Cell cultureHuman breast adenocarci

Cell culture

Human breast adenocarcinoma MCF7 (ATCC® HTB-22™) purchased from American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA) was cultured in Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 (Lonza, Basel, Switzerland) supplemented with 10 % fetal bovine serum. Penicillin-streptomycin of 1 % was added during assays to prevent contamination. Cells were maintained in a humidified atmosphere of 5 % CO2 at 37 oC and sub-culturing was performed every three to four days depending on the confluence state.

Proximate analysis

Crude protein content of sclerotial powder was determined by Kjedahl method with boric acid modification (AACC 46-12). The protein conversion factor used was 6.25. Fat and total ash contents were determined based on Sullivan and Carpenter [8]. Total sugar content was determined using AOAC 923.09 method. Soluble and insoluble dietary fibers were measured using AOAC 991.43 method. Total carbohydrates and energy content were calculated by difference. Mineral concentrations were determined based on AOAC 984.27 method. Moisture content was assessed using air-oven method (AACC 44-15A). All AACC and AOAC standard protocols were performed according to AOAC International [9] and AACC International [10].

Preparation of sclerotial extracts

Extraction was carried out in a mass to volume ratio of 1:20 (g/mL), using freeze dried sieved sclerotial powder. Hot water extraction was carried out at 95 to 100 oC for 2 h, cold water extraction was carried out at 4 oC for 24 h, and methanol extraction was carried out by stirring at room temperature for 24 h. Extraction mixture was then filtered through Whatman grade no. 1 filter paper. Water extracts were freeze dried and re-dissolved in Milli-Q water prior to analysis. Methanol extract was evaporated to dryness at 37 oC and re-dissolved in 10 % dimethyl sulfoxide (DMSO).

Antioxidant assays

The antioxidant assays were adapted from our previous study [3]. Total phenolic content (TPC) was determined using Folin-Ciocalteau method [11]. Gallic acid from 10 to 200 μg/mL was used as standard for construction of the calibration curve and the phenolic content was expressed as mg gallic acid equivalents (GAE). Ferric reducing antioxidant power (FRAP) assay was performed according to Benzie and Strain [12]. 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH•) radical scavenging activity was measured according to Cos et al. [13]. 2,2-azinobis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid (ABTS•+) radical scavenging activity was determined according to Re et al. [14]. Superoxide anion (SOA) radical scavenging activity in the phenazine methoxysulfate (PMS)-NADH superoxide generating system was determined according to Siddhuraju and Becker [15]. Extracts were tested at concentration from 1 to 16 mg/mL in series of double dilution for FRAP, DPPH•, and ABTS•+ radical scavenging assays while for SOA radical scavenging assay, extracts were tested at concentration from 62.5 to 1000 µg/mL in series of double dilution. Trolox was used as standard for construction of the calibration curve for DPPH•, ABTS•+, and SOA radical scavenging assays and the results were expressed as mmol Trolox equivalents (TE). Quercetin and rutin served as positive controls for all assays.

Cell-based SOA radical scavenging assay

Monolayer MCF7 cells grown in 96-well plate were exposed to 0.625 U/L xanthine oxidase and 0.5 mM xanthine for 1 h in the presence of L. tigris extract from 2 to 125 µg/mL in series of double dilution. Reaction mixtures were then aspirated and cells were cultured in fresh growth medium for an additional 72 h prior to cell viability assessment by MTT assay. MTT solution (5 mg/mL in phosphate buffered saline, PBS) was added subsequently at 20 µL per well followed by additional incubation at 37 oC for 4 h until purple formazan crystals developed. Total solutions were aspirated and DMSO (200 μL per well) was added to dissolve the formazan. Absorbance at 570 nm was measured. Quercetin and rutin served as positive controls while PBS served as the negative control. The effects of L. tigris sclerotial extracts on the viability of MCF7 in relation to PBS was determined.

