Briefly, the host forrecombinant DN

Briefly, the host for
recombinant DNA manipulations was Escherichia coli
strain NovaBlue (Novagen, Madison, WI, USA), and
cellulolytic enzymes were expressed in the haploid yeast
strains S. cerevisiae MT8-1 [17] and NBRC1440ΔHUWL
[13]. The haploid and diploid S. cerevisiae strains 1440/
cocδBEC3 and MNII/cocδBEC3, respectively, were constructed
as described below.
E. coli transformants were grown in Luria-Bertani
medium (10 g/l tryptone, 5 g/l yeast extract and 5 g/l
NaCl (all supplied by Nacalai Tesque, Kyoto, Japan))
supplemented with 100 μg/mL ampicillin. Yeast transformants
and fusants were screened in synthetic dextrose
(SD) medium (6.7 g/l yeast nitrogen base without
amino acids (Difco Laboratories, Detroit, MI, USA) and
20 g/l glucose (Nacalai Tesque)) or synthetic PASC
(SPASC) medium (6.7 g/l yeast nitrogen base without
amino acids and 10 g/l PASC) supplemented with
appropriate amino acids and nucleic acids. PASC was
prepared from Avicel PH-101 (Fluka Chemie GmbH,
Buchs, Switzerland) as amorphous cellulose [2].Yeast cells were aerobically cultured in yeast/peptone/
dextrose (YPD) medium (10 g/l yeast extract, 20 g/l
peptone (Bacto-Peptone™; Difco Laboratories) and 20
g/l glucose) or molasses medium (5% v/v molasses, 0.5%
(v/v) CSL (Sigma-Aldrich Japan, Tokyo, Japan) and
0.01% v/v antifoam SI (Wako Pure Chemical Industries,
Ltd., Osaka, Japan)). The pH of molasses medium was
adjusted to 5.0 by addition of sodium hydroxide. Aerobic
culture proceeded in 1 liter flasks with 500 mL medium
in a rotary shaker at 200 rpm. Ethanol fermentation
proceeded in YP medium (10 g/l yeast extract and
20 g/l peptone (Bacto-Peptone™; Difco Laboratories))
supplemented with either 20 g/l PASC or with 100 g/l
hot-water-pretreated (HWP) rice straw (Mitsubishi
Heavy Industry, Tokyo, Japan).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สั้น ๆ โฮสต์สำหรับวททช DNA manipulations ถูก Escherichia coliสายพันธุ์ NovaBlue (Novagen เมดิสัน WI สหรัฐอเมริกา), และมีแสดง cellulolytic เอนไซม์ในยีสต์ haploidS. cerevisiae สายพันธุ์ MT8-1 [17] และ NBRC1440ΔHUWL[13] haploid และ diploid S. cerevisiae สายพันธุ์ 1440 /cocδBEC3 และ MNII/cocδBEC3 ตามลำดับ ถูกสร้างขึ้นตามที่อธิบายไว้ด้านล่างTransformants e. coli ถูกปลูก Luria Bertaniปานกลาง (tryptone 10 g/l สารสกัดจากยีสต์ 5 g/l และ 5 g/lNaCl (ทั้งหมดจัดทำ โดย Nacalai Tesque เกียวโต ญี่ปุ่น))เสริม ด้วย 100 μg/mL แอมพิซิลลิน Transformants ยีสต์และ fusants