Extraction and isolation procedures

Extraction and isolation procedures

The air-dried stem bark of Z. rhoifolium was pulverized in a wiley mill to powder form (1 Kg) and extracted four times with MeOH at room temperature. At this stage, the formation of an insoluble precipitate was observed, which was recovered by filtration (IP, 2.5 g) and saved for later analysis. The MeOH extract was filtered and concentrated in vacuum to obtain a crude extract (ME, 150 g). Part of the residual syrup (50 g) was dissolved in water and extracted with n-hexane (HF, 6.5 g), CH2Cl2 (DCM, 2.5 g), EtOAc (AF, 2.5 g) and n-butanol (BuF, 7.5 g), successively. The DCM fraction (2.0 g) containing divers Dragendorff's-positive spots in TLC, was chromatographed over silica gel (150 g) using CH2Cl2 with an increasing amount of MeOH, to prepare fractions 1–30 (200 mL/fraction). Fraction 3 (CH2Cl2, 100%), consisting of one alkaloid, was concentrated in vacuum to give skimmianine (1, 10.5 mg). Fraction 6 (CH2Cl2-MeOH, 99[ratio]1), consisting of two alkaloids, was concentrated in vacuum (30.0 mg) and submitted to preparative TLC (CH2Cl2: MeOH, 99[ratio]1) to yield γ-fagarine (3, 8.0 mg) and 8-hydroxy-4, 7-dimetoxy-furoquinoline (2, 9.0 mg). Fraction 9 (CH2Cl2: MeOH 99[ratio]1), consisting of one alkaloid, was concentrated in vacuum to give zanthoxyline (7, 6.0 mg). Fractions 12–13 (CH2Cl2: MeOH, 98[ratio]2) were combined (104.0 mg) and resubmitted to a silica gel column (10 g) eluted with CH2Cl2 containing increasing amounts of MeOH (up to 3%) to give dihydrochelerythrine (4, 21.0 mg) and dihydroavicine (5, 32.0 mg). Fractions 25–26 (CH2Cl2: MeOH, 80[ratio]20) were combined (287.0 mg) and crystallized from MeOH-diethyl ether to give chelerythrine (10, 150.0 mg). The insoluble precipitate (IP, 0.5 g), was dissolved in MeOH: H2O and loaded onto a 7.5×12 cm C-18 column. The column was eluted with MeOH: H2O (60[ratio]40 to 100[ratio]0). Fraction 3 and 4, consisting of one alkaloid, were combined (50.0 mg) and submitted to preparative TLC (EtOAc: MeOH, 2[ratio]3) to give magnoflorine (13, 10.0 mg), not analyzed in this work.

Part of the MeOH extract (70.0 g) was dissolved in H2O (100 mL) and acidified with 2M HCl to pH 2–3. After exhaustive extraction with n-hexane and Et2O, the acidic solution was made basic with NH4OH to pH 8–9 and extracted with DCM (5×100 mL) to yield the basic extract (4.5 g). The DCM basic fraction (4.0 g) was chromatographed on a silica gel column (230–400 mesh, 320 g) and eluted with CH2Cl2: MeOH mixture to prepare fractions 1–90. Fractions 3–8, obtained from CH2Cl2: MeOH 0.5% and consisting of three alkaloids, were combined (90.0 mg) and submitted to preparative TLC (CH2Cl2: MeOH, 99[ratio]1, two elutions) to yield skimmianine (1, 20.2 mg), γ-fagarine (3, 11.0 mg) and zanthoxyline (7, 10.0 mg). Fraction 9 (CH2Cl2: MeOH 0.5%) was evaporated to give 8-hydroxy-4, 7-dimetoxy-furoquinoline (2, 12.0 mg). Fractions 11–20 obtained from CH2Cl2: MeOH 1%, were combined (350.0 mg) and resubmitted to a silica gel column (30 g) eluted with CH2Cl2 containing increasing amounts of MeOH (up to 3%) to give dihydrochelerythrine (4, 30.0 mg), dihydroavicine (5, 12.0 mg), rhoifoline A (8, 21.0 mg) and rhoifoline B (9, 19.5 mg). Fraction 21, obtained from CH2Cl2: MeOH, 98[ratio]2, was evaporated to give bocconoline (6, 4.5 mg). Fractions 35–38 obtained from CH2Cl2: MeOH, 80[ratio]20, and consisting of one alkaloid (TLC), were combined and concentrated in vacuum to give chelerythrine (10) after crystallization from Et2O-MeOH (120.0 mg). Fractions 45–48 obtained from CH2Cl2: MeOH, 70[ratio]30, which contained two Dragendorff's-positive spots in TLC, were combined and concentrated in vacuum (129.0 mg) and submitted to a silica gel column (230–400 mesh) using EtOAc: MeOH (100[ratio]0 →95[ratio]5 →90[ratio]10→80[ratio]20) to give avicine (11, 25.0 mg) and nitidine (12, 22.0 mg).

