The present experiment was conducte

The present experiment was conducted to
clone swamp buffalo and cattle embryos using in
vitro matured swamp buffalo oocytes as recipient
cytoplasts and swamp buffalo and cattle ear fibroblast
cells (BEFC and CEFC) as donor nuclei and
examine the use of mouse fetal fibroblast cell as
co-culture cell during embryos development. Swamp
buffalo ovaries were collected from slaughterhouse
and cumulus oocyte complexes (COCs) were
harvested by aspiration and then in vitro matured
for 19-20 h. Matured oocytes were enucleated by
micromanipulation under an inverted microscope.
Enucleation was confirmed by staining the removed
portion with Hoechst 33342. Individual donor cells
of swamp buffalo or cattle ear fibroblast cells
(diameter 14-16 μm) were inserted into perivitelline
space of recipient cytoplasts by micromanipulation.
The couplets were fused with two DC pulses of 30
V/couplet for 15 μsec each time in fusion medium.
After fusion, reconstructed embryos were immediately
activated with A23187 followed by culturing in
SOFaa-10 which containing cycloheximide and
cytochalasin D for 5 h, then cultured in SOFaa
supplemented with 1% FCS (SOFaa-1) for 2 days.
The embryos at 8-cell stage were harvested and
assigned to co-cultured with frozen-thawed buffalo
oviductal epithelial cell (BOEC) or mouse embryonic
fibroblast cell(MEFC) for another 2 days then
replaced twice with SOFaa-10 every 2 days. The
result from the experiment demonstrated that the
embryos reconstructed by both BEFC and CEFC
could developed nearly the same rate to 8 cell (53.1
vs 51.0 %), morula(19.8 vs 17.0 %), and blastocyst
stage(15.6 vs 13.9 %) when co-culture with BOEC.
While MEFC could support the reconstructed
embryos developed to morula at the same rate (10.8
%) and very low rate to blastocyst stage (2.8 vs 1.3
%). The cloned cattle embryos could be produced
using swamp buffalo oocytes as recipient cytoplasts
and co-culture with MEFC could support the
development but not as good as BOEC. The
development of the cloned cattle embryos in the
recipient cows will be further studied.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทดลองนำเสนอวิธีการหนองควายและวัวโคลนใช้ในโคลนหลอด matured หนองควายแช่สารละลายเป็นผู้รับcytoplasts และกระบือ และวัวหู fibroblastเซลล์ (BEFC และ CEFC) เป็นผู้บริจาคแอลฟา และตรวจสอบการใช้งานของเซลล์ fibroblast ครรภ์เมาส์เป็นเซลล์วัฒนธรรมร่วมในระหว่างการพัฒนาโคลน พรุรังไข่ควายถูกเก็บรวบรวมจากบิดาและสิ่งอำนวยความสะดวก oocyte ลัส (COCs)เก็บเกี่ยว ตามความใฝ่ฝัน แล้ว ในหลอด maturedสำหรับ 19-20 h. Matured แช่สารละลายถูก enucleated โดยmicromanipulation ภายใต้กล้องจุลทรรศน์การกลับหัวEnucleation ได้รับการยืนยัน โดยการย้อมสีที่ลบส่วนกับอย่างไร Hoechst 33342 ผู้บริจาคแต่ละเซลล์หนองควายหรือวัวหู fibroblast เซลล์(เส้นผ่าศูนย์กลาง 14-16 μm) ถูกแทรก perivitellineพื้นที่ของผู้รับ cytoplasts โดย micromanipulationCouplets ถูก fused กับสอง DC พัลส์ 30V/couplet สำหรับ 15 μsec กันในฟิวชั่นหลังจากหลอม โคลนที่สร้างขึ้นใหม่ได้ทันทีใช้ A23187 ตาม culturing ในSOFaa-10 ซึ่งประกอบด้วย cycloheximide และcytochalasin D สำหรับ h 5 อ่างแล้ว ใน SOFaaเสริม ด้วย 