Glutamine (Gln) is an essential nut

Glutamine (Gln) is an essential nutrient for cells but in culture media it decomposes progressively into 5-pyrrolidone carboxylic acid and ammonia. Ammonia is toxic and reduces cell growth. The formation of ammonia is strongly decreased by using the dipeptide L-alanyl-L-glutamine (LAla-L-Gln), which is stable in the culture media. However, the effects of L-Ala-L-Gln, due to the amount of ammonia originating from cellular metabolism, are not known. In this regard, we studied the evolution of ammonia concentration in the culture medium of cells grown in the presence of either Gln or L-Ala-L-Gln.
BV-2, a murine microglial cell line, was chosen as a model (Bocchini et al., 1992). The BV-2 cells were routinely grown at semi-confluence using Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM)-4 mM Gln (Life Technologies, ref. 041-01880)
buffered with 24 mM sodium bicarbonate and containing heat-inactivated 5% fetal calf serum (FCS). Cell cultures were maintained in 95% air/5% CO2 atmosphere at 37°C. Before complete replacement of the DMEM-4 mM Gln by DMEM-4 mM L-Ala-L-Gln, the cells required an adaptation period of 48 h in a mixed medium containing both media (v/v 1:1). Apparently, this period is necessary for the induction of a peptidase which can catabolize L-Ala-L-Gln or increase the activity of such pre-existing enzyme. For experiments, cells were plated into six-well cell culture clusters at initial density of 2×105 cells per well. Various media and supplements for cell growth were tested, namely DMEM containinglgl−1 glucose and supplemented either with 4 mM Gln or concentrations of L-Ala-L-Gln (UltraGlutamine I, Biowhittaker, ref. M04.684.E) ranging from 0.25 to 2 mM. Commercial, ready-to-use, DMEM containing 4 mM L-AlaL-Gln (Glutamax-I, Life Technologies, ref. 043-3530H) was also used. In some experiments, Ultroser G (Life Technologies, ref. 09125950H) was used at 1% concentration which is corresponding to 5% FCS. The light-microscopic morphology of BV-2 cells grown in all tested media was very similar. Ammonia levels were determined as described previously (Atanassov et al., 1994). As presented in Table 1, ammonia originating from cellular metabolism (i.e. ‘metabolic ammonia’) was quantified by subtracting the ammonia values of the cell-free medium from those of the respective cell culture medium. Metabolic ammonia was systematically correlated to DNA content, a criterion of cell growth. DNA content was quantified fluorimetrically (Lelong et al., 1992).
