบยาวสีเขียวและมีสุขภาพดีด้วย 3-4 ใบถูกตัดและเพาะเลี้ยงที่กำลังมาแรงในช่วงครึ่งสูตร MS เสริมที่มีความเข้มข้นแตกต่างกันและการรวมกันของ auxins คือ IBA (5-15 M), IAA (5.7-11.4 M) และ NAA ( 5.5-11 M) การขจัด (มาร์และเรดดี้, 2010. มาร์, et al, 2010a, B, C) ร้อยละของการเหนี่ยวนำรากต่อการถ่ายภาพที่ถูกบันทึกไว้หลังจาก 4 สัปดาห์ที่ผ่านมา หน่อรากอย่างรอบคอบถูกนำออกมาจากกลางและล้างให้สะอาดในน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อที่จะเอาสูตร MS ฐานที่แนบมากับราก พืชที่ถูกย้ายไปถุงพลาสติกที่มีหาดทรายที่ผ่านการฆ่าเชื้อและดินในอัตราส่วน 1: 1 และเปียกด้วย 0.02% (w / v) carbendazim และปกคลุมด้วยถุงพลาสติกใสเพื่อรักษาความชื้น หลังจาก 3-4 สัปดาห์, พืชจัดตั้งถูกย้ายไปเรือนกระจก (อุณหภูมิ 25 + 3C และความชื้นสัมพัทธ์ 70-80%) สำหรับการเจริญเติบโตและตัวเลขของพืชที่รอดตายได้ถูกบันทึกไว้หลังจากที่เพิ่มขึ้น 6-8 สัปดาห์. 2.5 เงื่อนไขวัฒนธรรมและการวิเคราะห์ข้อมูลสภาพวัฒนธรรมเครื่องแบบถูกนำไปใช้ในการทดลองทั้งหมด เป็นกรดเป็นด่างของสื่อที่ได้รับการปรับเปลี่ยนให้ใช้ 5.7 1 N HCl เกาะหรือก่อนที่จะนึ่งฆ่าเชื้อที่1.05 กก. / cm2pressure ที่ 121C เป็นเวลา 20 นาที วัฒนธรรมที่ถูกเก็บรักษาไว้ที่ 25 + 2◦Cภายใต้แสง 16 ชั่วโมงที่มีความเข้มของแสง 35-40 โมเลกุลของ m-2s-1 (เย็นหลอด uorescent ชั้นสีขาว) โดยง่ายการทดลองถูกตั้งขึ้นในปัจจัยแบบสุ่มสมบูรณ์(FCRD) และทำซ้ำสามครั้งมี 25 ซ้ำต่อการรักษาด้วยชิ้นต่อหลอดทดลอง ข้อมูลถูกยัดเยียดให้การวิเคราะห์ความแปรปรวน (ANOVA) วิเคราะห์โดยสี่ปัจจัยวิเคราะห์ FCRD สำหรับการถ่ายเหนี่ยวนำตาและสองการวิเคราะห์ CRD ปัจจัยสำหรับการยืดตัวยิงและรากใช้แพคเกจซอฟต์แวร์พื้นฐาน (อานันท์มหาวิทยาลัยเกษตรรัฐคุชราตประเทศอินเดีย) ที่น่าจะเป็น 5% ชั้น ความแตกต่างทางสถิติในหมู่หมายถึงการได้รับการวิเคราะห์โดยช่วงหลายดันแคนทดสอบโดยใช้โปรแกรม SPSS (เวอร์ชั่น 7.5) ผลการวิจัยแสดงเป็นหมายถึงข้อผิดพลาดมาตรฐานสามทดลองที่เป็นอิสระ. 3 ผล3.1 ผลของ TDZ ในการถ่ายเหนี่ยวนำตาความเข้มข้นของTDZ ในมีนัยสำคัญขนาดกลางอย่างมีนัยในชั้น uenced ตอบสนองของการถ่ายเหนี่ยวนำตาโดยไม่คำนึงถึงจีโนไทป์ศึกษา ร้อยละของการเหนี่ยวนำของตายิงและเหนี่ยวนำให้เกิดของตายิงต่อชิ้นเป็นสัดส่วนโดยตรงกับ concentrat
การแปล กรุณารอสักครู่..