Phenotypic and Genotypic Characteri

Phenotypic and Genotypic Characterization of lactic acid bacteria isolated from Turkish dry fermented sausage
Received for publication, September 1, 2008 Accepted, November 11 , 2008
GULSAH CANAKCI ADIGUZEL*, MUSTAFA ATASEVER Ataturk University, Faculty of Veterinary Science, Department of Food Science and Technology, 25700, Erzurum, Turkey; [e-mail], [e-mail] * Corresponding author. Tel: [phone]; Fax: [phone]. E-mail adress: [e-mail] and [e-mail] (G. ADIGUZEL)
Abstract
Fourty-six strains of lactic acid bacteria (LAB) isolated from Turkish fermented sausages (sucuk) were identified according to their phenotypic and genotypic characterization subjected to phenotypic and genotypic identification. The phenotypic characterization of predominant LAB isolated from the fermented Turkish dry sausages was based on general morphology, physiological tests and API system. The genotypic characterization of LAB was based on the repetitive elements found in the genome of Streptcococcus pneumoniae (BOX-PCR). Differentiation at species, subspecies and strain level was possible for the isolates. Predominant functional LAB strains associated with the fermented Turkish dry sausages were identified as Lactobacillus plantarum, Pediococcus pentosaceus, Lactococcus lactis ssp. lactis, L. curvatus ssp. curvatus, L. brevis, L. fermentum, Weisella viridescens, L. delbrueckii ssp. delbrueckii, W. confusa, L. collinoides and Leuconostoc mesenteroides ssp. mesenteroides/ dextranicum. It can be concluded from these data that the dominant flora in sausage is Lactobacillus species and its varieties (L. plantarum).
Keywords: Turkish dry fermente sausage, Phenotypic characterization, Genotypic characterization, Lactobacillus, Leuconostoc, Lactococcus, Pediococccus
Introduction
Fermented sausages have the highest rates of production and consumption because of their high nutritive value, distinguished taste and good texture. In fermented sausages, taste, consistency, aroma and color depending on the reactions of bacterial, enzymatic and bio- chemical substances during the maturity are shaped [1,2]. Especially during the production period, the use of starter culture can provide both the guarantee of food safety and the desired color and aroma at the end of the short period of maturity [3]. Microbial activity is the most important factor in the development of the quality and maturity of fermented sausages. Lactic acid bacteria (LAB) and micro-organism of Staphylococcus have the main roles in maturity [3-6]. It is the LAB that especially has a significant role in meat preservation and fermentation processes and are accepted technologically crucial. They are able to decrease pH by lactic acid production, produce bacteriocins to prevent the growth of pathogenic and spoilage microorganisms, provide diversity by the modification of raw material to obtain new sensory properties, improve the safety, the stability and the shelf life of meat products [7]. It is well known that LAB, in particular Lactobacillus, represent the dominant flora depending on the suitable environment for themselves in sausage material, by reaching the higher rates after the 24-28 hours of maturity period [8,9].
Phenotypic and Genotypic Characterization of lactic acid bacteria isolated from Turkish dry fermented sausage
Rom. Biotechnol. Lett., Vol. 14, No. 1, 4130-4138 (2009) 4131
Different phenotypic methods are used to identify LAB important for fermentation technology. However, these methods are not sufficient to characterize sub-species and strains in a genus. Thus, new methods have been developed depending on genotypical features and used effectively for the definition of the bacteria [10,11]. The methods used for the current study of LAB such as 16S rRNA sequencing, ribotyping, protein profilling, and pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) are either too laborious and limited in their resolving power or require a species-specific methodology. Therefore, a method that is universally suitable for the LAB with a high resolving power both on the species and intraspecies level would be a highly valuable tool. In this regard, PCR- based genomic fingerprinting techniques are believed to have the most potential, and are easy to perform [6,12,13]. Highly conserved repetitive DNA elements, such as Repetitive Extragenic Palindromic (REP) elements, Enterobacterial Repetitive Intragenic Consensus (ERIC) elements and BOX elements seem to be widely distributed in the genomes of various bacterial groups. PCR amplification of repetitive bacterial DNA elements (rep-PCR) has been known as a simple PCR-based technique with the following characteristics: (1) low cost, (2) a high discriminatory power (3) suitability for a high-throughput of strains, and (4) a reliable tool for classifying and typing a wide range of Gram-negative and some Gram-positive bacteria [13- 15]. The main purpose of this paper is to characterize the LAB isolated from Turkish fermented sausage with phenotypic methods and to find out if this information is supported by BOX-PCR, a genotypic fingerprinting analyzing method.