Table 1 shows that in cell-free media ammonia
was :0.53 mM in the DMEM-4 mM Gln. In contrast, ammonia in the DMEM-4 mM L-Ala-LGln was below the detection limit. Following incubation for 48 h at 37°C, the ammonia levels rose in all media. In DMEM-Gln, the ammonia content was 66% higher than that measured in the same medium at day 0. The addition of either undialyzed or dialyzed FCS or Ultroser G accounted for elevation in the ammonia level by100–110%. In the media with L-Ala-L-Gln and serum supplements, the net ammonia values were much lower and represented about one third of the respective values of the media with Gln and serum supplements. Ammonia levels were higher in cell culture media with Gln than in those with L-Ala-LGln. However, the values of metabolic ammonia were very similar for both Gln- and L-Ala-L-Glncontaining media and this was irrespective of the presence of any cell growth supplements. Moreover, metabolic ammonia was 23% higher in DMEM-L-Ala-L-Gln+5% FCS than metabolic ammonia in DMEM-Gln+5% FCS and the respective ratios of metabolic ammonia/DNA reflected the same tendency (i.e. 0.046 vs 0.029). In summary, the most conspicuous finding in the experiments presented in Table 1 was that metabolic ammonia is produced at equal and even higher amounts in 4 mM L-Ala-L-Gln- than in 4 mM Gln-containing media and this was irrespective of cell growth supplements such as undialyzed or dialyzed FCS or Ultroser G. We assumed, therefore, that less dipeptide in the culture medium should account for less metabolic ammonia and eventually, a better cell growth. For this purpose, we cultured cells for periods extending up to 96 h in DMEM containing 0.25–2 mM L-Ala-L-Gln. Effectively, Fig. 1B shows that a better growth takes place but this is restricted to certain low concentrations of the dipeptide (0.25–0.50 mM) and to the culture period between 48 and 96 h. In
contrast, in 48 h cell cultures, the BV-2 cells grew slightly better with 4 mM Gln than with L-Ala-LGln (Fig. 1B), even though the respective levels of metabolic ammonia at 4 mM Gln were higher than those at 0.25–0.50 mM L-Ala-L-Gln (Fig. 1A). In this regard, our data demonstrate that using the dipeptide becomes advantageous in the later phases (i.e. 48–96 h) of the BV-2 cell cultures. Fig. 1C shows that the ratios of metabolic ammonia/DNA exhibit the same profile of dose-response dependence as presented on Fig. 1A. This indicates that the BV-2 cells are relatively poorly sensitive to
