In brief, urine samples were thawed

In brief, urine samples were thawed completely
at room temperature, centrifuged at 4050g for 10 min to sediment particulate matter and 10 mL were taken to carry out the
analysis.

Each sample was spiked with 100 lL of the surrogate
(400 ng mL1) and 100 lL of enzyme solution (b-glucuronidase/
sulfatase).

The enzyme solution was prepared daily by dissolving
3.32 mg of b-glucuronidase/sulfatase (3  106 U g solid1) in 1mL
of 1 M ammonium acetate buffer (pH 5.0).

25 lL of 4-methylumbelliferyl
glucuronide/4-methylumbelliferyl sulfate/13C4-4-methylumbelliferone
standard mixture (4 lgmL1) was also added to
determine the extent of deconjugation.

After mixing, the sample
was incubated at 37 C for 24 h.

Next, analytes were extracted from
the samples by adding 15 mL of ethyl acetate/formic acid (99:1, v/
v) and shaking for 30 min.

The mixture was centrifuged for 10 min
at 4050g. Subsequently, the extracts were evaporated to dryness at
room temperature under a nitrogen stream.

The residue was dissolved
with 400 lL of a mixture of Milli-Q water/MeOH (50:50,
v/v) and placed in a 1.5 mL Eppendorf tube.

500 lL of hexane
was added and the mixture was centrifuged for 15 min at
24960g.

Finally, the underlying aqueous phase was separated and
10 lL injected into the ultra high performance liquid chromatograph
(UHPLC) system.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในช่วงสั้น ๆ ตัวอย่างปัสสาวะถูกละลายอย่างสมบูรณ์
ที่อุณหภูมิห้องหมุนเหวี่ยงที่ 4050g เป็นเวลา 10 นาทีเพื่อให้ตะกอนอนุภาคและ 10 มลถูกนำไปดำเนินการ
วิเคราะห์. ตัวอย่างแต่ละคนถูกแทงด้วย 100 lL ของตัวแทน(400 มิลลิลิตรศึกษา? 1) และ 100 lL ของการแก้ปัญหาการทำงานของเอนไซม์ (B-glucuronidase / sulfatase). การแก้ปัญหาการทำงานของเอนไซม์ที่ถูกจัดทำขึ้นเป็นประจำทุกวันโดยการละลาย3.32 มิลลิกรัมของ B-glucuronidase / sulfatase (3? U 106 กรัมของแข็ง 1) ใน 1 มล1 M บัฟเฟอร์อะซิเตตแอมโมเนียม (pH 5.0). 25 lL 4 Methylumbelliferyl glucuronide / 4 Methylumbelliferyl ซัลเฟต / 13C4-4-methylumbelliferone ส่วนผสมมาตรฐาน (4 lgmL? 1) ถูกเพิ่มเข้ามานอกจากนี้ยังกำหนดขอบเขตของ deconjugation. หลังจากผสมตัวอย่างถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส . เป็นเวลา 24 ชั่วโมงถัดไปวิเคราะห์ถูกสกัดจากกลุ่มตัวอย่างโดยการเพิ่ม 15 มลเอทิลอะซิเต / กรด (99: 1, v / v.) และเขย่าเป็นเวลา 30 นาทีส่วนผสมที่ถูกปั่นเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4050g ต่อจากนั้นสารสกัดระเหยจนแห้งที่อุณหภูมิห้องภายใต้กระแสไนโตรเจน. ที่เหลือก็เลือนหายไปกับ 400 lL ส่วนผสมของน้ำพัน-Q / เมธานอล (50:50, v / v) และวางไว้ในหลอด 1.5 มิลลิลิตร Eppendorf . 500 lL ของเฮกเซนถูกเพิ่มเข้ามาและส่วนผสมที่ถูกปั่น 15 นาทีที่24960g. สุดท้ายเฟสน้ำต้นแบบถูกแยกออกและ10 lL ฉีดเข้าไปใน Chromatograph ของเหลวสมรรถนะสูงเป็นพิเศษ(UHPLC) ระบบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในสั้น , ตัวอย่างปัสสาวะถูกละลายอย่างสมบูรณ์
ที่อุณหภูมิ ห้อง ระดับที่ 4050g 10 นาทีตะกอนอนุภาคและ 10 มิลลิลิตร นำมาดำเนินการ
การวิเคราะห์

แต่ละตัวอย่างถูกด้วย 100 จะของตัวแทน
( 400 กรัมมิลลิลิตร  1 ) และ 100 จะของสารละลายเอนไซม์ ( b-glucuronidase /
ซัลฟาเทส ) .

สารละลายเอนไซม์ที่เตรียมไว้ทุกวัน โดยละลาย
332 มิลลิกรัม b-glucuronidase / ซัลฟาเทส ( 3  106 U G แข็ง  1 ) ใน 1ml
1 M แอมโมเนียมอะซิเตทบัฟเฟอร์ pH 5.0 ) .

25 จะ 4-methylumbelliferyl
glucuronide / 4-methylumbelliferyl ซัลเฟต / 13c4-4-methylumbelliferone
มาตรฐานผสม ( 4 lgml  1 ) ยังเพิ่ม

deconjugation กําหนดขอบเขตของ .

คือหลังจากผสมตัวอย่างบ่มที่ 37  C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง

ต่อไป สารสกัดจาก
ตัวอย่างการเพิ่ม 15 มิลลิลิตร / กรดเอทิลอะซิเตท ( 99:1 , V /
V ) และเขย่าเป็นเวลา 30 นาที

ผสมคือระดับ 10 นาที
ที่ 4050g ต่อมาสารระเหยแห้งได้ในอุณหภูมิห้องภายใต้ไนโตรเจนกระแส


กาก
ละลายกับ 400 จะเป็นส่วนผสมของน้ำต่อปริมาณ milli-q 100%
, v / v ) และอยู่ในหลอด 1.5 ml เพนดอร์ฟ


500 จะของเฮกเซนคือการเพิ่มและผสมที่ระดับ 15 นาทีที่ 24960g


สุดท้าย ( เฟสน้ำถูกแยกออกและ
10 จะถูกฉีดเข้าไปในการปฏิบัติงานสูงยิ่งยวด ของเหลว โครมาโตกราฟ
( uhplc ) ระบบ