Statistical analysis

Results were expressed as mean ± standard deviation (SD), unless otherwise stated. Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) version 17.0 (SPSS Inc., Chicago, IL) with one-way ANOVA followed by the LSD's post hoc test for multiple comparisons was used to compare mean values. A p value of less than 0.05 was considered as statistically significant.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เพาะเลี้ยงเซลล์มะเร็งชนิดต่อมเต้านมมนุษย์ MCF7 (ATCC ®™ HTB-22) ซื้อจากชนิดอเมริกันวัฒนธรรมชุด (ATCC มานาสซาส VA) มีอ่างใน Roswell Park อนุสรณ์สถาบัน (RPMI) 1640 (Lonza บาเซิล สวิตเซอร์แลนด์) เสริม ด้วย 10% ซีรั่มวัวและทารกในครรภ์ มีเพิ่มยาเพนนิซิลลิน streptomycin 1% ระหว่าง assays เพื่อป้องกันการปนเปื้อน เซลล์ถูกเก็บในบรรยากาศ humidified 5% CO2 ที่ 37 องศาเซลเซียส และย่อย culturing ทำทุก ๆ 3-4 วันขึ้นอยู่กับสถานะบรรจบเคียงวิเคราะห์โปรตีนหยาบของผง sclerotial ที่ถูกกำหนด โดยวิธี Kjedahl กับกรด boric แก้ไข (AACC 46-12) ตัวแปลงโปรตีนที่ใช้เป็น 6.25 เถ้าไขมัน และรวมเนื้อหาถูกกำหนดตามซัลลิแวนและช่างไม้ [8] น้ำตาลรวมเนื้อหาที่ถูกกำหนดโดยใช้วิธี AOAC 923.09 เส้นใยอาหารที่ละลายน้ำ และไม่ละลายน้ำถูกวัดโดยใช้วิธี AOAC 991.43 คาร์โบไฮเดรตทั้งหมดและเนื้อหาพลังงานคำนวณได้จากความแตกต่าง ความเข้มข้นแร่ได้กำหนดตามวิธี AOAC 984.27 ชื้นถูกประเมินโดยใช้เตาอบอากาศวิธี (AACC 44-15A) ทั้งหมด AACC และ AOAC โพรโทคอลมาตรฐานได้ปฏิบัติตาม AOAC นานาชาติ [9] และ AACC นานาชาติ [10]การเตรียมสารสกัดจาก sclerotialทำแยกออกในมวลปริมาตรอัตราส่วน 1:20 (g/mL), ใช้แช่แข็งแห้งผง sieved sclerotial แยกน้ำร้อนถูกดำเนิน 95 ถึง 100 องศาเซลเซียสสำหรับ h 2 เย็นสกัดน้ำได้รับการดำเนินที่ 4 องศาเซลเซียสสำหรับ 24 ชม และแยกเมทานอลถูกดำเนินการ โดยการกวนส่วนผสมสกัดที่อุณหภูมิห้องใน 24 h. ถูกแล้วกรองโดยใช้กระดาษกรอง Whatman ชั้นประถมศึกษาปีที่ ๑ สารสกัดจากน้ำถูกแช่แข็งแห้ง และการละลายในน้ำ Q ก่อนวิเคราะห์ สารสกัดเมทานอลหายไปกับความแห้งกร้านที่ 37 องศาเซลเซียส และการละลายใน 10% dimethyl sulfoxide (DMSO)Assays ต้านอนุมูลอิสระAssays ต้านอนุมูลอิสระถูกดัดแปลงจากการศึกษาก่อนหน้านี้ของเรา [3] รวมเนื้อหาฟีนอ (สิ่งทอ) ถูกกำหนดโดยใช้วิธี Folin-Ciocalteau [11] กรด gallic 10 200 μg mL ถูกใช้เป็นมาตรฐานสำหรับการก่อสร้างโค้งเทียบและฟีนอเนื้อหาถูกแสดงเป็นมิลลิกรัมเทียบเท่ากรด gallic (GAE) เฟอร์ลดอนุมูลอิสระวิเคราะห์ (FRAP) ที่ดำเนินการตาม Benzie และต้องใช้ [12] 1.1 ฟีนิลได-2-picrylhydrazyl (DPPH•) กิจกรรม scavenging รุนแรงถูกวัดตาม Cos et al. [13] 2,2-azinobis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic กรด (ABTS• +) รุนแรง scavenging กิจกรรมที่ถูกกำหนดตาม Re et al. [14] ซูเปอร์ออกไซด์ anion (SOA) รุนแรง scavenging กิจกรรมใน methoxysulfate phenazine (PMS) -ซูเปอร์ออกไซด์ NADH ที่สร้างระบบกำหนดตาม Siddhuraju และ Becker [15] ทดสอบสารสกัดที่ความเข้มข้นตั้งแต่ 1 ถึง 16 mg/mL ในชุดคู่เจือจางสำหรับ FRAP, DPPH• และ ABTS• + รุนแรง scavenging assays ขณะสำหรับ SOA รุนแรง scavenging assay ทดสอบสารสกัดที่เข้มข้นจาก 62.5 ไมโครกรัมเป็นเครื่อง 1000/mL ในชุดคู่เจือจาง Trolox ถูกใช้เป็นมาตรฐานสำหรับการก่อสร้างโค้งเทียบสำหรับ DPPH•, ABTS• + และ SOA รุนแรง scavenging assays และผลลัพธ์ถูกแสดงเป็น mmol Trolox เทียบเท่า (TE) Rutin และ quercetin ผู้ทรงควบคุม assays ทั้งหมดบวกใช้เซลล์ SOA รุนแรง scavenging assayเซลล์ MCF7 monolayer โตในจานดี 96 ถูกสัมผัสกับ 0.625 U/L xanthine oxidase และ xanthine 0.5 mM สำหรับ h 1 ในต่อหน้าของ L. tigris แยก 2 ไมโครกรัมเป็นเครื่อง 125 mL ในชุดคู่เจือจาง น้ำยาผสมปฏิกิริยาถูก aspirated แล้ว ทางเซลล์ได้อ่างในเชื้อสดสำหรับการ h 72 เพิ่มเติมก่อนเซลล์ชีวิตประเมิน โดย MTT assay โซลูชัน MTT (5 mg/mL ในน้ำเกลือฟอสเฟต buffered, PBS) ถูกเพิ่มในภายหลังที่ 20 µL ต่อตาม ด้วยเติมบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสสำหรับ 4 h จนผลึกสีม่วง formazan พัฒนาดีขึ้น โซลูชั่นรวมถูก aspirated และ DMSO (200 μL ต่อดี) เพิ่มการละลาย formazan Absorbance ที่ 570 nm ที่วัด Rutin และ quercetin เสิร์ฟเป็นบวกควบคุมขณะ PBS ผู้ทรงควบคุมลบ ผลของสารสกัดจาก sclerotial L. tigris ในชีวิตของ MCF7 เกี่ยวกับ PBS ที่ถูกกำหนดวิเคราะห์ทางสถิติผลลัพธ์ที่แสดงเป็นเฉลี่ย±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD), เว้นแต่จะระบุเป็นอย่างอื่น แพคเกจทางสถิติสำหรับการสังคมศาสตร์ (โปรแกรม) เวอร์ชัน 17.0 (โปรแกรม Inc. ชิคาโก IL) ด้วยการวิเคราะห์ความแปรปรวนแบบทางเดียวตาม ด้วยการทดสอบ post hoc ของ LSD เปรียบเทียบหลายที่ใช้เปรียบเทียบค่าเฉลี่ย ค่า p น้อยกว่า 0.05 ของถูกพิจารณาอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติที่