ammonia. When take

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กลูตา (Gln) เป็นสารอาหารจำเป็นสำหรับเซลล์ แต่ในสื่อวัฒนธรรม มันสลายตัวไปเรื่อย ๆ 5-pyrrolidone carboxylic กรดและแอมโมเนีย แอมโมเนียที่เป็นพิษ และลดการเติบโตของเซลล์ การก่อตัวของแอมโมเนียจะลดลง โดยใช้ dipeptide L-ใน-L-กลูตา (ลาลา-L-Gln), ซึ่งมีความเสถียรในสื่อวัฒนธรรมอย่างยิ่ง อย่างไรก็ตาม ผลของ L-Ala-L-Gln เนื่องจากปริมาณของแอมโมเนียที่เกิดจากการเผาผลาญเซลลูลาร์ ทราบ ในเรื่องนี้ เราสามารถศึกษาวิวัฒนาการของความเข้มข้นแอมโมเนียในสื่อวัฒนธรรมของเซลล์ที่เติบโตใน Gln หรือ L Ala L GlnBV-2 สายเซลล์ murine microglial เลือกเป็นรูปแบบ (Bocchini et al. 1992) BV-2 เซลล์ที่ปลูกเป็นประจำที่บรรจบกึ่ง ใช้ Dulbecco ของแก้ไขของนกอินทรีขนาดกลาง (DMEM)-4 มม. Gln (ชีวิตเทคโนโลยี รหัส 041 01880)บัฟเฟอร์ไบคาร์บอเนตโซเดียม 24 มม.และมีความร้อนยก 5% ทารกวัวซีรั่ม (FCS) วัฒนธรรมเซลล์ถูกเก็บรักษาไว้ในบรรยากาศ CO2 air/5% 95% ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส ก่อนเปลี่ยนสมบูรณ์ DMEM-4 มม. Gln DMEM-4 มม. L Ala L Gln เซลล์จำเป็นต้องปรับตัวเป็นระยะเวลา 48 ชั่วโมงในสื่อผสมที่ประกอบด้วยทั้งสื่อ (v/v 1:1) เห็นได้ชัด ช่วงเวลานี้เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการเหนี่ยวนำ peptidase ที่สามารถ catabolize L Ala L Gln หรือเพิ่มกิจกรรมของเอนไซม์ดังกล่าวที่มีอยู่ก่อน สำหรับการทดลอง เซลล์ถูกชุบลงในกลุ่มวัฒนธรรมเซลล์หกดีที่ความหนาแน่นเริ่มต้นของ 2 × 105 เซลล์ต่อ สื่อต่าง ๆ และอาหารเสริมสำหรับการเติบโตของเซลล์คือกลูโคส containinglgl−1 DMEM ทดสอบ และเสริม ด้วย 4 มม. Gln หรือความเข้มข้นของ L Ala L Gln (UltraGlutamine I, Biowhittaker รหัส M04.684.E) ตั้งแต่ 0.25 ถึง 2 มม. พาณิชย์ พร้อม ใช้ DMEM ที่ประกอบด้วย 4 มม. L AlaL Gln (Glutamax-I ชีวิตเทคโนโลยี รหัส 043-3530H) ยังใช้ ในการทดลองบางอย่าง Ultroser G (ชีวิตเทคโนโลยี รหัส 09125950H) ใช้ที่ความเข้มข้น 1% ซึ่งสอดคล้องกับ FCS 5% สัณฐานวิทยาด้วยกล้องจุลทรรศน์แสงของ BV-2 เซลล์ที่เติบโตในทุกสื่อที่ผ่านการทดสอบก็คล้ายกันมาก กำหนดระดับแอมโมเนียตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Atanassov et al. 1994) ตามที่แสดงในตารางที่ 1 แอมโมเนียที่เกิดจากการเผาผลาญของเซลล์ (เช่น 'เผาผลาญแอมโมเนีย') ถูกวัด