F Soundra Josephine et al J. Microb

F Soundra Josephine et al J. Microbiol. Biotech. Res., 2012, 2 (1):163-168
______________________________________________________________________________
165
Available online at www.scholarsresearchlibrary.com
Analytical Methods
Determination of Protease Activity
Protease activity was determined by a modified procedure based on the method of[16]. One
protease unit is defined as the amount of enzyme that releases 1 μg of tyrosine per mL per
minute under the standard conditions.
Protein Assay
Protein was measured by the method of [17] with Bovine Serum Albumin (BSA) as the standard.
The concentration of protein during purification studies was calculated from the absorbance at
280 nm.
Factors affecting activity:
The following factors were studied to obtain the optimal condition for activity of partially
purified proteases. These factors include incubation period, incubation temperature, and pH.
Effect of Temperature and pH on Protease from Bacillus Sp:
Effect of temperature was studied from 10 to 80ºC. effect of pH was studied from pH 2.0 to
11.9(HCl/KCl buffer for pH2.0; Glycine/HCl buffer for pH 2.5 to 3.5; Acetate buffer for pH 4.0
to 5.5; Phosphate buffer for pH 6.0 to 7.5; Tris/HCL buffer for pH 8.0 to 9.0; Glycine/NaOH
buffer for pH 9.5 to 10.5 and NaHPO4 /NaOH buffer for pH 11.0 to 11.9)
RESULTS AND DISCUSSION
Isolation and screening of microorganisms producing Protease
Fig. 1 shows the organism producing protease enzyme a clear zone around the colony as the
protein near the colony is utilized. Depending upon the zone of clearance, the strain of Bacilllus
SNR01 was selected for further experimental studies.
Fig. 1: The zone of hydrolysis of Bacillus SNR 01 on gelatin agar
Production and purification of protease from Bacillus SNR01:
The isolated source of Bacillus SNR01 maximum enzyme production was observed at 24 hours
in showed in Fig. 2. Other investors, reported that both Bacillus anthracis, S-44 and Bacillus
cereus var. mycoides, S-98 exhibited their maximum ability to biosynthesize proteases within 24
F

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ฉ soundra josephine ตอัลเจ Microbiol เทคโนโลยีชีวภาพ res., 2012, 2 ออนไลน์ที่ www.scholarsresearchlibrary.com

วิธีการวิเคราะห์การกำหนดกิจกรรมโปรติเอส
กิจกรรมโปรติเอสได้รับการกำหนดโดยขั้นตอนการปรับเปลี่ยนขึ้นอยู่กับวิธีการของ [16] หนึ่ง
หน่วยโปรตีเอสมีการกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่เผยแพร่ 1 ไมโครกรัมของซายน์ต่อมิลลิลิตรต่อนาที
ภายใต้เงื่อนไขมาตรฐาน.

ทดสอบโปรตีนโปรตีนถูกวัดโดยวิธีการของ [17] ด้วยซีรั่มอัลบูมิวัว (BSA) เป็นมาตรฐาน .
ความเข้มข้นของโปรตีนในระหว่างการศึกษาการทำให้บริสุทธิ์ที่คำนวณได้จากการดูดกลืนแสงที่ 280 นาโนเมตร