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การเพาะเลี้ยงเซลล์มะเร็งเต้านมของมนุษย์ MCF7 (ATCC® HTB-22 ™) ที่ซื้อมาจากชาวอเมริกันประเภทวัฒนธรรมสะสม (ATCC ซา, VA) ได้รับการเพาะเลี้ยงในรอสเวลปาร์คอนุสรณ์สถาบัน (RPMI) 1640 (Lonza, บาเซิล, สวิตเซอร์) เสริมด้วย 10% ของทารกในครรภ์ ซีรั่มวัว Penicillin-streptomycin 1% ถูกเพิ่มเข้ามาในระหว่างการตรวจเพื่อป้องกันการปนเปื้อน เซลล์ที่ถูกเก็บรักษาไว้ในชั้นบรรยากาศของ CO2 ความชื้น 5% ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสและย่อยเพาะเลี้ยงได้รับการดำเนินการทุก 3-4 วันขึ้นอยู่กับรัฐบรรจบ. พร็อกซิวิเคราะห์เนื้อหาโปรตีนผงโครงสร้าง sclerotium ถูกกำหนดโดยวิธีการ Kjedahl กับการปรับเปลี่ยนกรดบอริก (AACC 46-12) ปัจจัยการแปลงใช้เป็นโปรตีน 6.25 ไขมันและเถ้าทั้งหมดถูกกำหนดขึ้นอยู่กับซัลลิแวนและไม้ [8] ปริมาณน้ำตาลทั้งหมดถูกกำหนดโดยใช้วิธี AOAC 923.09 เส้นใยอาหารที่ละลายน้ำและไม่ละลายน้ำได้รับการวัดโดยใช้วิธี AOAC 991.43 คาร์โบไฮเดรตรวมและปริมาณพลังงานนี้จะถูกคำนวณจากความแตกต่าง ความเข้มข้นของแร่คํานวณขึ้น AOAC 984.27 วิธี ความชื้นได้รับการประเมินโดยใช้วิธีการอบ-air (AACC 44-15A) ทั้งหมด AACC และ AOAC โปรโตคอลมาตรฐานได้ดำเนินการตาม AOAC นานาชาติ [9] และ AACC ระหว่างประเทศ [10]. การเตรียมสารสกัดจากโครงสร้าง sclerotium สกัดได้ดำเนินการในมวลต่อปริมาตรของ 01:20 (กรัม / มิลลิลิตร) ใช้แช่แข็งแห้งร่อน ผงโครงสร้าง sclerotium สกัดน้ำร้อนได้ดำเนินการที่ 95-100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมงสกัดน้ำเย็นได้ดำเนินการที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงและการสกัดเมทานอลได้ดำเนินการโดยการกวนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ส่วนผสมสกัดถูกกรองแล้วผ่านเกรด Whatman ไม่มี 1 กระดาษกรอง สารสกัดจากน้ำที่ถูกแช่แข็งแห้งและกลับมาละลายในน้ำพันคิวก่อนที่จะมีการวิเคราะห์ สารสกัดจากเมทานอลได้รับการระเหยจนแห้งที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสและอีกครั้งที่ละลายใน 10% dimethyl sulfoxide (DMSO). สารต้านอนุมูลอิสระการตรวจสอบตรวจสารต้านอนุมูลอิสระที่ถูกดัดแปลงมาจากการศึกษาก่อนหน้านี้ [3] เนื้อหาฟีนอลรวม (RDC) ถูกกำหนดโดยวิธี Folin-Ciocalteau [11] กรดแกลลิค 10-200 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรถูกใช้เป็นมาตรฐานสำหรับการก่อสร้างของเส้นโค้งการสอบเทียบและเนื้อหาฟีนอลได้รับการแสดงเป็นมิลลิกรัมเทียบเท่ากรดแกลลิ (GAE) Ferric ลดอำนาจสารต้านอนุมูลอิสระ (FRAP) ในการตรวจที่ได้ดำเนินการตาม Benzie และสายพันธุ์ [12] 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH •) กิจกรรมต้านอนุมูลวัดตาม Cos และคณะ [13] 2,2-azinobis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic กรด (ABTS • +) ต้านอนุมูลอิสระได้รับการกำหนดขึ้นมาตามเรื่องและคณะ [14] ไอออน superoxide (SOA) ต้านอนุมูลอิสระใน Phenazine methoxysulfate (PMS) -NADH ระบบผลิต superoxide ถูกกำหนดตาม Siddhuraju และเบกเกอร์ [15] สารสกัดจากได้มีการทดสอบที่มีความเข้มข้น 1-16 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรในชุดของการลดสัดส่วนคู่สำหรับ FRAP, DPPH •และ ABTS • + การตรวจต้านอนุมูลขณะที่สำหรับการทดสอบขับ SOA อนุมูลอิสระสารสกัดจากได้มีการทดสอบที่มีความเข้มข้น 62.5-1000 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรใน ชุดของการลดสัดส่วนคู่ Trolox ถูกใช้เป็นมาตรฐานสำหรับการก่อสร้างของเส้นโค้งการสอบเทียบสำหรับ DPPH •, • ABTS + และ SOA การตรวจต้านอนุมูลและผลที่ได้รับการแสดงเป็น mmol เทียบเท่า Trolox (TE) Quercetin และรูตินทำหน้าที่ควบคุมเป็นบวกสำหรับการตรวจทั้งหมด. มือถือที่ใช้ทดสอบต้านอนุมูล SOA monolayer เซลล์ MCF7 ปลูกในแผ่น 96 หลุมได้สัมผัสกับ 0.625 U / L เอนไซม์และ 0.5 มิลลิ xanthine เป็นเวลา 1 ชั่วโมงในการปรากฏตัวของแอลไทกริส สารสกัดจาก 2-125 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรในชุดของการลดสัดส่วนคู่ ผสมปฏิกิริยาถูกสำลักแล้วและเซลล์เพาะเลี้ยงในอาหารที่สดใหม่สำหรับการเจริญเติบโตเพิ่มอีก 72 ชั่วโมงก่อนที่จะมีการประเมินความมีชีวิตเซลล์ด้วยวิธี MTT วิธีการแก้ปัญหา MTT (5 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรในน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์พีบีเอส) ถูกเพิ่มเข้ามาในเวลาต่อมา 20 ไมโครลิตรต่อตามมาอย่างดีจากการบ่มเพิ่มเติมที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4 ชั่วโมงจนผลึกสีม่วง formazan พัฒนา การแก้ปัญหาทั้งหมดได้รับการสำลักและ DMSO (200 ไมโครลิตรต่อกัน) ถูกเพิ่มเข้ามาในการละลาย formazan ดูดกลืนแสงที่ 570 นาโนเมตรวัด Quercetin และรูตินทำหน้าที่ควบคุมเป็นบวกในขณะที่พีบีเอสทำหน้าที่เป็นผู้ควบคุมเชิงลบ ผลกระทบของสารสกัดจากแอ tigris โครงสร้าง sclerotium ในศักยภาพของ MCF7 ในความสัมพันธ์กับพีบีเอสถูกกำหนด. การวิเคราะห์ทางสถิติผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็นค่าเฉลี่ย±ค่าเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD) ยกเว้นที่ระบุไว้เป็นอย่างอื่น แพคเกจการทางสถิติสำหรับสังคมศาสตร์ (SPSS) เวอร์ชัน 17.0 (SPSS Inc. , Chicago, IL) ด้วย-way ANOVA ตามด้วยการโพสต์ LSD ทดสอบเฉพาะกิจสำหรับการเปรียบเทียบหลายถูกใช้ในการเปรียบเทียบค่าเฉลี่ย ค่า P น้อยกว่า 0.05 ได้รับการพิจารณาเป็นนัยสำคัญทางสถิติ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เซลล์วัฒนธรรม

มนุษย์เต้านมทั้งสอง mcf7 ( ATCC ® htb-22 ™ ) ซื้อจากประเภทของคอลเลกชันวัฒนธรรมอเมริกันและซาส , VA ) เลี้ยงในสถาบันรอสเวลล์ ( RPMI 1640 Memorial Park ) ( Power , Basel , Switzerland ) เสริมด้วย 10% เซรั่มและทารก ยา streptomycin 1 % เพิ่มในระหว่าง ) เพื่อป้องกันการปนเปื้อนเซลล์มีการรักษาในบรรยากาศของ CO2 humidified 5% ที่ 37 องศาเซลเซียสและย่อยอาหารได้ทุกสามถึงสี่วัน ขึ้นอยู่กับบรรจบรัฐ .



ผลการวิเคราะห์ปริมาณโปรตีนหยาบของผงถูกกำหนดจากระยะ kjedahl วิธีแก้ไขกับกรดบอริก ( AACC 46-12 ) โปรตีนแปลงปัจจัยใช้เป็น 6.25 .ไขมันและเถ้าทั้งหมดถูกยึด ซัลลิแวนช่างไม้ [ 8 ] ปริมาณน้ำตาลทั้งหมด ตัดสินใจไม่ 923.09 โดยใช้วิธี ที่ไม่ละลายน้ำ และใยอาหารชนิดไม่ 991.43 โดยใช้วิธี รวมเนื้อหาคาร์โบไฮเดรตและพลังงานที่คำนวณจากผลต่าง ความเข้มข้นของแร่ได้ตัดสินใจบนพื้นฐาน 984.27 ไม่วิธีความชื้นและใช้เตาอบลมร้อน ( AACC 44-15a ) และโปรโตคอลมาตรฐานทั้งหมด AACC ไม่ได้ตามองศา เซลเซียส นานาชาติ [ 9 ] และ [ นานาชาติ AACC 10 ] .



เตรียมสารสกัดระยะทำการในมวลปริมาณอัตราส่วน 1 : 20 ( g / ml ) ใช้ผงแห้งแช่แข็งอีกครั้ง ระยะ . การสกัดน้ำร้อนถูกหามออกที่ 95 - 100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมงการสกัดเย็นเป็นเนินที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง และมีการแยกเมทานอลโดยกวนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 24 ชั่วโมง แล้วกรองผ่านการสกัดส่วนผสม whatman เกรด 1 ไส้กรองกระดาษ สารสกัดน้ำได้แห้งแช่แข็งและละลายในน้ำ milli-q ก่อนการวิเคราะห์เมทานอลเป็นระเหยแห้งที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส และจะละลายใน 10 % เต๊ะ ( DMSO )

)

สารต้านอนุมูลอิสระ สารต้านอนุมูลอิสระสามารถดัดแปลงจากการศึกษา [ 3 ] ปริมาณฟีนอลิกทั้งหมด ( TPC ) คือการพิจารณาวิธีการ folin ciocalteau [ 11 ]เพิ่มขึ้นจาก 10 ถึง 200 μ g / ml มาใช้เป็นมาตรฐานสำหรับการสอบเทียบและปริมาณฟีนอลโค้งจะแสดงเป็นมิลลิกรัมเพิ่มขึ้นเทียบเท่า ( เก ) สารต้านอนุมูลอิสระลดพลังงานเฟอริค ( VDO ) การทดสอบการปฏิบัติตาม benzie และความเครียด [ 12 ] 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl ( dpph A4 ) เป็นตัวเร่งปฏิกิริยากิจกรรมวัดตามเพราะ et al . [ 13 ] 22-azinobis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid ( Abbr A4 ) เป็นตัวเร่งปฏิกิริยาได้กำหนดกิจกรรมตาม re et al . [ 14 ] Superoxide anion ( SOA ) เป็นตัวเร่งปฏิกิริยา กิจกรรมใน phenazine methoxysulfate ( PMS ) - การสร้างระบบซุปเปอร์ถูกกำหนดตาม siddhuraju และเบคเกอร์ [ 15 ]สารสกัดจากข้อมูลที่ความเข้มข้น 1 ถึง 16 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรในชุดของการเจือจาง 2 VDO dpph - , , - ) เป็นตัวเร่งปฏิกิริยา และ Abbr ในขณะที่ SOA เป็นตัวเร่งปฏิกิริยาโดยทดสอบจากสารสกัดที่ความเข้มข้น 62.5 1000 µ g / ml ในชุดของคู่เจือจาง สาร ที่ใช้เป็นมาตรฐานสำหรับการสอบเทียบโค้ง dpph Abbr - - , ,SOA เป็นตัวเร่งปฏิกิริยาและวิธีการและผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็นมิลลิโมลสารเทียบเท่า ( TE ) quercetin และรูตินทำหน้าที่เป็นบวกสำหรับการควบคุมทั้งหมด ) .

เซลล์ตาม SOA เป็นตัวเร่งปฏิกิริยาต่อ

อย่าง mcf7 เซลล์ที่ปลูกใน 96 ดีแผ่นตาก 0.625 U / L ของเอนไซม์และ 0.5 มม. แซนธีน เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ในการปรากฏตัวของ Lพิภาคสกัดจาก 2 µ 125 กรัมต่อมิลลิลิตร ในชุดของคู่เจือจาง ผสมปฏิกิริยาแล้วสูดลมหายใจเข้า และเซลล์เพาะเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อ สดอีก 72 ชั่วโมงก่อนการประเมินความมีชีวิตของเซลล์โดย MTT assay พบ MTT โซลูชั่น ( 5 มก. / มล. ในเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ,พีบีเอส ) ถูกเพิ่มเข้ามาในภายหลังที่ 20 µผมต่อแล้วตามด้วยการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4 ชั่วโมง เพิ่มเติม จนถึงสีม่วงเหลือเชื่อขึ้น โซลูชั่นทั้งหมดถูกลม DMSO ( 200 และμผมต่อด้วย ) ถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อละลายปฏิบัติการ . การดูดกลืนแสงที่ 570 nm เป็นวัด quercetin และรูตินทำหน้าที่ควบคุมบวกในขณะที่ PBS ทำหน้าที่ควบคุมลบ ผลของ Lสารสกัดจากระยะเสือกต่อความมีชีวิตของ mcf7 ในความสัมพันธ์กับ PBS ตั้งใจ



ผลสถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลซึ่งหมายถึง±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน ( SD ) , เว้นแต่จะระบุไว้เป็นอย่างอื่น โปรแกรมสำเร็จรูปสำหรับการวิจัยทางสังคมศาสตร์ ( SPSS ) เวอร์ชั่น 17.0 ( SPSS Inc , ชิคาโก , อิลลินอยส์ ) ด้วยการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว ตามด้วยของ LSD Post Hoc ทดสอบเปรียบเทียบพหุคูณ ถูกใช้ในการเปรียบเทียบค่าเฉลี่ยเลขคณิต