Materials and Methods
Samples Fifteen sausage samples were obtained from retail markets and butchers from different cities. The samples were carried to the laboratory and kept in a refrigerator. They were used for isolation and identification of LAB. Isolation of lactic acid bacteria The sausage casing was removed aseptically. For microbiological analysis, a 25 g sample was prepared by homogenizing with 225 physiological saline water [0.85 NaCl % (Merck 1.06404.1000)] in a stomacher (Laboratory Blender Stomacher 400, Seward Medical, London, UK) for 1 min. Further decimal delusions were prepared from this homogenized mixture. The following incubation conditions of isolation and identification of LAB were used: De Man Ragosa Sharpe Agar (Merck) for 2-3 days at 30°C (anaerobe) for LAB [16]. Phenotypic characterization Cell morphology of all isolates was determined using a microscope. Isolates were Gram- stained and tested for catalase production, and were preliminarily identified based on the phenotypic properties such as carbon dioxide production from glucose, growth at different temperatures as well as the ability to grow in different concentrations of sodium chloride and pH in De Man, Ragosa, Sharpe (MRS) broth. Sugar fermentation patterns of LAB isolates were determined using the API 50 CHL test strips (bioMérieux, France)[2]. Genotypic characterization DNA isolation and purification Total genomic DNA of 46 strains was extracted as per the method of Khoodo and Jaufeerally-Fakim [17] with little modification. BOX PCR Genomic Fingerprinting
GULSAH CANAKCI ADIGUZEL, MUSTAFA ATASEVER
Rom. Biotechnol. Lett., Vol. 14, No. 1, 4130-4138 (2009) 4132
DNA (75 ng) was subjected to PCR utilizing the primer BOX A1R (CTA CGG CAA GGC GAC GCT GAC G) as Versalovic et al. [14] described. Each 27 µl PCR reaction contained 5 µl 5× Gitschier buffer (1 M (NH4)2SO4, 1 M Tris-HCl (pH 8.8), 1 M MgCl2, 0.5 M EDTA (pH 8.8) and 14.4 M β-mercapto-ethanol add double distilled water till 200 ml), 0.6 mg/ml BSA (Sigma, A-7906), 100% DMSO (Sigma, D-8418), 0.2 mM dNTP (Sigma, D7295), 0.5 µM oligonucleotide primer, 1 units of Taq DNA polymerase (Sigma, D1806) and distilled water. PCR amplifications were performed in a DNA thermal cycler (Techne, Touchgene, UK) with an initial denaturation step (95°C, 7 min), followed by 30 cycles of denaturation (94°C, 1 min), annealing (53°C, 1 min) and extension (65°C, 8 min), and a single final extension step (65°C, 16 min). The amplified fragments were fractionated on a 1.5% w/v agarose gel during 200 min at a constant voltage of 40 V in 0.5×TAE (Tris-Acetat EDTA) at 4°C. A 10-kb reference marker (Sigma, D7058) was used to allow standardization. Following staining with ethidium bromide and visualization by using the Bio Doc Image Analysis System with Unisoft analysis package (Cambrige, UK). Data Analysis All BOX-PCR fingerprints patterns were transformed into a binary character matrix (‘1’ for the presence and ‘0’ for the absence of a band at a particular position) and analyzed by using SPSS program (SPSS, version 12.0 for Windows). Data were used to calculate a Jaccard (1908) similarity [18]. All of the experiments in this study were repeated at least twice.
