Bacterial DNA isolation: A loopful

Bacterial DNA isolation: A loopful of bacterial mass taken from an isolated clone on
LB-agar plate was inoculated into 3 ml of Luria Broth (LB) and allowed to grow for 48 h
at 2871 1C on an orbital shaker (150 rpm). The bacterial cell mass was harvested in
pellet by centrifugation at 10,000 rpm for 1 min. The cell mass was lyzed by
suspending in 10 mM Tris EDTA buffer (TE) containing 20 mg ml−1 lysozyme, followed
by incubation at RT for 10 min. The cellular proteins in the lysate were removed by
three extractions with phenol:chloroform (1:1 v/v) followed by chloroform:isoamyl
alcohol (25:1 v/v). The total DNA in the aqueous phase was precipitated with equal
volume of isopropanol in the presence of 0.25 M sodium acetate, pH 5.2. The bacterial
DNA was collected in pellet by centrifugation at 10,000 rpm, for 5 min. The DNA pellet
was washed once with 70% ethanol and allowed to dry at RT. The Dried DNA pellet was
dissolved in 100 μl of TE buffer and stored at −20 1C until used. The quality of DNA
isolated from bacteria was determined by horizontal agarose 0.7 per cent containing
ethidium bromide @1 mg per ml gel electrophoresis in 1
TAE (Tris Acetate EDTA)
buffer at 75 V for 1 h. The DNA bands were visualized and photographed under a UV
transilluminator in ‘UltraCam Gel documentation system’.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การแยกดีเอ็นเอแบคทีเรีย: loopful
มวลแบคทีเรียที่นำมาจากโคลนที่แยกบนจานอาหารเลี้ยงเชื้อLB-ได้รับเชื้อเป็น 3 มิลลิลิตร Luria น้ำซุป (LB) และได้รับอนุญาตที่จะเติบโตเป็นเวลา 48
ชั่วโมงที่1C 2871 บนเครื่องปั่นโคจร (150 รอบต่อนาที) มวลเซลล์ของแบคทีเรียได้เก็บเกี่ยวในเม็ดโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 1 นาที
มวลเซลล์ lyzed
โดยระงับใน10 มิลลิ Tris บัฟเฟอร์ EDTA (TE) ที่มี 20 mg ml-1
ไลโซไซม์ตามโดยการบ่มที่RT เป็นเวลา 10 นาที โปรตีนโทรศัพท์มือถือใน lysate
ถูกถอดออกจากสามด้วยการสกัดสารฟีนอล: คลอโรฟอร์ม (1: 1 v / v) ตามด้วยคลอโรฟอร์ม: isoamyl
เครื่องดื่มแอลกอฮอล์ (25: 1 v / v) ดีเอ็นเอรวมในเฟสน้ำได้รับการตกตะกอนด้วยเท่ากับปริมาณของ isopropanol ในการปรากฏตัวของ 0.25 M acetate โซเดียมค่า pH 5.2
แบคทีเรียดีเอ็นเอมีการรวบรวมเม็ดโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาที
เม็ดดีเอ็นเอถูกล้างครั้งเดียวกับเอทานอล 70% และได้รับอนุญาตให้แห้งที่ RT
เม็ดดีเอ็นเอแห้งถูกกลืนหายไปใน 100 ไมโครลิตรของ buffer TE และเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20 1C จนกว่าจะใช้
คุณภาพของดีเอ็นเอที่แยกได้จากแบคทีเรียที่ถูกกำหนดโดย agarose แนวนอนร้อยละ 0.7 ที่มีโบรไมด์ethidium @ 1 มิลลิกรัมต่อข่าวคราวมล. 1? TAE (ทริส Acetate EDTA) บัฟเฟอร์ที่ 75 V เป็นเวลา 1 ชั่วโมง วงดนตรีที่ดีเอ็นเอถูกมองเห็นและถ่ายภาพภายใต้แสงยูวีtransilluminator ใน 'UltraCam ระบบเอกสารเจล'

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แยกดีเอ็นเอของแบคทีเรียแบคทีเรีย : loopful มวลนํามาจากแยกโคลนบน
lb agar plate เป็นเชื้อ 3 มล. ของลุเรีย broth ( ปอนด์ ) และได้รับอนุญาตให้เติบโต 48 H
ที่ 2871 1C ในเครื่องปั่นโคจร ( 150 รอบต่อนาที ) มวลเซลล์แบคทีเรียเก็บเกี่ยวใน
เม็ดโดยการเหวี่ยงแยกที่ 10 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 1 นาที มวลเซลล์ถูก lyzed
โดยระงับใน 10 มม. ซึ่ง EDTA บัฟเฟอร์ ( TE ) ที่มี 20 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร− 1 ไลโซไซม์ตาม
โดยการบ่มที่ RT 10 นาทีโปรตีนของเซลล์ใน lysate ถูกลบออกโดย
3 การสกัดด้วย phenol : คลอโรฟอร์ม ( 1 : 1 v / v ) ตามด้วยคลอโรฟอร์มในปริมาณแอลกอฮอล์ :
( 25 : 1 v / v ) ดีเอ็นเอทั้งหมดในเฟสน้ำมาตกตะกอนด้วยปริมาณเท่ากับ
ของไอโซโพรพานอลในการปรากฏตัวของ 0.25 M โซเดียมอะซีเตทpH 5.2 . ดีเอ็นเอแบคทีเรีย
รวบรวมในเม็ดโดยการเหวี่ยงแยกที่ 10 , 000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 5 นาที ดีเอ็นเอเม็ด
ซักครั้งกับ 70% เอทานอล และได้รับอนุญาตให้แห้ง เมื่อแห้งดี RT . การผลิต
ละลาย 100 μ l TE บัฟเฟอร์ และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 20 − c จนใช้ คุณภาพของดีเอ็นเอที่แยกได้จากแบคทีเรียที่ถูกกำหนดด้วย

( 0.7 เปอร์เซ็นต์บรรจุแนวนอนทิเดียมโบรไมด์ @ 1 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร gel electrophoresis ใน 1
แท ( จากอะซิเตทบัฟเฟอร์ที่ 75 ( EDTA )
1 H , แถบดีเอ็นเอถูกมองเห็นและถ่ายภาพภายใต้แสงยูวี
transilluminator ' ultracam เจลเอกสารระบบ '