ด้วยการลบค่าแอมโมเนียของกลางเซลล์ฟรีจากสื่อวัฒนธรรมเซลล์ตามลำดับ เผาผลาญแอมโมเนียคือระบบความสัมพันธ์เนื้อหาดีเอ็นเอ เกณฑ์การเจริญเติบโตของเซลล์ เนื้อหาดีเอ็นเอเป็น fluorimetrically เชิงปริมาณ (Lelong et al. 1992)ตารางที่ 1 แสดงให้เห็นว่าในสื่อฟรีเซลล์แอมโมเนียแก้ไข: DMEM-4 มิลลิเมตร Gln 0.53 มม. ตรงกันข้าม แอมโมเนียในมม. DMEM-4 L-Ala-LGln เป็นขีดจำกัดการตรวจสอบ กกไข่ต่อไปนี้สำหรับ 48 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37° C ระดับแอมโมเนียกุหลาบในทุกสื่อ ใน DMEM-Gln เนื้อหาแอมโมเนียเป็น 66% สูงกว่าที่วัดในสื่อเดียวกันวัน 0 การเพิ่มของ FCS undialyzed หรือ dialyzed หรือ Ultroser G คิดการยกระดับสิทธิ์ในแอมโมเนียระดับ by100 – 110% ในสื่อกับผลิตภัณฑ์เสริมอาหาร L Ala L Gln และเซรั่ม ค่าแอมโมเนียสุทธิต่ำกว่ามาก และแสดงประมาณหนึ่งในสามของค่านั้น ๆ ของสื่อกับ Gln และเซรั่มผลิตภัณฑ์เสริมอาหาร ระดับแอมโมเนียสูงขึ้นในเซลล์วัฒนธรรมสื่อกับ Gln มากกว่าในผู้ที่มี L-Ala-LGln อย่างไรก็ตาม ค่าของแอมโมเนียที่เผาผลาญได้คล้ายกันมากทั้งสื่อ Gln - และ L-Ala-L-Glncontaining และนี้คือไม่คำนึงถึงสถานะของผลิตภัณฑ์เสริมอาหารใด ๆ เจริญเติบโตของเซลล์ นอกจากนี้ แอมโมเนียเผาผลาญได้มากกว่าใน DMEM-L-Ala-L-Gln + 5% FCS เผาผลาญแอมโมเนียใน DMEM Gln + 5% FCS 23% และอัตราส่วนตามลำดับของแอมโมเนียและดีเอ็นเอที่เผาผลาญสะท้อนแนวโน้มเดียวกัน (เช่น 0.046 vs 0.029) ในสรุป การค้นพบที่ชัดเจนมากที่สุดในการทดลองแสดงในตารางที่ 1 เป็นว่า แอมโมเนียเผาผลาญผลิตในจำนวนเท่ากัน และสูงขึ้นใน 4 มม. L-Ala-L-Gln - กว่าใน 4 มม. Gln ที่ประกอบด้วยสื่อและนี้เป็นโดยไม่คำนึงถึงอาหารเสริมเซลล์เจริญเติบโตเช่น undialyzed หรือ dialyzed FCS หรือ Ultroser G. เราสันนิษฐาน ดังนั้น ว่า dipeptide น้อยในสื่อวัฒนธรรมควรบัญชีสำหรับแอมโมเนียเผาผลาญน้อยลงและในที่สุด การเติบโตของเซลล์ดีขึ้น สำหรับวัตถุประสงค์นี้ เราล้างเซลล์สำหรับรอบระยะเวลาที่ขยายถึง 96 h ใน DMEM ที่ประกอบด้วย 0.25 – 2 มม. L-Ala-L-Gln อย่างมีประสิทธิภาพ รูป 1B แสดงว่า เจริญเติบโตดีขึ้น แต่นี้จำกัดไว้เฉพาะบางความเข้มข้นต่ำของ dipeptide (0.25-0.50 มม.) และ กับวัฒนธรรมระยะเวลา 48 และ 96 h. ในความเปรียบต่าง ในวัฒนธรรม 48 ชั่วโมงเซลล์ เซลล์ BV-2 เติบโตขึ้นเล็กน้อย 4 มม. Gln กว่ากับ L-Ala-LGln (รูปที่ 1B), แม้ว่าแต่ละระดับของแอมโมเนียเผาผลาญ 4 มม. Gln ถูกสูงกว่าที่ 0.25-0.50 มม. L-Ala-L-Gln (รูปที่ 1A) ในเรื่องนี้ ข้อมูลของเราแสดงให้เห็นว่า ใช้การ dipeptide กลายเป็นประโยชน์ในขั้นตอนภายหลัง (เช่น 48-96 ชั่วโมง) ของวัฒนธรรมเซลล์ BV-2 รูปที่ 1C แสดงว่า อัตราส่วนของแอมโมเนียและดีเอ็นเอที่เผาผลาญมีโพรไฟล์เดียวกันของการพึ่งพายาตอบสนองตามที่แสดงในรูป 1A บ่งชี้ว่า เซลล์ BV 2 มีค่อนข้างไม่ดีความไวต่อแอมโมเนีย เมื่อใช้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

