A highly thermostable mutant lipase

A highly thermostable mutant lipase was generated and characterized. Mutant enzyme demonstrated 144
fold enhanced thermostability over the wild type enzyme at 60 °C. Interestingly, the overall catalytic efficiency
(kcat/Km) of mutant was also enhanced (~20 folds). Circular dichroism spectroscopy, studied as function of
temperature, demonstrated that the mutant lipase retained its secondary structure up to 70–80 °C, whereas
wild type protein structure was completely distorted above 35 °C. Additionally, the intrinsic tryptophan fluorescence
(a probe for the tertiary structure) also displayed difference in the conformation of two enzymes
during temperature dependent unfolding. Furthermore, mutation N355K resulted in extensive H-bonding
(Lys355 HZ1OE2 Glu284) with a distance 2.44 Å. In contrast to this, Wt enzyme has not shown such Hbonding
interaction.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เอนไซม์ไลเปสการกลายพันธุ์สูง thermostable ถูกสร้าง และลักษณะ เอนไซม์กลายพันธุ์แสดง 144พับ thermostability พิเศษกว่าเอนไซม์ชนิดป่าที่ 60 องศาเซลเซียส เป็นเรื่องน่าสนใจ ตัวเร่งปฏิกิริยาโดยรวมประสิทธิภาพ(kcat/Km) ของ mutant ยังเป็นพิเศษ (~ 20 พับ) ก dichroism วงกลม ศึกษาเป็นหน้าที่ของอุณหภูมิ แสดงว่า เอนไซม์ไลเปสกลายพันธุ์สะสมของมัธยมโครงสร้างถึง 70 – 80 ° C ขณะที่ป่าชนิดโปรตีนโครงสร้างผิดเพี้ยนทั้งหมดเหนือ 35 องศาเซลเซียส นอกจากนี้ fluorescence intrinsic ทริปโตเฟน(โพรบเป็นโครงสร้างระดับตติยภูมิ) ยังแสดงความแตกต่างใน conformation ของเอนไซม์ 2ระหว่างอุณหภูมิขึ้นอยู่กับกลุ่ม นอกจากนี้ การกลายพันธุ์ N355K ให้ H-งานละเอียด(Lys355 HZ1OE2 Glu284) มีระยะห่าง 2.44 Å ตรงข้ามนี้ Wt เอนไซม์ได้ไม่แสดง Hbonding ดังกล่าวโต้ตอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เอนไซม์ไลเปสที่กลายพันธุ์ที่ทนความร้อนสูงได้รับการสร้างขึ้นและโดดเด่น แสดงให้เห็นถึงการทำงานของเอนไซม์กลายพันธุ์ 144
ทนร้อนที่เพิ่มขึ้นเท่าที่ผ่านมาการทำงานของเอนไซม์ชนิดป่าที่ 60 ° C ที่น่าสนใจที่มีประสิทธิภาพในการเร่งปฏิกิริยาโดยรวม
(kcat / กิโลเมตร) กลายพันธุ์ก็เพิ่มขึ้น (~ 20 เท่า) สเปกโทรสโก dichroism Circular ศึกษาเป็นหน้าที่ของ
อุณหภูมิแสดงให้เห็นว่าเอนไซม์ไลเปสที่กลายพันธุ์สะสมโครงสร้างทุติยภูมิได้ถึง 70-80 องศาเซลเซียสในขณะที่
ป่าประเภทโครงสร้างโปรตีนถูกบิดเบือนอย่างสมบูรณ์สูงกว่า 35 องศาเซลเซียส นอกจากนี้โพรไบโอเรืองแสงที่แท้จริง
(สอบสวนสำหรับโครงสร้างตติย) นอกจากนี้ยังแสดงความแตกต่างในรูปแบบของทั้งสองเอนไซม์
ในช่วงขึ้นอยู่กับอุณหภูมิแฉ นอกจากนี้การกลายพันธุ์ N355K ส่งผลให้กว้างขวาง H-พันธะ
(Lys355 HZ1 OE2 Glu284) กับระยะทาง 2.44 Å ในทางตรงกันข้ามนี้เอนไซม์น้ำหนักไม่ได้แสดง Hbonding เช่น
การทำงานร่วมกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในเอนไซม์กลายพันธุ์สูงถูกสร้างขึ้นเพียง เอนไซม์กลายพันธุ์แสดง 144
พับเพิ่มเอนไซม์ชนิดป่าที่ทดลกว่า 60 องศา แต่โดยรวมประสิทธิภาพการ
( kcat / km ) กลายพันธุ์ก็เพิ่มขึ้น ( ~ 20 เท่า ) สเปกโทรสโกปี dichroism วงกลม ศึกษาการทำงานของ
อุณหภูมิพบว่าเอนไซม์กลายพันธุ์ของโครงสร้างทุติยภูมิสะสมถึง 70 – 80 ° C )
ประเภทโครงสร้างโปรตีนสมบูรณ์ป่าบิดเบี้ยวเกิน 35 องศา นอกจากนี้ ในทริปนี้
( Probe สำหรับโครงสร้างตติย ) ยังแสดงความแตกต่างในโครงสร้างของเอนไซม์ทั้งสอง
ในระหว่างขึ้นอยู่กับอุณหภูมิแฉ . นอกจากนี้การกลายพันธุ์ n355k ส่งผลให้เกิด
พันธะอย่างละเอียด ( lys355 hz1 oe2 glu284 ) ที่มีระยะทางยาว• . ในทางตรงกันข้ามกับนี้เอนไซม์ WT ไม่แสดงปฏิกิริยาดังกล่าว hbonding