1% FCS (SOFaa-1) 2 วันโคลนในระยะ 8 เซลล์เก็บเกี่ยวผลผลิต และกำหนดให้ร่วมอ่างแช่แข็ง-thawed ควายมาด้วยเมาส์ตัวอ่อนหรือเซลล์ epithelial oviductal (BOEC)fibroblast cell(MEFC) อีก 2 วันแล้วถูกแทนที่ ด้วย SOFaa-10 ครั้งทุก 2 วัน ที่ผลจากการทดลองสาธิตที่จะโคลนเชิดทั้ง BEFC และ CEFCสามารถพัฒนาเกือบอัตราเดียว 8 เซลล์ (53.1เทียบกับ 51.0%), morula (19.8 vs 17.0%), และอดีตขั้นตอน (ไม่เกิน 15.6 กับ 13.9%) เมื่อร่วมวัฒนธรรมกับ BOECในขณะที่ MEFC สามารถรองรับการสร้างขึ้นใหม่โคลนที่พัฒนาเพื่อ morula ในอัตราเดียวกัน (10.8%) และอัตราต่ำมากระยะบลาสโตซิสท์ (เทียบกับ 2.8 1.3%). สามารถผลิตโคลนโคลนวัวใช้หนองควายแช่สารละลายเป็น cytoplasts ผู้รับและวัฒนธรรมร่วมกับ MEFC ไม่สนับสนุนการพัฒนา แต่ไม่ดีเท่า BOEC ที่พัฒนาของโคลนโคลนวัวในการวัวผู้รับจะสามารถศึกษาเพิ่มเติม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การทดลองในปัจจุบันได้รับการดำเนินการเพื่อ
กระบือปลักโคลนตัวอ่อนและวัวที่ใช้ใน
การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อเซลล์ไข่สุกกระบือปลักเป็นผู้รับ
cytoplasts และกระบือและโคลาสท์หู
เซลล์ (BEFC และ CEFC) เป็นนิวเคลียสของผู้บริจาคและ
ตรวจสอบการใช้งานของเซลล์ fibroblast ของทารกในครรภ์เป็นเมาส์
ร่วม เซลล์เพาะเลี้ยงตัวอ่อนในระหว่างการพัฒนา ปลัก
ควายรังไข่ถูกเก็บมาจากโรงฆ่าสัตว์
และไข่คิวมูลัสคอมเพล็กซ์ (CoCs) ได้รับการ
เก็บเกี่ยวด้วยความทะเยอทะยานและจากนั้นในหลอดทดลองครบกำหนด
สำหรับ 19-20 ชั่วโมง สุกไข่ถูก enucleated โดย
micromanipulation ภายใต้กล้องจุลทรรศน์คว่ำ.
Enucleation รับการยืนยันจากการย้อมสีออก
ส่วนกับ Hoechst 33342. เซลล์บริจาคส่วนบุคคล
ของกระบือปลักวัวหรือเซลล์ fibroblast หู
(เส้นผ่าศูนย์กลาง 14-16 ไมครอน) ถูกใส่เข้าไปใน perivitelline
พื้นที่ cytoplasts ผู้รับโดย micromanipulation.
กลอนหลอมรวมกับสองพัลส์ DC 30
V / คู่ 15 μsecในแต่ละครั้งในสื่อฟิวชั่น.
หลังจากที่ฟิวชั่น, ตัวอ่อนที่ถูกสร้างขึ้นใหม่ทันที
ที่มีการเปิดใช้งาน A23187 ตามด้วยการเพาะเลี้ยงใน
SOFaa-10 ซึ่งมี cycloheximide และ
cytochalasin D 5 ชั่วโมง แล้วเลี้ยงใน SOFaa
เสริมด้วย 1% FCS (SOFaa-1) เป็นเวลา 2 วัน.
ตัวอ่อนในขั้นตอน 8 เซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวและ
ได้รับมอบหมายให้ร่วมกับการเพาะเลี้ยงกระบือแช่แข็งละลาย
เซลล์เยื่อบุผิวท่อนำไข่ (BOEC) หรือเมาส์ตัวอ่อน
เซลล์ fibroblast (MEFC) อีก 2 วันแล้ว
แทนที่สองครั้งกับ SOFaa-10 ทุก 2 วัน
ผลจากการทดลองแสดงให้เห็นว่า
ตัวอ่อนที่สร้างขึ้นใหม่ทั้ง BEFC CEFC และ
สามารถพัฒนาเกือบอัตราเดียวกันถึง 8 เซลล์ (53.1
เทียบกับ 51.0%) มอรูล่า (19.8 เทียบกับ 17.0%) และตัวอ่อน
เวที (15.6 เทียบกับ 13.9%) เมื่อร่วม -culture กับ BOEC.
ในขณะที่ MEFC สร้างขึ้นใหม่จะสนับสนุน
การพัฒนาให้ตัวอ่อนมอรูล่าในอัตราเดียวกัน (10.8
%) และอัตราที่ต่ำมากที่จะอ่อนเวที (2.8 เทียบกับ 1.3
%) ตัวอ่อนวัวโคลนสามารถผลิต
โดยใช้เซลล์ไข่กระบือปลัก cytoplasts เป็นผู้รับ
และผู้ร่วมวัฒนธรรมกับ MEFC สามารถสนับสนุน
การพัฒนา แต่ไม่ดีเท่าที่ BOEC
การพัฒนาของตัวอ่อนในโคลนวัว
วัวผู้รับจะมีการศึกษาต่อไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การทดลองในปัจจุบันมีวัตถุประสงค์เพื่อ
โคลนหนองกระบือตัวที่ใช้ในการเพาะเลี้ยงกระบือ
โตขึ้นเป็นโอโอไซต์ผู้รับ
กระบือและโคและ fibroblast เซลล์ ( และหู
befc cefc ) เป็นผู้บริจาคนิวเคลียสและ
ศึกษาใช้เมาส์ของ fibroblast เซลล์เป็นเซลล์วัฒนธรรมระหว่างการพัฒนาของตัวอ่อน
Co . หนองควายจากโรงฆ่าสัตว์รังไข่ครั้งนี้