ถูกฉายในสังเคราะห์ขึ้นกลาง (SD) (6.7 g/l ยีสต์ไนโตรเจนฐานโดยกรดอะมิโน (ปฏิบัติ Difco ดีทรอยต์ MI สหรัฐอเมริกา) และกลูโคส 20 g/l (Nacalai Tesque)) หรือสังเคราะห์ PASC(SPASC) กลาง (6.7 g/l ยีสต์ไนโตรเจนฐานโดยเสริมด้วยกรดอะมิโนและ 10 g/l PASC)สมกรดอะมิโนและกรดนิวคลีอิก PASC ถูกเตรียมจาก Avicel PH-101 (Fluka Chemie GmbHBuchs สวิตเซอร์แลนด์) เป็นเซลลูโลสไป [2] เซลล์ยีสต์ได้ aerobically อ่างใน ยีสต์/peptone /ขึ้น (YPD) ปานกลาง (สารสกัดจากยีสต์ 10 g/l, 20 g/lpeptone (Bacto Peptone ™ ห้องปฏิบัติการ Difco) และ 20น้ำตาลใน g/l) หรือกากน้ำตาลกลาง (5% v/v กากน้ำตาล 0.5%(v/v) CSL (Aldrich ซิกญี่ปุ่น โตเกียว ญี่ปุ่น) และ0.01% v/v antifoam ศรี (Wako เพียวเคมีอุตสาหกรรมจำกัด โอซาก้า ญี่ปุ่น)) PH ของตัวกลางกากน้ำตาลได้ปรับปรุงการ 5.0 โดยเพิ่มโซเดียมไฮดรอกไซด์ เต้นแอโรบิกวัฒนธรรมครอบครัวในน้ำ 1 ลิตรกับกลาง 500 mLในเชคเกอร์โรตารี่ที่ 200 รอบต่อนาที การหมักเอทานอลครอบครัวใน YP (สารสกัดจากยีสต์ 10 g/l และpeptone 20 g/l (Bacto Peptone ™ Difco Laboratories))เสริมทั้ง 20 g/l PASC หรือ 100 g/lน้ำร้อนน้ำ-pretreated (HWP) ฟางข้าว (มิตซูบิชิอุตสาหกรรมหนัก โตเกียว ญี่ปุ่น)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สั้น ๆ , โฮสต์สำหรับ
กิจวัตรดีเอ็นเอคือ Escherichia coli
สายพันธุ์ NovaBlue (Novagen เมดิสันวิสคอนซินสหรัฐอเมริกา) และ
เซลลูโลสถูกแสดงในยีสต์เดี่ยว
สายพันธุ์เอส cerevisiae MT8-1 [17] และNBRC1440ΔHUWL
[13] เดี่ยวและซ้ำ S. cerevisiae สายพันธุ์ 1440 /
cocδBEC3และ MNII / cocδBEC3ตามลำดับที่ถูกสร้างขึ้น
ตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง.
อี coli transformants ถูกปลูกใน Luria-Bertani
กลาง (10 g / l tryptone 5 g / l และสารสกัดจากยีสต์ 5 g / l
โซเดียมคลอไรด์ (ทั้งหมดที่จัดทำโดย Nacalai Tesque เกียวโตญี่ปุ่น))
เสริมด้วย 100 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร ampicillin transformants ยีสต์
และ fusants ถูกฉายในเดกซ์โทรสสังเคราะห์
(SD) ปานกลาง (6.7 g / l ยีสต์ฐานไนโตรเจนโดยไม่มี
กรดอะมิโน (Difco ห้องปฏิบัติการ, ดีทรอยต์, มิชิแกนสหรัฐอเมริกา) และ
20 กรัม / ลิตรกลูโคส (Nacalai Tesque)) หรือสังเคราะห์ PASC
(SPASC ) ปานกลาง (6.7 g / l ยีสต์ฐานไนโตรเจนโดยไม่ต้อง
มีกรดอะมิโนและ 10 กรัม / ลิตร PASC) เสริมด้วย
กรดอะมิโนที่เหมาะสมและกรดนิวคลีอิก PASC ถูก
จัดทำขึ้นจาก Avicel PH-101 (Fluka Chemie GmbH,
Buchs วิตเซอร์แลนด์) เป็นเซลลูโลสสัณฐาน [2] .Yeast เซลล์เพาะเลี้ยง aerobically ในยีสต์ / เปปโตน /
เดกซ์โทรส (YPD) ขนาดกลาง (10 กรัม / ลิตรสารสกัดจากยีสต์ 20 กรัม / ลิตร
เปปโตน (Bacto-เปปโตน™; Difco ห้องปฏิบัติการ) และ 20
กรัม / ลิตรกลูโคส) หรือกากน้ำตาลปานกลาง (กากน้ำตาล 5% v / V, 0.5%
