A small tissue from the flesh secti

A small tissue from the flesh section between the pil- eus and stipe of fruit body was cut with a sterilized knife and placed into a 1.5 ml centrifuge tube containing 300 μl 2X CTAB buffer and kept in −20°C for DNA extrac- tion. The specimens were ground with 200 mg of steril- ized quartz sand then 2X CTAB extraction buffer were added for adjusted to 600 μl. Contents were then incu- bated at 60°C in a water bath for 30 min with gentle swirling. The solution was then extracted two or three times with an equal volume of chloroform: isoamyl (24:1) at 13,000 rpm for 30 min until no interface was visible. The supernatant phase containing the DNA was precipi- tated by addition of 2.5 volumes of absolute ethanol and kept at −20°C overnight. The DNA pellet was washed (70% ethanol) 2 times, dries (under vacuum), and resus- pended in TE buffer (1 mM EDTE, 10 mM Tris-HCL, pH 8) and mixed together with RNase A (1 mg/ml−1). In addition some tissues specimens were extracted for DNA by using DNA extract Kits (NucleoSpin® Plant II, Ma- cherey Nagel, Catalog no, 740770.50) following manu- faturer’s protocal.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เป็นเนื้อเยื่อขนาดเล็กจากส่วนเนื้อระหว่าง pil eus และ stipe ของผลไม้ร่างกายถูกตัด ด้วยมีดฆ่าเชื้อ และวางลงในหลอดหมุนเหวี่ยง 1.5 ml 300 μl 2 X CTAB บัฟเฟอร์ที่ประกอบด้วย และเก็บไว้ใน −20 ° C สำหรับดีเอ็นเอในทางการค้า ชิ้นงานทดสอบถูกพื้นดินที่ มีทรายควอตซ์ steril ized 200 มิลลิกรัม แล้วบัฟเฟอร์สกัด X CTAB 2 ถูกเพิ่มสำหรับปรับ 600 μl เนื้อหาได้แล้ว incu - bated ที่ 60° C ในอ่างน้ำ 30 นาทีด้วยการหมุนที่นุ่มนวล การแก้ปัญหาได้ แล้วแยกสอง หรือสามครั้ง กับคลอโรฟอร์มในปริมาณเท่ากับ: isoamyl (24:1) ที่ 13,000 rpm 30 นาทีจนติดต่อไม่ได้มองเห็น เฟส supernatant ที่ประกอบด้วยดีเอ็นเอเป็น precipi-tated โดยเพิ่มปริมาณเอทานอลที่สัมบูรณ์ 2.5 และเก็บไว้ที่ −20 ° C ค้างคืน เม็ดดีเอ็นเอถูกล้าง (เอทานอล 70%) 2 ครั้ง แห้ง (ภายใต้สุญญากาศ), resus-pended ใน TE buffer (1 mM EDTE, mM 10 ทริสเรทติ้ง HCL, pH 8) และผสมกับ RNase เป็น (1 mg/ml−1) นอกจากนี้ เนื้อเยื่อบางอย่างถูกสกัดสำหรับดีเอ็นเอ โดยใช้ดีเอ็นเอแยกชุด (NucleoSpin®พืช II, Nagel Ma cherey ไม่มี แคตตาล็อก 740770.50) ตาม protocal manu-faturer

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เนื้อเยื่อขนาดเล็กจากส่วนเนื้อระหว่าง EUS pil- และไทป์ของร่างกายผลไม้ที่ถูกตัดด้วยมีดฆ่าเชื้อและวางลงในหลอด 1.5 มล. เครื่องปั่นแยกที่มี 300 ไมโครลิตร 2X CTAB บัฟเฟอร์และเก็บไว้ใน -20 ° C ดีเอ็นเอ extrac- การ ตัวอย่างมาบดกับ 200 มิลลิกรัม steril- ทราย ized ควอทซ์แล้ว 2X CTAB บัฟเฟอร์สกัดถูกเพิ่มเข้ามาสำหรับการปรับถึง 600 ไมโครลิตร เนื้อหาถูกแล้ว incu- ซึ้งน้อยลงที่ 60 องศาเซลเซียสในอ่างน้ำนาน 30 นาทีกับการหมุนอ่อนโยน วิธีการแก้ปัญหาถูกสกัดแล้วสองหรือสามครั้งด้วยปริมาตรที่เท่ากันของคลอโรฟอร์ม: isoamyl (24: 1) ที่ 13,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 นาทีจนอินเตอร์เฟซที่ไม่ได้มองเห็น ขั้นตอนการใสที่มีดีเอ็นเอที่ถูก precipi- tated โดยนอกเหนือจาก 2.5 ปริมาณเอทานอลที่แน่นอนและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสในชั่วข้ามคืน เม็ดดีเอ็นเอถูกล้าง (เอทานอล 70%) 2 ครั้งแห้ง (ภายใต้สูญญากาศ) และ resus- pended ใน TE บัฟเฟอร์ (1 มิลลิ EDTE, 10 มิทริสรายชื่อ HCL ค่า pH 8) และผสมเข้าด้วยกันกับ RNase A (1 mg / ml-1) นอกจากนี้ในบางตัวอย่างเนื้อเยื่อมาสกัดดีเอ็นเอโดยใช้ชุดสารสกัดดีเอ็นเอ (NucleoSpin®พืชครั้งที่สอง Ma- cherey แจคกี้แคตตาล็อกไม่มี 740,770.50) ตามโปรโตคอลมนู faturer ของ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เนื้อเยื่อขนาดเล็กจากเนื้อระหว่างส่วนพิล - อียู และไทป์ของร่างกายผลไม้ถูกตัดด้วยมีดและฆ่าเชื้อใส่เข้าไปในเครื่อง 1.5 ml หลอดบรรจุ 300 μชั้น 2x ctab บัฟเฟอร์และเก็บไว้ใน 20 ° C −สกัดดีเอ็นเอ - tion . ทำการบดกับ 200 มิลลิกรัม ปลอดเชื้อ - ized ทรายควอตซ์ก็ 2x ctab ใช้สารเพิ่ม 600 μล. ปรับเนื้อหาแล้ว incu - ลด 60 °องศาเซลเซียสในอ่างน้ำ 30 นาที กับอ่อนโยนตก สารละลายแยกสองหรือสามครั้ง ด้วยปริมาณคลอโรฟอร์มในปริมาณเท่ากัน : ( 24 : 1 ) ที่ 10 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 นาทีจนไม่ติดต่อก็สามารถมองเห็นได้ และน่าน ระยะที่มีดีเอ็นเอ precipi - tated โดยเพิ่มปริมาณเอทานอล 2.5 สัมบูรณ์และเก็บไว้ที่− 20 ° C ในชั่วข้ามคืน เม็ด DNA ซัก ( เอทานอล 70% ) 2 ครั้ง แห้ง ( สุญญากาศ ) , และรีซัส - pended ใน TE buffer ( 1 มิลลิเมตร edte 10 มม. นอกจากนี้ กรดไฮโดรคลอริก pH 8 ) และผสมกับเลส ( 1 mg / ml − 1 ) นอกจากนี้ บางตัวอย่างเนื้อเยื่อถูกสกัดดีเอ็นเอโดยใช้ชุดสกัดดีเอ็นเอ ( พืช 2 nucleospin ® MA - cherey นาเกล แคตตาล็อกไม่ 740770.50 ) ต่อไปนี้มนู - faturer ของโปรโตคอล .