กลูตา (Gln) เป็นสารอาหารที่จำเป็นสำหรับเซลล์ แต่ในสื่อวัฒนธรรมมันสลายตัวมีความก้าวหน้าเป็น 5-pyrrolidone กรดคาร์บอกซิและแอมโมเนีย แอมโมเนียเป็นพิษและลดการเจริญเติบโตของเซลล์ การก่อตัวของแอมโมเนียจะลดลงอย่างมากโดยใช้ Dipeptide L-Alanyl-L-Glutamine (lala-L-Gln) ซึ่งมีความเสถียรในสื่อวัฒนธรรม อย่างไรก็ตามผลกระทบของ L-Ala-L-Gln เนื่องจากปริมาณของแอมโมเนียที่เกิดจากการเผาผลาญของเซลล์จะไม่เป็นที่รู้จัก ในเรื่องนี้เราศึกษาวิวัฒนาการของความเข้มข้นของแอมโมเนียในอาหารเลี้ยงเชื้อของเซลล์ที่ปลูกในการปรากฏตัวของทั้ง Gln หรือ L-Ala-L-Gln. the
BV-2 เป็นหมาสายพันธุ์ของเซลล์ microglial ได้รับเลือกให้เป็นนางแบบ (Bocchini et al., 1992) BV-2 เซลล์ที่ปลูกเป็นประจำที่กึ่งบรรจบกันโดยใช้การปรับเปลี่ยนขนาดกลางอินทรี Dulbecco ของ (DMEM) -4 มิลลิ Gln (ไลฟ์เทคโนโลยีส์, เตะโทษ. 041-01880)
เป็นกลางกับ 24 มิลลิโซเดียมไบคาร์บอเนตและมี 5% ของทารกในครรภ์ลูกวัวซีรั่มความร้อนใช้งาน (FCS) เซลล์เพาะเลี้ยงได้รับการดูแลในบรรยากาศ / 5% CO2 95% ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส ก่อนที่จะเปลี่ยนที่สมบูรณ์ของ DMEM-4 มิลลิ Gln โดย DMEM-4 mm L-Ala-L-Gln เซลล์ที่จำเป็นต้องใช้ระยะเวลาการปรับตัวของ 48 ชั่วโมงในสื่อผสมที่มีทั้งสื่อ (v / V 1: 1) เห็นได้ชัดว่าช่วงเวลานี้เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการชักนำของ peptidase ที่ซึ่งสามารถ catabolize L-Ala-L-Gln หรือเพิ่มกิจกรรมของเอนไซม์ที่มีอยู่ก่อนดังกล่าว สำหรับการทดลองเซลล์ถูกชุบเป็นหกดีกลุ่มเพาะเลี้ยงเซลล์ที่มีความหนาแน่นเริ่มต้นของ 2 × 105 เซลล์ต่อกัน สื่อต่างๆและอาหารเสริมสำหรับการเจริญเติบโตของเซลล์ได้รับการทดสอบคือ DMEM containinglgl-1 กลูโคสและเสริมทั้งที่มี 4 มิ Gln หรือความเข้มข้นของ L-Ala-L-Gln (UltraGlutamine ผม Biowhittaker อ้างอิง. M04.684.E) ตั้งแต่ 0.25 2 มิลลิ พาณิชย์พร้อมต่อการใช้งานที่มี DMEM 4 mm L-Alal-Gln (Glutamax-I เทคโนโลยีชีวิตเตะโทษ. 043-3530H) นอกจากนี้ยังถูกนำมาใช้ ในการทดลองบาง Ultroser G (ไลฟ์เทคโนโลยีส์, เตะโทษ. 09125950H) ถูกนำมาใช้ที่ความเข้มข้น 1% ซึ่งจะสอดคล้องกับ 5% FCS ลักษณะทางสัณฐานวิทยาแสงกล้องจุลทรรศน์ BV-2 เซลล์ที่ปลูกในสื่อการทดสอบทุกอย่างก็คล้ายกันมาก ระดับแอมโมเนียได้รับการพิจารณาตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Atanassov et al., 1994) ที่แสดงในตารางที่ 1 แอมโมเนียที่เกิดจากการเผาผลาญเซลลูลาร์ (เช่น 'แอมโมเนียเผาผลาญ') คือการวัดโดยการหักค่าแอมโมเนียของกลางมือถือฟรีจากบรรดาสื่อการเพาะเลี้ยงเซลล์ที่เกี่ยวข้อง แอมโมเนียเมตาบอลิมีความสัมพันธ์อย่างเป็นระบบไปยังเนื้อหาดีเอ็นเอเกณฑ์การเจริญเติบโตของเซลล์ . เนื้อหาดีเอ็นเอปริมาณ fluorimetrically (. Lelong, et al, 1992)
