Expression of GTFB in E. coli yield

Expression of GTFB in E. coli yielded > 100 mg/l relatively pure and active but mostly insoluble GTFB protein in IBs, regardless of the expression conditions used. Following denaturing, refolding of GTFB protein was most efficient in double distilled H2O. Also, GTFB ncIBs were active, with approx. 10 % of hydrolysis activity compared to the soluble protein. When expressed as units of activity obtained per liter E. coli culture, the total amount of ncIB GTFB expressed possessed around 180 % hydrolysis activity and 100 % transferase activity compared to the amount of soluble GTFB enzyme obtained from one liter culture. The product profiles obtained for the three GTFB enzyme preparations were similar when analyzed by HPAEC and NMR. SEC investigation also showed that these 3 enzyme preparations yielded products with similar size distributions. FT-IR analysis revealed extended β-sheet formation in ncIB GTFB providing an explanation at the molecular level for reduced GTFB activity in ncIBs. The thermostability of ncIB GTFB was relatively high compared to the soluble and refolded GTFB.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

นิพจน์ของ GTFB ใน E. coli ผล > 100 mg / l บริสุทธิ์ค่อนข้าง และการใช้งานแต่ส่วนใหญ่ไม่ละลายน้ำ GTFB โปรตีนใน IBs โดยไม่คำนึงถึงเงื่อนไขของนิพจน์ที่ใช้ ต่อ denaturing, refolding GTFB โปรตีนคือมีประสิทธิภาพสูงสุดใน H2O กลั่นคู่ ยัง GTFB ncIBs ถูกใช้งาน มีประมาณ 10% ของกิจกรรมย่อยเมื่อเทียบกับโปรตีนละลายน้ำได้ เมื่อแสดงเป็นหน่วยของกิจกรรมที่ได้ต่อลิตรวัฒนธรรม E. coli, ncIB GTFB แสดงจำนวนสิงประมาณ 180% กิจกรรมย่อยและกิจกรรม transferase 100% เมื่อเทียบกับปริมาณของเอนไซม์ GTFB ละลายที่ได้จากวัฒนธรรมหนึ่งลิตร โพรไฟล์ของผลิตภัณฑ์ที่ได้รับสำหรับการเตรียมเอนไซม์ GTFB สามได้คล้ายเมื่อวิเคราะห์ โดย HPAEC และ NMR วินาทีสอบสวนยังแสดงให้เห็นว่า การเตรียมการ 3 เอนไซม์เหล่านี้ให้ผลผลิตภัณฑ์ที่ มีการกระจายคล้าย วิเคราะห์ฟุต-IR เปิดเผยβ-แผ่นก่อตัวขยายเพิ่มเติมใน ncIB GTFB ให้คำอธิบายในระดับโมเลกุลสำหรับกิจกรรมที่ลด GTFB ใน ncIBs Thermostability ของ ncIB GTFB ได้ค่อนข้างสูงเมื่อเทียบกับ GTFB refolded และละลายน้ำได้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การแสดงออกของ GTFB ใน E. coli ผล> 100 mg / l ค่อนข้างบริสุทธิ์และการใช้งาน แต่ส่วนใหญ่โปรตีน GTFB ละลายใน IBs โดยไม่คำนึงถึงเงื่อนไขการแสดงออกที่ใช้ ต่อไปนี้ขั้นเปลี่ยน, refolding ของ GTFB โปรตีนที่มีประสิทธิภาพมากที่สุดในคู่กลั่น H2O นอกจากนี้ GTFB ncIBs มีการใช้งานที่มีประมาณ 10% ของกิจกรรมการย่อยสลายเมื่อเทียบกับโปรตีนที่ละลายน้ำได้ เมื่อแสดงเป็นหน่วยของกิจกรรมที่ได้รับต่อลิตรอีวัฒนธรรม coli, จำนวนของ ncIB GTFB แสดงความครอบครองรอบกิจกรรมย่อยสลายได้ 180% และ 100% กิจกรรม transferase เมื่อเทียบกับปริมาณของเอนไซม์ GTFB ละลายน้ำที่ได้จากการเพาะเลี้ยงหนึ่งลิตร โปรไฟล์ผลิตภัณฑ์ที่ได้รับสำหรับสาม GTFB เตรียมเอนไซม์ที่คล้ายกันเมื่อวิเคราะห์โดย HPAEC และ NMR การตรวจสอบคณะกรรมการ ก.ล.ต. ยังแสดงให้เห็นว่าสิ่งเหล่านี้ 3 เตรียมเอนไซม์ผลผลิตภัณฑ์ที่มีการกระจายขนาดใกล้เคียงกัน วิเคราะห์ FT-IR เปิดเผยก่อβแผ่นในการขยาย ncIB GTFB ให้คำอธิบายในระดับโมเลกุลสำหรับกิจกรรม GTFB ลด ncIBs ทนต่อความร้อนของ ncIB GTFB ค่อนข้างสูงเมื่อเทียบกับ GTFB ละลายน้ำและ refolded

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การแสดงออกของ gtfb ใน E . coli ) > 100 มก. / ล. ที่ค่อนข้างบริสุทธิ์และปราดเปรียว แต่ส่วนใหญ่ไม่ละลาย gtfb โปรตีนใน IBS ไม่ว่านิพจน์เงื่อนไขใช้ ตามี่ refolding , โปรตีน gtfb เป็นสองเท่ากลั่น H2O มีประสิทธิภาพมากที่สุด นอกจากนี้ gtfb ncibs มีการใช้งาน มีประมาณ 10% ของกิจกรรมการย่อยสลายเมื่อเทียบกับโปรตีนที่ละลายน้ำได้ เมื่อแสดงเป็นหน่วยของกิจกรรมที่ได้รับต่อลิตร E . coli วัฒนธรรม , จำนวน ncib gtfb แสดงสิงรอบ 180 % การย่อยสลายของกิจกรรมและกิจกรรม 100 % เมื่อเทียบกับปริมาณ soluble gtfb เอนไซม์ที่ได้จากหนึ่งลิตร วัฒนธรรม ผลิตภัณฑ์โพรไฟล์ได้ทั้งสาม gtfb เอนไซม์การเตรียมเหมือนกันเมื่อวิเคราะห์โดย hpaec และ NMR การสืบสวนวินาที พบว่าเอนไซม์เหล่านี้ 3 การเตรียมและผลิตภัณฑ์ที่มีการกระจายขนาดใกล้เคียงกัน การวิเคราะห์ - บีตา - การเปิดเผยขยายแผ่นใน ncib gtfb ให้คำอธิบายในระดับโมเลกุลสำหรับกิจกรรมที่ลดลง gtfb ใน ncibs . ส่วนของ ncib ทดล gtfb ค่อนข้างสูงเมื่อเทียบกับปริมาณ และ gtfb refolded .