นอกจากนี้สารประกอบเชิงซ้อนและไข่ ( ลบ )
เก็บเกี่ยวโดยปณิธานและจากนั้นในการเจริญเติบโต
สำหรับ 19-20 ชั่วโมงครบ oocyte enucleated ด้วย
micromanipulation ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ไทย .
พิสมัยได้รับการยืนยันโดยวิธีการลบออก
ส่วนกับ Hoechst 33342 . แต่ละเซลล์ของโค กระบือ หรือหู

เซลล์เนื้อเยื่อเกี่ยวพัน ( เส้นผ่าศูนย์กลาง 14-16 μ M ) ถูกแทรกลงใน perivitelline
พื้นที่ของผู้รับโดยใช้โอโอไซต์โดย micromanipulation .
couplets ถูกผสมกับสอง DC พัลส์ของ 30
v / โคลง 15 μวินาทีในแต่ละครั้งผสมปานกลาง
หลังจากฟิวชั่น , สร้างเอ็มบริโอได้ทันที
ใช้งานกับ a23187 ตามโดยการเพาะเลี้ยงใน sofaa-10 ซึ่งประกอบด้วยร้อยเรียงและ

cytochalasin D สำหรับ 5 ชั่วโมง แล้วเพาะเลี้ยงใน sofaa
เสริม 1% FCS ( sofaa-1 )
2 วันตัวอ่อนระยะ 8 - เซลล์เก็บ
มอบหมาย Co เลี้ยงควายแช่แข็งละลาย
oviductal เซลล์เยื่อบุผิว ( เลี้ยง ) หรือเมาส์ตัวอ่อนเซลล์ไฟโบรบลาสต์ (
mefc ) อีก 2 วันแล้ว
แทนที่สองครั้งกับ sofaa-10 ทุก 2 วัน
ผลการทดลองแสดงให้เห็นว่าสารทั้งสองและสร้างขึ้นใหม่โดย befc

cefc สามารถพัฒนาเกือบอัตราเดียวกันถึง 8 เซลล์ ( /
vs 510 % ) , มอรูล่า ( 19.8 vs 8.7 % ) และระยะบลาสโตซิส
( 15.6 vs 13.9 % ) เมื่อเพาะเลี้ยง Co .
ตอนที่ mefc สามารถสนับสนุนข้อมูล
เจริญพัฒนา ( PCR ) ในอัตราเดียวกัน ( 10.8
% ) และต่ำมากอัตราดอกเบี้ยระยะบลาสโตซิส ( 2.8 vs 1.3
% ) โคลนตัวอ่อนโคนมสามารถผลิต
ใช้กระบือเป็นผู้รับเซลล์โอโอไซต์
และวัฒนธรรมร่วม กับ mefc สามารถสนับสนุน
การพัฒนา แต่ยังไม่ดีเท่าที่เลี้ยง .
การพัฒนาของโคลนตัวอ่อนในโค
ผู้รับวัวต่อไป )