ปัจจัยที่มีผลต่อกิจกรรม:
ปัจจัยต่อไปนี้มีการศึกษาที่จะได้รับเงื่อนไขที่ดีที่สุดสำหรับการทำงานของโปรตีเอสบางส่วน
บริสุทธิ์ ปัจจัยเหล่านี้รวมถึงระยะเวลาการบ่มที่อุณหภูมิการบ่มและ ph
ผลกระทบของอุณหภูมิและพีเอชในโปรติเอสจากบาซิลลัส: sp.
ผลกระทบของอุณหภูมิได้ศึกษา 10-80 องศาเซลเซียส ผลของพีเอชได้ศึกษาจาก ph 2.0
11.9 (hcl / kcl buffer เพื่อ ph2.0; บัฟเฟอร์ glycine / hcl เพื่อ ph 25-3.5; บัฟเฟอร์น้ำนมเพื่อ ph 4.0
5.5; ฟอสเฟตบัฟเฟอร์เพื่อ ph 6.0-7.5; บัฟเฟอร์ tris / hcl เพื่อ ph 8.0-9.0; glycine / NaOH
บัฟเฟอร์ ph 9.5-10.5 และ nahpo4 / NaOH buffer เพื่อ ph 11.0 การ 11.9)
ผลและการอภิปราย
การแยกและการคัดกรองของจุลินทรีย์ผลิตเอนไซม์โปรติเอ
มะเดื่อ 1 แสดงให้เห็นถึงสิ่งมีชีวิตที่ผลิตเอนไซม์โปรติเอสวงใสรอบโคโลนีเป็น
โปรตีนใกล้อาณานิคมถูกนำมาใช้ ขึ้นอยู่กับโซนของการกวาดล้างความเครียดของ bacilllus
snr01 ได้รับเลือกสำหรับการศึกษาทดลองต่อไป.
มะเดื่อ 1: โซนของการย่อยสลายของบาซิลลัส SNR 01 เจลาตินในอาหารเลี้ยงเชื้อ
การผลิตและการทำให้บริสุทธิ์ของโปรติเอสจากเชื้อแบคทีเรีย snr01:
แยกแหล่งที่มาของการผลิตเอนไซม์บาซิลลัส snr01 สูงสุดเป็นข้อสังเกตที่ 24 ชั่วโมง
ในแสดงให้เห็นในภาพ 2นักลงทุนอื่น ๆ รายงานว่าทั้งสองบาซิลลัส anthracis, s-44 และบาซิลลัส
cereus var mycoides, s-98 แสดงความสามารถสูงสุดของพวกเขาที่จะ biosynthesize โปรตีเอสภายใน 24
ฉ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

F Soundra Josephine et al J. Microbiol เทคโนโลยีชีวภาพ ทรัพยากร 2012, 2 (1): 163-168
___
165
ขอออนไลน์ได้ที่ www.scholarsresearchlibrary.com
วิธีวิเคราะห์
กำหนดกิจกรรมรติเอส
กิจกรรมรติเอสถูกกำหนด โดยขั้นตอนการปรับเปลี่ยนตามวิธีการ [16] หนึ่ง
รติเอสหน่วยถูกกำหนดให้เป็นจำนวนเอนไซม์ที่ออก μg 1 ของ tyrosine ต่อ mL ต่อ
นาทีภายใต้การมาตรฐานเงื่อนไขการ
วิเคราะห์โปรตีน
โปรตีนถูกวัด โดยวิธีของ [17] บีเอสกับวัว Serum Albumin (เอ) เป็นมาตรฐาน
absorbance ที่คำนวณความเข้มข้นของโปรตีนในระหว่างการศึกษาฟอก
280 nm.
ปัจจัยมีผลต่อกิจกรรม:
ปัจจัยต่อไปนี้ได้ศึกษาเพื่อให้ได้เงื่อนไขดีที่สุดสำหรับกิจกรรมของบางส่วน
proteases บริสุทธิ์ ปัจจัยเหล่านี้มีระยะเวลาบ่ม บ่มอุณหภูมิ และ pH.
ผลของอุณหภูมิและค่า pH ในรติเอสจากคัด Sp:
ผลของอุณหภูมิที่ศึกษาจาก 10 ไป 80ºC มีศึกษาผลของ pH จาก pH 2.0
11.9(HCl/KCl buffer for pH2.0; บัฟเฟอร์ glycine/HCl สำหรับค่า pH 25 ให้ 3.5 บัฟเฟอร์ acetate สำหรับค่า pH 4.0
ไป 5.5 ฟอสเฟตบัฟเฟอร์สำหรับค่า pH 6.0 ให้ 7.5 ทริ สเรทติ้ง/HCL บัฟเฟอร์สำหรับค่า pH 8.0 การ 9.0 Glycine/NaOH
บัฟเฟอร์ pH 9.5-10.5 และ NaHPO4 /NaOH บัฟเฟอร์สำหรับค่า pH 11.0-11.9)
ผลลัพธ์และสนทนา
แยกและคัดกรองจุลินทรีย์ผลิตรติเอส
Fig. 1 โซนใสรอบโคโลนีเป็นเอนไซม์รติเอสผลิตสิ่งมีชีวิตแสดงการ
มีการใช้ประโยชน์โปรตีนใกล้ฝูง ขึ้นอยู่กับโซนของเคลียร์ สายพันธุ์ของ Bacilllus
SNR01 เลือกสำหรับต่อทดลองศึกษา
Fig. 1: โซนไฮโตรไลซ์ 01 SNR คัดใน agar ตุ๋น
ผลิตและฟอกรติเอสจากคัด SNR01:
แหล่งผลิตเอนไซม์สูงสุด SNR01 คัดแยกถูกสังเกตที่ 24 ชั่วโมง
ในพบใน Fig. 2 นักลงทุนอื่น ๆ รายงานว่า anthracis คัดทั้ง S-44 และคัด
cereus เพียง mycoides, S-98 จัดแสดงความสามารถสูงสุดใน proteases biosynthesize ภายใน 24
F

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

F soundra โจเซฟีน et al .ศป. microbiol . เทคโนโลนี ชีวภาพ . , Res ., 2012 , 2 ( 1 ): 163-168 ______________________________________________________________________________


165 พร้อมให้บริการทางออนไลน์ที่ www.scholarsresearchlibrary.com
analytical วิธีการ
การกำหนดกิจกรรม protease
protease กิจกรรมก็ถูกกำหนดโดยที่แก้ไขได้กระบวนการที่ใช้วิธีการของ[ 16 ] หนึ่ง
ตามมาตรฐานprotease ชุดถูกกำหนดเป็นจำนวนเงินที่เอนไซม์ของสารบัญข่าวที่ 1 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตรของ tyrosine ต่อ
นาทีตามที่มาตรฐานเงื่อนไข.

โปรตีนโปรตีนสอบวัดได้โดยใช้วิธีการของ[ 17 ]มีวัวอีกเจลมาสก์มอยเจอร์ไรเซอร์ไข่ขาว( BSA )ให้เป็นมาตรฐาน.
ที่ความเข้มข้นของโปรตีนในระหว่างการกรองการศึกษาจะคำนวณจาก absorbance ที่
280 nm .
ปัจจัยที่มีผลต่อการทำงานของ:
ปัจจัยต่อไปนี้จะได้ศึกษาเพื่อขอรับ สภาพ ดีที่สุดสำหรับกิจกรรมของ proteases บางส่วน
บริสุทธิ์ ปัจจัยเหล่านี้รวมถึงผู้ประกอบการกำหนดระยะเวลาการอบความร้อนและ Ph .
ผลของ อุณหภูมิ และค่า pH ใน protease จากเชื้อ SP :
ผลของ อุณหภูมิ ก็ศึกษาจาก 10 ถึง 80 ºC ลงในผลของค่า pH เป็นศึกษาจาก pH 2.0 เป็น
11.9 ( HCL / kcl บัฟเฟอร์สำหรับค่า pH 2.0 ,ถั่วเหลือง/ HCL /บัฟเฟอร์สำหรับค่า pH 2 .5 ถึง 3.5 ;เช่นอะคีเทตบัฟเฟอร์สำหรับค่า pH 4.0
ถึง 5.5 ;ฟอสเฟตบัฟเฟอร์สำหรับค่า pH 6.0 ถึง 7.5 ,ทริสเรทติ้ง/ HCL /บัฟเฟอร์สำหรับค่า pH 8.0 ถึง 9.0 ;ถั่วเหลือง/โซดาไฟ
บัฟเฟอร์สำหรับค่า pH 9.5 ถึง 10.5 และ nahpo 4 /โซดาไฟบัฟเฟอร์สำหรับค่า pH 11.0 ถึง 11.9 )

และผลการประชุมและการแยกตัวออกไปตรวจคัดกรองของจุลชีพการผลิต protease
รูป. 1 แสดงสัตว์ที่ผลิตเอนไซม์ protease โซนที่ชัดเจนโดยรอบนิคมที่เป็นที่
ตามมาตรฐานอยู่ใกล้กับเมืองขึ้นโปรตีนที่มีประโยชน์ ทั้งนี้ขึ้นอยู่กับเขตพื้นที่ความเครียดใน bacilllus
SNR 01 ถูกเลือกสำหรับการศึกษาทดลองเพิ่มเติม.
รูป 1 :โซนหลักด้วยของเชื้อ 01 SNR เหลวสาหร่ายทะเล
ซึ่งจะช่วยในการผลิตและการกรองของ protease จากเชื้อ snr01 :
ที่แยกแหล่งที่มาของเชื้อ SNR 01 สูงสุดพบว่าเอนไซม์การผลิตที่ 24 ชั่วโมง
ในให้เห็นในรูป 2 .ผู้ลงทุนอื่นๆรายงานว่า anthracis เชื้อ S - 44 และเชื้อ
ไม้จำพวกโบตั๋น var. mycoides S -98 ทั้งชะลอความสามารถสูงสุดของพวกเขาเพื่อ biosynthesize proteases ภายใน 24
F