(v / v) CSL (Sigma-Aldrich ญี่ปุ่นกรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) และ
0.01% ปริมาตร / ปริมาตร Antifoam SI (Wako อุตสาหกรรมเคมีบริสุทธิ์
จำกัด , Osaka, ญี่ปุ่น)) ค่า pH ของกลางกากน้ำตาลที่ได้รับการ
ปรับให้ 5.0 โดยการเติมโซเดียมไฮดรอกไซ แอโรบิก
วัฒนธรรมดำเนินการใน 1 ขวดลิตรที่มีขนาดกลาง 500 มิลลิลิตร
ในเครื่องปั่นหมุนที่ 200 รอบต่อนาที การหมักเอทานอล
เดินในสื่อ YP (10 กรัม / ลิตรและสารสกัดจากยีสต์
20 กรัม / ลิตรเปปโตน (Bacto-เปปโตน™; Difco ห้องปฏิบัติการ))
เสริมด้วยทั้ง 20 g / l PASC หรือ 100 g / l
ร้อนน้ำปรับสภาพ (HWP ) ฟางข้าว (มิตซูบิชิ
เฮฟวี่อินดัโตเกียวประเทศญี่ปุ่น)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สั้น ๆ , รีคอมบิแนนท์ดีเอ็นเอโฮส

manipulations Escherichia coli สายพันธุ์ novablue ( novagen เมดิสัน , WI , USA ) และ
ทดลองเอนไซม์แสดงออกในยีสต์ S . cerevisiae สายพันธุ์เดี่ยว
mt8-1 [ 17 ] และ nbrc1440 Δ huwl
[ 13 ] โดยเดี่ยว และซ้ำ S . cerevisiae สายพันธุ์ 1440 /
bec3 δ COC mnii / COC และδ bec3 ตามลำดับขึ้น

( ตามที่อธิบายไว้ด้านล่างcoli transformants เติบโตในลุเรียแบร์ตานิ
ขนาด ( 10 กรัม / ลิตร ทริพโทน 5 กรัมต่อลิตรและสารสกัดจากยีสต์เกลือ 5 กรัม / ลิตร
( จัดโดย nacalai tesque , เกียวโต , ญี่ปุ่น )
เติม 100 μ g / ml ยาเพนนิซิลลิน ยีสต์และพลาสมิดลูกผสมรี

เดกซ์โทรสสังเคราะห์ ( SD ) ขนาดกลาง ( 6.7 กรัม / ลิตรยีสต์ไนโตรเจนเบสโดยไม่
กรดอะมิโน ( difco ห้องปฏิบัติการ , ดีทรอยต์ , มิชิแกน , สหรัฐอเมริกา ) และ
20 กรัมต่อลิตรและกลูโคส ( nacalai tesque ) หรือสังเคราะห์ pasc
( spasc ) ขนาดกลาง ( 6.7 กรัม / ลิตรยีสต์ไนโตรเจนฐานโดยไม่
กรดอะมิโนและ 10 กรัม / ลิตร pasc ) เสริมด้วย
กรดอะมิโนที่เหมาะสม และ กรดนิวคลีอิก pasc คือ
เตรียมได้จากเซล ph-101 ( fluka CHEMIE GmbH ,
buchs , สวิตเซอร์แลนด์ ) [ 2 ] ซึ่งเป็นเซลลูโลส เซลล์ยีสต์เป็น aerobically เพาะเลี้ยงยีสต์ / extract dextrose /
( ypd ) กลาง ( 10 กรัมยีสต์สกัด / L20 g / l
เปปโตน ( Bacto เปปโตน™ ; difco ห้องปฏิบัติการ ) และ 20
g / l กลูโคส ) หรือกากน้ำตาลปานกลาง ( 5 % v / v กากน้ำตาล 0.5 %
( v / v ) จำกัด ( ญี่ปุ่นซิกม่า Aldrich ญี่ปุ่น , โตเกียว )
0.01 % v / v antifoam ศรี ( Wako เคมีบริสุทธิ์ อุตสาหกรรม ,
จำกัด โอซาก้า , ญี่ปุ่น ) pH ของกากน้ำตาลปานกลาง
ปรับ 5.0 โดยเพิ่มโซเดียม ไฮดรอกไซด์ วัฒนธรรมในการแอโรบิก
1 ลิตรขวดที่มีขนาดกลาง
500 มิลลิลิตรในเครื่องปั่นหมุนที่ความเร็วรอบ 200 รอบต่อนาที
การหมักเอทานอลในการ YP ปานกลาง ( 10 กรัม / ลิตรและสารสกัดจากยีสต์
20 g / l ตามลำดับ ( Bacto เปปโตน™ ; difco ห้องปฏิบัติการ )
เติมให้ 20 กรัม / ลิตร pasc หรือ 100 กรัม / ลิตร
น้ำร้อนผ่าน ( hwp ) ฟางข้าว ( มิตซูบิชิ
อุตสาหกรรมหนัก , โตเกียว , ญี่ปุ่น .