Results
Phenotypic characterization of LAB The bacterial strains isolated in this study were subjected to various morphologic, bio- chemical and physiologic tests. The results showed that all strains were gram positive, catalase negative. The results of the morphologic, bio-chemical and physiologic study of micro-organism such as the gas production from the glucose, the development of different heat and salt rate, cell morphology are shown in Table 1.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ฟีโนไทป์และลักษณะทางพันธุกรรมของแบคทีเรียแลคติกที่แยกได้จากตุรกีไส้กรอกหมักแห้ง
ได้รับสำหรับสิ่งพิมพ์ 1 กันยายน 2008 ได้รับการยอมรับ, 11 พฤศจิกายน 2008
Gulsah Çanakçı adiguzel ​​, มหาวิทยาลัย mustafa atasever Ataturk คณะวิทยาศาสตร์สัตวแพทย์กรมวิทยาศาสตร์อาหารและ เทคโนโลยี 25700, Erzurum, ตุรกี; [e-mail], adiguzel.gulsah @ Gmail ของcom * ผู้เขียนสอดคล้องกัน โทร: 90 442 231 3974; โทรสาร: 90 442 218 3647 ทาง e-mail ที่อยู่: [e-mail] และ adiguzel.gulsah @ gmail.com (กรัม adiguzel)

นามธรรมสี่สิบหกสายพันธุ์ของเชื้อแบคทีเรียกรดแลคติก (ห้องแล็บ) ที่แยกได้จากไส้กรอกหมักตุรกี (sucuk) ถูกระบุตาม กับฟีโนไทป์และลักษณะทางพันธุกรรมของพวกเขาภายใต้การระบุฟีโนไทป์และพันธุกรรมลักษณะฟีโนไทป์ของห้องปฏิบัติการเด่นที่แยกได้จากไส้กรอกหมักแห้งตุรกีก็ขึ้นอยู่กับลักษณะทางสัณฐานวิทยาทั่วไปการทดสอบทางสรีรวิทยาและระบบ API ลักษณะทางพันธุกรรมของห้องปฏิบัติการก็ขึ้นอยู่กับองค์ประกอบซ้ำที่พบในจีโนมของ streptcococcus pneumoniae (กล่อง pcr) ความแตกต่างที่สายพันธุ์ย่อยและระดับความเครียดเป็นไปได้สำหรับสายพันธุ์เด่นสายพันธุ์ในห้องปฏิบัติการการทำงานที่เกี่ยวข้องกับไส้กรอกหมักแห้งตุรกีถูกระบุว่าเป็น plantarum แลคโตบาซิลลัส, Pediococcus pentosaceus, Lactococcus lactis เอสเอส lactis, ลิตร curvatus เอสเอส curvatus ลิตร brevis, ลิตร fermentum, viridescens weisella, ลิตร delbrueckii เอสเอส delbrueckii w, confusa, ลิตร collinoides และ mesenteroides Leuconostoc เอสเอส mesenteroides / dextranicumจึงสามารถสรุปได้จากข้อมูลเหล่านี้ว่าพืชที่โดดเด่นในไส้กรอกเป็นชนิดแลคโตบาซิลลัสและพันธุ์ของ (ลิตร plantarum)
คำหลัก: ตุรกีไส้กรอก fermente แห้งลักษณะฟีโนไทป์ลักษณะทางพันธุกรรมแลคโตบาซิลลัส, Leuconostoc, Lactococcus, pediococccus

