2.7. Isolation and quantification of EPS
The isolation and purification of EPS from fermented skim milk
samples were performed according to a protocol described previously
(Prasanna et al., 2011). The fermented milk sample was mixed with
12% (v/v) of 80% (w/v) trichloroacetic acid (TCA) and stored at 4 °C
for 24 h, for the precipitation of proteins. The samples were centrifuged
at 25,000×g for 30 min at 4 °C. The supernatant was mixed
with two volumes of chilled absolute ethanol, and stored at 4 °C for
24 h for the precipitation of EPS. The precipitate was separated by
centrifugation at 25000×g for 30 min, at 4 °C. The pellet containing
the EPS was dissolved in ultrapure water and dialysed against distilled
water at 4 °C for 2 days, with two water changes per day,
using a dialysis membrane tube (molecular mass cut-off value
12,400 Da, Sigma-Aldrich, UK). The EPS-containing solution was
then freeze dried (IEC Lyoprep - 3000). The freeze dried samples
were stored at −20 °C for further analysis.
2.7 การแยกและปริมาณของกำไร
การแยกและการทำให้บริสุทธิ์ของกำไรจากหางนมหมัก
ตัวอย่างได้ดำเนินการตามโปรโตคอลอธิบายไว้ก่อนหน้า
(Prasanna et al., 2011) ตัวอย่างนมหมักผสมกับ
12% (v / v) 80% (w / v) กรดไตรคลอโร (TCA) และเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส
เป็นเวลา 24 ชั่วโมงสำหรับการตกตะกอนของโปรตีน ตัวอย่างที่ถูกหมุนเหวี่ยง
ที่ 25,000 ×กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่ 4 ° C ใสผสม
กับสองเล่มของเอทานอลแน่นอนแช่เย็นและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา
24 ชั่วโมงสำหรับการตกตะกอนของกำไรต่อหุ้น ตะกอนที่ถูกแยกจากกันโดย
การหมุนเหวี่ยงที่ 25,000 ×กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่ 4 ° C เม็ดที่มี
กำไรต่อหุ้นก็เลือนหายไปในน้ำบริสุทธิ์และไตกับกลั่น
น้ำที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 วันกับสองการเปลี่ยนแปลงของน้ำต่อวัน
โดยใช้หลอดเยื่อฟอกไต (มวลโมเลกุลค่าตัด
12,400 ดา, Sigma-Aldrich, สหราชอาณาจักร ) วิธีการแก้ปัญหาที่มีกำไรต่อหุ้นได้รับ
แล้วแช่แข็งแห้ง (IEC Lyoprep - 3000) แช่แข็งตัวอย่างแห้ง
ถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสสำหรับการวิเคราะห์ต่อไป
การแปล กรุณารอสักครู่..