Alkaloids 1, 2, 3, 11, 12 and 13 were identified by comparison of their spectral data (EIMS, 1H- and 13C-NMR) with reported values in the literature [21], [30]–[32]. Alkaloids 4–10 were identified by direct comparison of TLC with authentic samples of zanthoxyline, dihydrochelerythrine, rhoifoline A, rhoifoline B, bocconoline, chelerythrine, respectively, and by comparison of their spectral data (1H- and 13C-NMR) with reported values in the literature [21].

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ขั้นตอนการสกัดและแยกเปลือกก้าน air-dried ของ rhoifolium z.คลุกในโรงสี wiley เพื่อรูปแบบผง (1 กิโลกรัม) และแยกสี่เท่ากับทานอที่อุณหภูมิห้อง ในขั้นตอนนี้ การก่อตัวของ precipitate การละลายถูกสังเกต การกู้คืน โดยการกรอง (IP, 2.5 g) และบันทึกสำหรับวิเคราะห์ในภายหลัง สารสกัดจากทานอกรอง และเข้มข้นในสุญญากาศเพื่อให้ได้สารสกัดหยาบ (ME, 150 กรัม) ส่วนของน้ำเชื่อมที่เหลือ (50 กรัม) ที่ละลายในน้ำ และสกัด ด้วยเอ็นเฮกเซน (HF, 6.5 g), CH2Cl2 ห่วง 2.5 g), EtOAc (AF, 2.5 g) และเอ็นบิวทานอ (BuF, 7.5 g), ติด ๆ กัน เศษห่วง (2.0 g) ประกอบด้วยจุดที่นักดำน้ำของ Dragendorff บวกใน TLC ถูก chromatographed กว่าเจล (150 กรัม) ใช้ CH2Cl2 มีจำนวนเพิ่มขึ้นทานอ เตรียมเศษ 1-30 (200 มล. / เศษ) 3 (CH2Cl2, 100%), เศษส่วนประกอบด้วยอัลคาลอยด์ที่หนึ่ง เข้มข้นในสุญญากาศให้ skimmianine (1, 10.5 มิลลิกรัม) เศษ 6 (CH2Cl2-ทานอ 99[ratio]1) ประกอบด้วยสอง alkaloids เข้มข้นในสูญญากาศ (30.0 มิลลิกรัม) และส่งไป preparative TLC (CH2Cl2: ทานอ 99[ratio]1) γ-fagarine (3, 8.0 มิลลิกรัม) และ 8-hydroxy-4, 7-dimetoxy-furoquinoline (2, 9.0 มิลลิกรัม) เศษ 9 (CH2Cl2: ทานอ 99[ratio]1) ประกอบด้วยอัลคาลอยด์หนึ่ง เข้มข้นในสุญญากาศให้ zanthoxyline (7, 6.0 มิลลิกรัม) ส่วน 12-13 (CH2Cl2: ทานอ 98[ratio]2) ได้รวม (104.0 มิลลิกรัม) และส่งไปยังคอลัมน์ซิลิก้าเจล (10 กรัม) eluted มียอดเพิ่มขึ้นมี CH2Cl2 ของทานอ (ถึง 3%) dihydrochelerythrine (4, 21.0 มิลลิกรัม) และ dihydroavicine (5, 32.0 มิลลิกรัม) ส่วน 25-26 (CH2Cl2: ทานอ 80[ratio]20) ได้รวม (287.0 มิลลิกรัม) และตกผลึกจากอีเทอร์ diethyl ทานอ chelerythrine (10, 150.0 มิลลิกรัม) ให้ Precipitate ละลาย (IP, 0.5 g), ถูกละลายในทานอ: H2O และโหลดลงในคอลัมน์ 7.5 × 12 ซม. C-18 คอลัมน์ถูก eluted กับทานอ: H2O (60 [อัตราส่วน] 40 ที่ 100[ratio]0) ส่วนที่ 3 และ 4 ประกอบด้วยอัลคาลอยด์หนึ่ง ถูกรวม (50.0 mg) และส่งไปที่ preparative TLC (EtOAc: ทานอ 2[ratio]3) magnoflorine (13, 10.0 มิลลิกรัม), ไม่มีวิเคราะห์ในการทำงานนี้ให้ส่วนของสารสกัดทานอ (70.0 กรัม) ที่ละลายใน H2O (100 mL) และ acidified กับ 2 M HCl เพื่อค่า pH 2-3 หลังจากหมดแรงสกัดด้วยเอ็นเฮกเซนและ Et2O โซลูชันเปรี้ยวถูกทำพื้นฐานกับ NH4OH ค่า pH 8-9 และสกัด ด้วย DCM (5 × 100 มล.) ให้การดึงข้อมูลพื้นฐาน (4.5 g) Chromatographed บนคอลัมน์ซิลิก้าเจล (230 – 400 ตาข่าย ก.) และ eluted กับ CH2Cl2 DCM พื้นฐานเศษ (4.0 กรัม): ทานอผสมเตรียมเศษ 1-90 เศษ 3 – 8 รับจาก CH2Cl2: ทานอ 0.5% และประกอบด้วยสาม alkaloids ถูกรวม (90.0 มิลลิกรัม) และส่งไปที่ preparative TLC (CH2Cl2: ทานอ 99 [อัตราส่วน] 1, 2 elutions) กับ skimmianine (1, 20.2 มิลลิกรัม), γ-fagarine (3, 11.0 มิลลิกรัม) และ zanthoxyline (7, 10.0 มิลลิกรัม) เศษ 9 (CH2Cl2: ทานอ 0.5%) หายไปให้ 8-hydroxy-4, 7-dimetoxy-furoquinoline (2, 12.0 มิลลิกรัม) ส่วน 11-20 ได้จาก CH2Cl2: ทานอ 1% ถูกรวม (350.0 มิลลิกรัม) และส่งไปยังคอลัมน์ซิลิก้าเจล (30 กรัม) eluted มียอดเพิ่มขึ้นมี CH2Cl2 ของทานอ (ถึง 3%) ให้ dihydrochelerythrine (4, 30.0 มิลลิกรัม), dihydroavicine (5, 12.0 มิลลิกรัม), rhoifoline เป็น (8, 21.0 มิลลิกรัม) และ B (9, 19.5 มิลลิกรัม) rhoifoline เศษ 21 รับจาก CH2Cl2: ทานอ 98 [อัตราส่วน] 2 หายไปให้ bocconoline (6, 4.5 มิลลิกรัม) เศษ 35-38 ได้จาก CH2Cl2: ทานอ 80 [อัตราส่วน] 20 และประกอบด้วยหนึ่งอัลคาลอยด์ (TLC), เครื่องดูดฝุ่นรวม และเข้มข้นในการให้ chelerythrine (10) หลังจากการตกผลึกจากทานอ Et2O (120.0 มิลลิกรัม) ส่วน 45-48 รับจาก CH2Cl2: ทานอ 70 [อัตราส่วน] 30 ซึ่งมีอยู่สองจุดของ Dragendorff บวกใน TLC ถูกรวม และเข้มข้นในสูญญากาศ (129.0 มิลลิกรัม) และส่งไปที่คอลัมน์ซิลิก้าเจล (230 – 400 ตาข่าย) ใช้ EtOAc: ทานอ (→95 [อัตราส่วน] 0 100 [อัตราส่วน] 5 →90[ratio]10→80[ratio]20) avicine (11, 25.0 มิลลิกรัม) และ nitidine (12, 22.0 มิลลิกรัม)ระบุ alkaloids 1, 2, 3, 11, 12 และ 13 โดยเปรียบเทียบข้อมูลสเปกตรัม (EIMS, 1 H - และ 13C-NMR) กับรายงานค่าในวรรณคดี [21], [30] - [32] Alkaloids 4 – 10 ระบุถูกเปรียบเทียบโดยตรงของ TLC ด้วยตัวอย่างอาหารของ zanthoxyline, dihydrochelerythrine, rhoifoline A, rhoifoline B, bocconoline, chelerythrine ตามลำดับ และ โดยการเปรียบเทียบข้อมูลสเปกตรัม (1 H - และ 13C-NMR) กับรายงานค่าในวรรณคดี [21]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ขั้นตอนการสกัดและการแยกเปลือกลำต้นอากาศแห้งของ Z. rhoifolium ถูกแหลกลาญในโรงงานไวลีย์ในรูปแบบผง (1 กิโลกรัม) และสกัดสี่ครั้งด้วยเมธานอลที่อุณหภูมิห้อง ในขั้นตอนนี้การก่อตัวของตะกอนที่ไม่ละลายน้ำได้สังเกตซึ่งได้รับการกู้คืนโดยการกรอง (IP 2.5 กรัม) และบันทึกไว้สำหรับการวิเคราะห์ในภายหลัง เมธานอลสารสกัดถูกกรองและความเข้มข้นในสูญญากาศที่จะได้รับสารสกัดหยาบ (ME 150 กรัม) เป็นส่วนหนึ่งของน้ำเชื่อมที่เหลือ (50 กรัม) ถูกละลายในน้ำและสกัดด้วยเฮกเซน (HF, 6.5 กรัม) CH2Cl2 (DCM 2.5 g) EtOAc (AF 2.5 กรัม) และ n-butanol (BUF- 7.5 กรัม ) อย่างต่อเนื่อง ส่วน DCM (2.0 กรัม) ที่มีนักดำน้ำจุด Dragendorff's บวกใน TLC ถูก chromatographed กว่าซิลิกาเจล (150 กรัม) โดยใช้ CH2Cl2 กับจำนวนเงินที่เพิ่มขึ้นของเมธานอลเพื่อเตรียมความพร้อมเศษส่วน 1-30 (200 มิลลิลิตร / ส่วน) ส่วน 3 (CH2Cl2 100%) ประกอบด้วยหนึ่งอัลคาลอยได้กระจุกตัวอยู่ในสูญญากาศที่จะให้ skimmianine (1, 10.5 มก.) ส่วนที่ 6 (CH2Cl2-เมธานอล 99 [อัตราส่วน] 1) ประกอบด้วยสองลคาลอยด์ได้รับการกระจุกตัวอยู่ในสูญญากาศ (30.0 มก.) และส่งไปเตรียม TLC (CH2Cl2: เมธานอล 99 [อัตราส่วน] 1) เพื่อให้γ-fagarine (3 8.0 มก.) และ 8-hydroxy-4, 7-dimetoxy-furoquinoline (2, 9.0 มก.) ส่วน 9 (CH2Cl2: เมธานอล 99 [อัตราส่วน] 1) ประกอบด้วยหนึ่งอัลคาลอยได้กระจุกตัวอยู่ในสูญญากาศที่จะให้ zanthoxyline (7, 6.0 มก.) เศษส่วน 12-13 (CH2Cl2: เมธานอล 98 [อัตราส่วน] 2) มารวมกัน (104.0 มก.) และส่งอีกครั้งเพื่อคอลัมน์ซิลิกาเจล (10 กรัม) ชะด้วย CH2Cl2 มีจำนวนที่เพิ่มขึ้นของเมธานอล (ไม่เกิน 3%) ที่จะให้ dihydrochelerythrine ( 4, 21.0 มก.) และ dihydroavicine (5, 32.0 มก.) เศษส่วน 25-26 (CH2Cl2: เมธานอล 80 [อัตราส่วน] 20) มารวมกัน (287.0 มก.) และตกผลึกจากเมธานอลอีเทอร์-diethyl เพื่อให้ chelerythrine (10, 150.0 มก.) ตะกอนที่ไม่ละลายน้ำ (ไอพี, 0.5 กรัม) ถูกละลายในเมธานอล: H2O และโหลดลง 7.5 × 12 ซม. C-18 คอลัมน์ คอลัมน์ถูกชะด้วยเมธานอล: H2O (60 [อัตราส่วน] 40-100 [อัตราส่วน] 0) ส่วนที่ 3 และ 4 ประกอบด้วยหนึ่งอัลคาลอยมารวมกัน (50.0 มก.) และส่งไปเตรียม TLC. (EtOAc: เมธานอล 2 [อัตราส่วน] 3) เพื่อให้ magnoflorine (13, 10.0 มก.) ได้วิเคราะห์ในงานนี้เป็นส่วนหนึ่งของ เมธานอลสารสกัด (70.0 กรัม) ถูกละลายใน H2O (100 มิลลิลิตร) และกรดกับ 2M HCl ค่า pH 2-3 หลังจากการสกัดหมดจดด้วยเฮกเซนและ Et2O การแก้ปัญหาที่เป็นกรดได้ถูกทำให้ขั้นพื้นฐานที่มี NH4OH ค่า pH 8-9 และสกัดด้วย DCM (5 × 100 มล) เพื่อให้ได้สารสกัดจากขั้นพื้นฐาน (4.5 กรัม) ส่วนพื้นฐาน DCM (4.0 กรัม) ถูก chromatographed ในคอลัมน์ซิลิกาเจล (230-400 ตาข่าย 320 กรัม) และชะด้วย CH2Cl2: ส่วนผสมเมธานอลเพื่อเตรียมความพร้อมเศษส่วน 1-90 เศษส่วน 3-8 ได้จาก CH2Cl2: เมธานอล 0.5% และประกอบด้วยสามลคาลอยด์ได้รวม (90.0 มก.) และส่งไปเตรียม TLC (CH2Cl2: เมธานอล 99 [อัตราส่วน] 1 สอง elutions) เพื่อให้ skimmianine (1, 20.2 มก.), γ-fagarine (3, 11.0 มก.) และ zanthoxyline (7, 10.0 มก.) ส่วน 9 (CH2Cl2: เมธานอล 0.5%) ได้รับการระเหยเพื่อให้ 8-hydroxy-4, 7-dimetoxy-furoquinoline (2, 12.0 มก.) เศษส่วน 11-20 ที่ได้รับจาก CH2Cl2: เมธานอล 1% มารวมกัน (350.0 มก.) และส่งอีกครั้งเพื่อคอลัมน์ซิลิกาเจล (30 กรัม) ชะด้วย CH2Cl2 มีจำนวนที่เพิ่มขึ้นของเมธานอล (ไม่เกิน 3%) ที่จะให้ dihydrochelerythrine (4, 30.0 มก.) dihydroavicine (5, 12.0 มก.) rhoifoline (8, 21.0 มก.) และ rhoifoline B (9, 19.5 มก.) ส่วนที่ 21 ที่ได้รับจาก CH2Cl2: เมธานอล 98 [อัตราส่วน] 2 ได้รับการระเหยเพื่อให้ bocconoline (6, 4.5 มก.) เศษส่วน 35-38 ที่ได้รับจาก CH2Cl2: เมธานอล 80 [อัตราส่วน] 20 และประกอบด้วยหนึ่งด่าง (TLC) ถูกรวมกันและความเข้มข้นในสูญญากาศที่จะให้ chelerythrine (10) หลังจากที่ตกผลึกจาก Et2O-เมธานอล (120.0 มก.) เศษส่วน 45-48 ที่ได้รับจาก CH2Cl2: เมธานอล 70 [อัตราส่วน] 30 ซึ่งมีสองจุด Dragendorff's บวกใน TLC ถูกรวมกันและความเข้มข้นในสูญญากาศ (129.0 มก.) และส่งไปยังคอลัมน์ซิลิกาเจล (230-400 ตาข่าย) โดยใช้ EtOAc: เมธานอล (100 [อัตราส่วน] 0 → 95 [อัตราส่วน] 5 → 90 [อัตราส่วน] 10 → 80 [อัตราส่วน] 20) เพื่อให้ avicine (11, 25.0 มก.) และ nitidine (12, 22.0 มก.). ลคาลอยด์ที่ 1, 2 , 3, 11, 12 และ 13 ถูกระบุโดยการเปรียบเทียบข้อมูลสเปกตรัมของพวกเขา (EIMS, 1H- และ 13C-NMR) ที่มีค่ารายงานในวรรณคดี [21], [30] - [32] 4-10 ลคาลอยด์ที่ถูกระบุโดยเปรียบเทียบโดยตรงของ TLC กับกลุ่มตัวอย่างที่แท้จริงของ zanthoxyline, dihydrochelerythrine, rhoifoline A, B rhoifoline, bocconoline, chelerythrine ตามลำดับและจากการเปรียบเทียบข้อมูลสเปกตรัมของพวกเขา (1H- และ 13C-NMR) ที่มีค่าที่รายงานใน วรรณกรรม [21]