แนะนำไส้กรอกหมักมีอัตราสูงสุดของการผลิตและการบริโภคเพราะค่าของพวกเขาสูงทางโภชนาการรสชาติโดดเด่นและเนื้อสัมผัสที่ดี ในไส้กรอกหมักรสชาติสม่ำเสมอกลิ่นหอมและสีขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาของสารเอนไซม์ของแบคทีเรียและไบโอเคมีในช่วงระยะเวลาที่มีรูปทรง [1,2] โดยเฉพาะอย่างยิ่งในช่วงเวลาการผลิตการใช้งานเริ่มต้นของวัฒนธรรมสามารถให้บริการทั้งการรับประกันความปลอดภัยของอาหารและสีที่ต้องการและกลิ่นหอมที่ส่วนท้ายของระยะเวลาสั้น ๆ ของการครบกําหนด [3] กิจกรรมของจุลินทรีย์เป็นปัจจัยที่สำคัญที่สุดในการพัฒนาคุณภาพและวุฒิภาวะของไส้กรอกหมัก แบคทีเรียแลคติก (ห้องปฏิบัติการ) และจุลินทรีย์ของเชื้อ Staphylococcus มีบทบาทหลักในการกำหนด [3-6]มันเป็นห้องปฏิบัติการโดยเฉพาะอย่างยิ่งที่มีบทบาทสำคัญในการเก็บรักษาเนื้อสัตว์และกระบวนการหมักและการได้รับการยอมรับที่สำคัญเทคโนโลยี พวกเขาจะสามารถลด ph โดยการผลิตกรดแลคติกผลิต bacteriocins เพื่อป้องกันการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ที่ทำให้เกิดโรคและการเน่าเสียให้มีความหลากหลายโดยการปรับเปลี่ยนวัตถุดิบเพื่อให้ได้คุณสมบัติทางประสาทสัมผัสใหม่ ๆ ปรับปรุงความปลอดภัยเสถียรภาพและอายุการเก็บรักษาของผลิตภัณฑ์จากเนื้อสัตว์ [7] เป็นที่รู้จักกันดีว่าห้องปฏิบัติการในแลคโตบาซิลลัสโดยเฉพาะอย่างยิ่งเป็นตัวแทนของพืชที่โดดเด่นขึ้นอยู่กับสภาพแวดล้อมที่เหมาะสมสำหรับตัวเองในวัสดุไส้กรอกโดยถึงอัตราที่สูงขึ้นหลังจาก 24-28 ชั่วโมงระยะเวลาครบกำหนด [8,9]
ฟีโนไทป์และลักษณะทางพันธุกรรมของแบคทีเรียแลคติกที่แยกได้จากตุรกีแห้งหมักไส้กรอก
รอม Biotechnol ผนัง. ฉบับ 14 ไม่มี 1, 4130-4138 (2009) 4131
วิธีการที่แตกต่างกันฟีโนไทป์ที่ใช้ในการระบุตัวตนของห้องปฏิบัติการที่สำคัญสำหรับเทคโนโลยีการหมัก แต่วิธีการเหล่านี้ไม่เพียงพอที่จะอธิบายลักษณะของสายพันธุ์และสายพันธุ์ย่อยในประเภท จึงวิธีการใหม่ได้รับการพัฒนาขึ้นอยู่กับคุณสมบัติ genotypical และใช้อย่างมีประสิทธิภาพเพื่อความชัดเจนของแบคทีเรีย [10,11] วิธีการที่ใช้ในการศึกษาในปัจจุบันของห้องปฏิบัติการเช่น rrna 16s ลำดับ ribotyping, profilling โปรตีนและชีพจรสนามเจลอิ (PFGE) มีทั้งเกินไปลำบากและ จำกัด อยู่ในอำนาจการตัดสินใจของพวกเขาหรือต้องมีวิธีการขยายพันธุ์เฉพาะ ดังนั้นวิธีการที่เป็นสากลเหมาะสำหรับห้องปฏิบัติการที่มีอำนาจการตัดสินใจสูงทั้งในสายพันธุ์และระดับ intraspecies จะเป็นเครื่องมือที่มีคุณค่าสูง ในเรื่องนี้ pcr ตามเทคนิคการพิมพ์ลายนิ้วมือข​​องจีโนมที่จะเชื่อว่าจะมีศักยภาพมากที่สุดและง่ายต่อการดำเนินการ [6,12,13] อนุรักษ์สูงองค์ประกอบ dna ซ้ำเช่น palindromic (ต​​ัวแทน) องค์ประกอบซ้ำ extragenic,enterobacterial มติ intragenic ซ้ำ (eric) องค์ประกอบและองค์ประกอบกล่องดูเหมือนจะกระจายอยู่ทั่วไปในจีโนมของกลุ่มแบคทีเรียต่างๆ pcr ขยายซ้ำองค์ประกอบดีเอ็นเอของแบคทีเรีย (ตัวแทน-PCR) ได้รับการรู้จักกันเป็นเทคนิคง่ายๆ pcr ตามที่มีลักษณะดังต่อไปนี้ (1) ต้นทุนต่ำ (2) อำนาจจำแนกสูง (3) ความเหมาะสมสำหรับการส่งผ่าน-สูงของ สายพันธุ์และ (4) เป็นเครื่องมือที่เชื่อถือได้สำหรับการจำแนกและการพิมพ์ที่หลากหลายของแกรมลบและบางแบคทีเรียแกรมบวก [13 - 15] วัตถุประสงค์หลักของบทความนี้คือการลักษณะของห้องปฏิบัติการที่แยกได้จากไส้กรอกหมักตุรกีด้วยวิธีการฟีโนไทป์และเพื่อดูว่าข้อมูลนี้ได้รับการสนับสนุนโดยกล่อง pcr วิธีการพิมพ์ลายนิ้วมือการวิเคราะห์ทางพันธุกรรม
วัสดุและวิธีการ
ตัวอย่างสิบห้าตัวอย่างไส้กรอกที่ได้รับจากตลาดค้าปลีกและเนื้อจากเมืองที่แตกต่างกัน กลุ่มตัวอย่างได้รับการดำเนินการไปยังห้องปฏิบัติการและเก็บไว้ในตู้เย็น พวกเขาถูกนำมาใช้ในการแยกและบัตรประจำตัวของห้องปฏิบัติการ การแยกแบคทีเรียแลคติกปลอกไส้กรอกถูกลบออกเลี้ยงในขวดทดลอง สำหรับการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยา,ตัวอย่าง 25 กรัมถูกจัดทำขึ้นโดยการผสมยาง 225 น้ำน้ำเกลือ [0.85% โซเดียมคลอไรด์ (merck 1.06404.1000)] ใน Stomacher (ปั่นห้องปฏิบัติการ Stomacher 400, เอิร์ดทางการแพทย์, ลอนดอน, สหราชอาณาจักร) เป็นเวลา 1 นาที หลงผิดทศนิยมต่อไปที่เตรียมจากส่วนผสมหดหายนี้ เงื่อนไขการบ่มต่อไปของการแยกและบัตรประจำตัวของห้องปฏิบัติการที่ใช้:คนเด ragosa sharpe วุ้น (เมอร์ค) 2-3 วันที่ 30 ° C (บัคเตรีจำพวกที่ไม่ต้องการออากาศหายใจ) ในห้องปฏิบัติการ [16] ฟีโนไทป์ลักษณะทางสัณฐานวิทยาของเชื้อเซลล์ทั้งหมดถูกกำหนดโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ สายพันธุ์ที่ถูกกรัมเปื้อนและทดสอบการผลิต catalase และถูกระบุเบื้องต้นขึ้นอยู่กับคุณสมบัติฟีโนไทป์เช่นการผลิตก๊าซคาร์บอนไดออกไซด์จากกลูโคสการเจริญเติบโตที่อุณหภูมิที่แตกต่างกันรวมทั้งความสามารถที่จะเติบโตในระดับความเข้มข้นที่แตกต่างกันของโซเดียมคลอไรด์และ ph ในมนุษย์เด ragosa ชาร์ป (นาง) น้ำซุป รูปแบบการหมักน้ำตาลของเชื้อในห้องปฏิบัติการได้รับการพิจารณาโดยใช้ API 50 CHL แถบทดสอบ (Biomerieux, ