Immunofluorescent microscopyOvernig

Immunofluorescent microscopy
Overnight cultures of GAS were collected, washed and resuspended in PBS to an OD540 of 0.1. Ten microlitres of the bacterial dilution was then smeared across polylysine microscope slides (Esco, USA), air-dried at room temperature, and fixed for 10 min with 3% paraformaldehyde (Sigma, USA) in PBS. The slides were subsequently washed in PBS (10 min) and blocked with 5% skim milk/PBS-Tween 20 for 30 min in a humidified chamber at 37°C. The slides were then rinsed in PBS, incubated with non-specific human IgG (Serotech, UK) diluted 1 in 200 with 0.5% skim milk/PBS-Tween 20, for 1 h at 37°C in a humidified chamber. A 2-ml aliquot of the primary antibody samples diluted 1 in 200 with 0.5% skim milk/PBS-Tween 20 was added to each slide and incubated at 4°C overnight in a humidified chamber. Slides were then washed with two changes of PBS for 15 min and covered with 1 ml of a 1:100 dilution of fluorescein isothiocyanate (FITC)-conjugated F(ab′)2 goat anti-mouse IgG (Silenus), and incubated in the dark at room temperature for 2 h in a humidified chamber. The slides were then washed three times in PBS for 30 min, before mounting with Vectashield (anti-fade) (Vector Laboratories, USA). Slides were examined using an Axioskop fluorescent microscope at a detection wavelength of 520 nm.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Immunofluorescent microscopyวัฒนธรรมบัตรกำนัลแก๊สถูกเก็บ ล้าง และ resuspended ใน PBS จะมี OD540 0.1 Microlitres สิบของเจือจางแบคทีเรียแล้วป้ายผ่านภาพนิ่งกล้องจุลทรรศน์ polylysine (เอสโก สหรัฐอเมริกา), air-dried ที่อุณหภูมิห้อง และถาวรสำหรับ 10 นาทีกับ 3% paraformaldehyde (ซิก สหรัฐอเมริกา) ใน PBS ภาพนิ่งมาล้างใน PBS (10 นาที) และบล็อก ด้วย 5% skim นม/PBS-Tween 20 ใน 30 นาทีในห้อง humidified ที่ 37 องศาเซลเซียส ภาพนิ่งจากนั้นถูก rinsed ใน PBS, incubated ด้วยไม่ใช่เฉพาะมนุษย์ IgG (Serotech, UK) ผสม 1 ใน 200 ด้วย 0.5% skim นม/PBS-Tween 20 สำหรับ h 1 ที่ 37° C ในห้อง humidified ส่วนลงตัวการ 2 ml อย่างหลักแอนติบอดีเพิ่มแต่ละภาพนิ่ง และ incubated ที่ 4° C ค้างคืนในห้อง humidified แตกออก 1 ใน 200 ด้วย 0.5% skim นม/PBS-Tween 20 ภาพนิ่งจากนั้นล้าง ด้วย PBS เปลี่ยนสองสำหรับ 15 นาที และมี 1 ml ของเจือจาง 1: 100 ของ fluorescein isothiocyanate (FITC) -กลวง F (ab′) แพะ 2 ป้องกันเมาส์ IgG (Silenus), และ incubated ในมืดอุณหภูมิห้องสำหรับ h 2 ในหอ humidified ภาพนิ่งถูกแล้วล้างสามครั้งใน PBS ใน 30 นาที ก่อนที่จะติดตั้งกับ Vectashield (ต่อต้านค่อย ๆ) (ห้องปฏิบัติการเวกเตอร์ สหรัฐอเมริกา) ภาพนิ่งถูกตรวจสอบโดยใช้กล้องจุลทรรศน์การเรืองแสง Axioskop ที่ความยาวคลื่นตรวจจับของ 520 nm

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Immunofluorescent
กล้องจุลทรรศน์วัฒนธรรมค้างคืนของก๊าซที่ถูกเก็บรวบรวมล้างและresuspended ในพีบีเอสไปยัง OD540 0.1 สิบ microlitres ของแบคทีเรียถูกเจือจางแล้วป้ายไปยังภาพนิ่งกล้องจุลทรรศน์ polylysine (Esco, USA) อากาศแห้งที่อุณหภูมิห้องและคงเป็นเวลา 10 นาทีกับ paraformaldehyde 3% (ซิกม่าสหรัฐอเมริกา) ในพีบีเอส สไลด์ถูกล้างในภายหลังพีบีเอส (10 นาที) และบล็อก 5% นมพร่องมันเนย / 20-Tween พีบีเอสเป็นเวลา 30 นาทีในห้องความชื้นที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส สไลด์ถูกล้างแล้วในพีบีเอสบ่มกับ IgG ของมนุษย์ที่ไม่เฉพาะเจาะจง (Serotech สหราชอาณาจักร) ปรับลด 1 ใน 200 กับ 0.5% นมพร่องมันเนย / พีบีเอส Tween-20 เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในห้องความชื้น หาร 2 มิลลิลิตรตัวอย่างแอนติบอดีหลักเจือจาง 1 ใน 200 กับ 0.5% นมพร่องมันเนย / 20-Tween พีบีเอสถูกบันทึกอยู่ในแต่ละภาพนิ่งและบ่มที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสในชั่วข้ามคืนในห้องความชื้น ภาพนิ่งถูกล้างแล้วกับสองการเปลี่ยนแปลงของพีบีเอสเป็นเวลา 15 นาทีและปกคลุมด้วย 1 มิลลิลิตร 1: 100 ลดสัดส่วนของ fluorescein isothiocyanate (FITC) -conjugated F (AB) 2 แพะต่อต้านเมาส์ IgG (ไซเลนุส) และบ่มใน ความมืดที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 2 ชั่วโมงในห้องความชื้น ภาพนิ่งถูกล้างแล้วสามครั้งในพีบีเอสเป็นเวลา 30 นาทีก่อนที่จะติดตั้งกับ Vectashield (anti-จาง) (ห้องปฏิบัติการเวกเตอร์, USA) สไลด์มีการตรวจสอบโดยใช้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง Axioskop ในการตรวจสอบของความยาวคลื่น 520 นาโนเมตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

immunofluorescent กล้องจุลทรรศน์
ค้างคืนวัฒนธรรมของก๊าซได้มา ล้าง และ resuspended ใน PBS เป็น od540 ของ 0.1 10 microlitres ของแบคทีเรียก็ละเลงทั่วการ polylysine กล้องจุลทรรศน์ภาพนิ่ง ( ESCO , USA ) , อากาศแห้งที่อุณหภูมิห้อง และการแก้ไขสำหรับ 10 นาทีกับ 3 % พาราฟอร์มาลดิไฮด์ ( Sigma , USA ) ใน PBSภาพนิ่ง จัดการล้างใน PBS ( 10 นาที ) และถูกปิดกั้นด้วย 5% หางนม / PBS Tween 20 30 นาทีใน humidified ห้องที่ 37 องศา สไลด์แล้วล้างใน PBS บ่มกับมนุษย์ชนิด IgG ( serotech , UK ) ซึ่ง 1 ใน 200 0.5 หางนม / Tween 20 ช่อง สำหรับ 1 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 37 องศา C ใน humidified Chamber เป็น 2-ml ส่วนลงตัวของแอนติบอดี เป็น 1 ใน 200 ตัวอย่างเจือจางด้วย 05% หางนม / PBS Tween 20 ที่ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละสไลด์ และบ่มที่อุณหภูมิ 4 องศา C ค้างคืนใน humidified Chamber สไลด์แล้วล้างด้วยสองการเปลี่ยนแปลงของ PBS 15 นาทีและปกคลุมด้วย 1 มิลลิลิตรของ 100 เจือจางี่ไอโซไทโอไซยาเนต ( fitc ) และ F ( ab School ) 2 แพะ IgG anti เมาส์ ( ซิเลนุส ) และเลี้ยงในที่มืดอุณหภูมิห้องเป็นเวลา 2 ชั่วโมงใน humidified Chamberสไลด์แล้วล้าง 3 ครั้งในช่อง ประมาณ 30 นาที ก่อนการติดตั้งกับ vectashield ( anti ลบเลือน ) ( ห้องปฏิบัติการเวกเตอร์สหรัฐอเมริกา ) ภาพนิ่งที่ถูกตรวจสอบโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ axioskop เรืองแสงที่ตรวจจับความยาวคลื่น 520 nm .