ตารางที่ 1 แสดงให้เห็นว่าในมือถือฟรีแอมโมเนียสื่อ
คือ: 0.53 มม DMEM-4 มิลลิ Gln ในทางตรงกันข้ามแอมโมเนียใน DMEM-4 mm L-Ala-LGln ต่ำกว่าขีด จำกัด ของการตรวจสอบ ต่อไปนี้การบ่มเป็นเวลา 48 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสระดับแอมโมเนียเพิ่มขึ้นในทุกสื่อ ใน DMEM-Gln เนื้อหาแอมโมเนียเป็น 66% สูงกว่าที่วัดในสื่อเดียวกันในวัน 0. นอกเหนือจากทั้ง FCS undialyzed หรือ dialyzed หรือ Ultroser G คิดเป็นระดับความสูงในระดับแอมโมเนีย by100-110% ในสื่อที่มี L-Ala-L-Gln และซีรั่มผลิตภัณฑ์เสริมอาหาร, ค่าแอมโมเนียสุทธิต่ำกว่ามากและเป็นตัวแทนประมาณหนึ่งในสามของค่าที่เกี่ยวข้องของสื่อที่มี Gln และอาหารเสริมเซรั่ม ระดับแอมโมเนียสูงขึ้นในเซลล์เพาะเลี้ยงด้วย Gln กว่าในผู้ที่มี L-Ala-LGln อย่างไรก็ตามค่าการเผาผลาญของแอมโมเนียมีความคล้ายคลึงกันมากสำหรับทั้งสื่อ Gln- และ L-Ala-L-Glncontaining และนี่คือโดยไม่คำนึงถึงการปรากฏตัวของผลิตภัณฑ์เสริมอาหารเจริญเติบโตของเซลล์ใด ๆ นอกจากนี้แอมโมเนียเผาผลาญเป็น 23% สูงขึ้นใน DMEM-L-Ala-L-Gln + 5% FCS กว่าแอมโมเนียเผาผลาญใน DMEM-Gln + 5% FCS และอัตราส่วนที่เกี่ยวข้องของการเผาผลาญแอมโมเนีย / ดีเอ็นเอสะท้อนให้เห็นถึงแนวโน้มที่เดียวกัน (เช่น 0.046 VS 0.029) โดยสรุปการค้นพบที่เห็นได้ชัดเจนที่สุดในการทดลองที่นำเสนอในตารางที่ 1 ก็คือว่าแอมโมเนียเผาผลาญอาหารที่ผลิตในปริมาณที่เท่ากันและแม้กระทั่งที่สูงขึ้นใน 4 mm L-Ala-L-Gln- กว่าใน 4 สื่อมิลลิ Gln ที่มีและนี่คือโดยไม่คำนึงถึง อาหารเสริมเจริญเติบโตของเซลล์เช่น FCS undialyzed หรือ dialyzed หรือ Ultroser กรัมเราสันนิษฐานได้ว่า Dipeptide น้อยลงในอาหารเลี้ยงเชื้อควรบัญชีสำหรับแอมโมเนียเผาผลาญน้อยลงและในที่สุดเจริญเติบโตของเซลล์ที่ดีขึ้น เพื่อจุดประสงค์นี้เราเพาะเลี้ยงเซลล์สำหรับระยะเวลาที่ขยายได้ถึง 96 ชั่วโมงใน DMEM มี 0.25-2 mm L-Ala-L-Gln ได้อย่างมีประสิทธิภาพรูป 1B แสดงให้เห็นว่าการเจริญเติบโตที่ดีกว่าที่จะเกิดขึ้น แต่จะมีการ จำกัด ระดับความเข้มข้นต่ำบางอย่างของ Dipeptide (0.25-0.50 มิลลิเมตร) และระยะเวลาการเลี้ยงระหว่าง 48 และ 96 ชั่วโมง ใน
ทางตรงกันข้ามใน 48 ชั่วโมงเซลล์เพาะเลี้ยงที่ BV-2 เซลล์ขยายตัวดีขึ้นเล็กน้อยมี 4 มิลลิ Gln กว่าด้วย L-Ala-LGln (รูปที่ 1B.) แม้ว่าระดับที่เกี่ยวข้องของแอมโมเนียการเผาผลาญที่ 4 มิ Gln สูงกว่า ที่ 0.25-0.50 mm L-Ala-L-Gln (รูป. 1A) ในเรื่องนี้ข้อมูลของเราแสดงให้เห็นว่าการใช้ Dipeptide จะกลายเป็นข้อได้เปรียบในระยะต่อมา (เช่น 48-96 H) ของ BV-2 เซลล์เพาะเลี้ยง มะเดื่อ. 1C แสดงให้เห็นว่าอัตราส่วนของการเผาผลาญแอมโมเนีย / ดีเอ็นเอแสดงรายละเอียดของการพึ่งพาอาศัยเดียวกันปริมาณการตอบสนองตามที่นำเสนอในรูป 1A นี้บ่งชี้ว่า BV-2 เซลล์ที่ค่อนข้างไม่ดีไวต่อ
แอมโมเนีย เมื่อใช้เวลา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กลูตามีน ( gln ) เป็นสารอาหารที่จำเป็นสำหรับเซลล์ แต่ในวัฒนธรรมสื่อมันสลายตัว ก้าวหน้าใน 5-pyrrolidone กรดคาร์บอกซิลิกและแอมโมเนีย แอมโมเนียที่เป็นพิษ และลดการเจริญเติบโตของเซลล์ การก่อตัวของแอมโมเนียขอลดลง โดยใช้ไดเปปไทด์ l-alanyl-l-glutamine ( lala-l-gln ) ซึ่งมีเสถียรภาพในสังคมสื่อ อย่างไรก็ตาม ผลของ l-ala-l-gln เนื่องจากปริมาณของแอมโมเนียที่เกิดจากเซลล์ ไม่รู้จัก ในการนี้ เราได้ศึกษาวิวัฒนาการของแอมโมเนียในวัฒนธรรมอาหารของเซลล์ที่ปลูกในการแสดงตนของทั้ง gln หรือ l-ala-l-gln .bv-2 , ~ microglial เซลล์บรรทัดถูกเลือกเป็นนางแบบ ( bocchini et al . , 1992 ) เซลล์ bv-2 ถูกตรวจโตที่บรรจบกึ่งใช้ดัลเบโค่การนกอินทรีขนาดกลาง ( dmem ) - 4 มม. gln ( เทคโนโลยี ) 041-01880 )กันชนกับโซเดียมไบคาร์บอเนต 24 มม. และความร้อนซึ่งประกอบด้วย 5% ซีรั่มทารกในครรภ์น่อง ( FCS ) เซลล์วัฒนธรรมยังคง 95% เครื่อง / 5% CO2 บรรยากาศที่อุณหภูมิ 37 องศา ก่อนเปลี่ยนที่สมบูรณ์ของ gln มม. dmem-4 โดย dmem-4 มม. l-ala-l-gln เซลล์ต้องใช้ระยะเวลาการปรับตัวของ 48 ชั่วโมงในการผสมสื่อที่มีทั้งสื่อ ( ปริมาตร / ปริมาตร 1 : 1 ) เห็นได้ชัดว่า ช่วงเวลานี้เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการเหนี่ยวนำของลูกเต้าซึ่งสามารถ catabolize l-ala-l-gln หรือเพิ่มกิจกรรมของที่มีอยู่ก่อนเช่นเอนไซม์ สำหรับการทดลอง เซลล์ถูกชุบเป็นหกดีเซลล์กลุ่มที่ความหนาแน่นเริ่มต้นของ 2 × 105 เซลล์ต่อดี สื่อต่าง ๆ และอาหารเสริมสำหรับการเจริญเติบโตของเซลล์ทดสอบคือ dmem containinglgl − 1 กลูโคสและเสริมให้กับ 4 มม. gln หรือความเข้มข้นของ l-ala-l-gln ( ultraglutamine ผม biowhittaker กรรมการ m04.684 E ) ตั้งแต่ 0.25 ถึง 2 มิลลิเมตร พาณิชย์ พร้อมใช้ dmem ประกอบด้วย 4 มม. l-alal-gln ( glutamax-i ชีวิตเทคโนโลยี กรรมการ 043-3530h ) ยังใช้ ในการทดลองบางอย่าง ultroser กรัม ( เทคโนโลยี ) 09125950h ) ใช้ที่ความเข้มข้น 1 % ซึ่งสอดคล้องกับ 5% FCS . ลักษณะของกล้องจุลทรรศน์แสง bv-2 เซลล์ที่ปลูกในการทดสอบทั้งหมดของสื่อที่คล้ายคลึงกันมาก ระดับแอมโมเนียถูกกำหนดตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( atanassov et al . , 1994 ) ตามที่แสดงในตารางที่ 1 แอมโมเนียที่เกิดจากเซลล์ ( เช่น " " สลายแอมโมเนีย ) ถูก quantified โดยลบค่าของการสังเคราะห์แอมโมเนียปานกลางจากบรรดาของอาหารเพาะเลี้ยงเซลล์ที่เกี่ยวข้อง สลายเป็นแอมโมเนียอย่างเป็นระบบมีปริมาณดีเอ็นเอ เกณฑ์ของการเจริญเติบโตของเซลล์ ปริมาณดีเอ็นเอถูก quantified fluorimetrically ( ท่าน เลลอง et al . , 1992 )ตารางที่ 1 แสดงให้เห็นว่า สื่อในการสังเคราะห์แอมโมเนียคือ : 0.53 มิลลิเมตร ใน gln มม. dmem-4 . ในทางตรงกันข้าม แอมโมเนียใน l-ala-lgln มม. dmem-4 ต่ำกว่าขีดจำกัด . ต่อไปนี้บ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 48 ชั่วโมง ระดับแอมโมเนียที่เพิ่มขึ้นในสื่อทั้งหมด ใน dmem gln , ปริมาณแอมโมเนียเป็น 66 % มากกว่าวัดในตัวกลางเดียวกันในวันที่ 0 นอกจากนี้อย่างใดอย่างหนึ่งหรือผ่าน undialyzed FCS หรือ ultroser กรัมคิดเป็นเพิ่มขึ้นในระดับแอมโมเนีย by100 – 110 % ในสื่อและ l-ala-l-gln เซรั่มอาหารเสริมแอมโมเนียสุทธิมีค่าที่ต่ำกว่ามากและแสดงประมาณหนึ่งในสามของค่าที่เกี่ยวข้องของสื่อ gln และอาหารเสริม เซรั่ม ระดับแอมโมเนียสูงในเซลล์วัฒนธรรมสื่อกับ gln มากกว่าในผู้ที่มี l-ala-lgln . อย่างไรก็ตาม ค่าของแอมโมเนียการเผาผลาญคล้ายกันมากทั้ง gln - l-ala-l-glncontaining สื่อและนี้คือไม่มีข้อมูลเพิ่มเติมใด ๆ การเจริญเติบโตของเซลล์ นอกจากนี้ แอมโมเนีย การเผาผลาญอาหารเป็น 23% สูงกว่าใน dmem-l-ala-l-gln + 5% FCS กว่าสลายแอมโมเนียใน dmem gln + 5 % และอัตราส่วนที่เกี่ยวข้องของ FCS ดีเอ็นเอแอมโมเนีย / การเผาผลาญอาหาร สะท้อนแนวโน้มเดียวกัน ( เช่น 0.029 ( VS ) ในการสรุป , การค้นหาที่เด่นที่สุดในการทดลองที่แสดงในตารางที่ 1 ที่สลายแอมโมเนียที่ผลิตที่เท่าเทียมกันและปริมาณสูงขึ้นใน l-ala-l-gln - 4 มิลลิเมตร มากกว่าใน gln 4 มม. ที่มีสื่อและนี้คือไม่เสริมการเจริญเติบโตของเซลล์ เช่น undialyzed หรือผ่าน ultroser FCS หรือ เราถือว่า ดังนั้น ไดเพปไทด์น้อยกว่า วัฒนธรรมสื่อควรบัญชีสำหรับแอมโมเนียการเผาผลาญอาหารน้อยลง และในที่สุดการเติบโตของเซลล์ดีขึ้น สำหรับวัตถุประสงค์นี้ เราเพาะเลี้ยงเซลล์สำหรับช่วงเวลาที่ขยายได้ถึง 96 ชั่วโมงใน dmem 0.25 –ประกอบด้วย 2 มม. l-ala-l-gln . ได้อย่างมีประสิทธิภาพ รูป 1B แสดงให้เห็นว่าการเจริญเติบโตที่ดีขึ้นจะเกิดขึ้นแต่เฉพาะบางความเข้มข้นต่ำของไดเปปไทด์ ( 0.25 - 0.50 มม. ) และวัฒนธรรม ช่วงระหว่าง 48 และ 96 ชั่วโมงในความคมชัดใน 48 ชั่วโมงเซลล์วัฒนธรรม เซลล์ bv-2 ขยายตัวดีขึ้นเล็กน้อยกับ gln 4 มิลกว่า l-ala-lgln ( รูปที่ 1A ) แม้ว่าแต่ละระดับของแอมโมเนียการเผาผลาญอาหารที่ gln 4 มม. สูงกว่า 0.25 - 0.50 มม. ที่ l-ala-l-gln ( รูปที่ 1A ) ทั้งนี้ ข้อมูลของเราแสดงให้เห็นว่า การใช้ไดเพปไทด์จะกลายเป็นประโยชน์ในขั้นตอนภายหลัง เช่น 48 และ 96 ชั่วโมง ) ของวัฒนธรรมเซลล์ bv-2 . ในรูปแสดงให้เห็นว่าอัตราส่วนการสลายแอมโมเนีย / ดีเอ็นเอโพรไฟล์เดียวกันของการจัดแสดงความคิดเห็นที่นำเสนอในรูปที่ 1A ซึ่งแสดงว่าเซลล์ bv-2 ค่อนข้างไม่ดีแพ้แอมเมิ่น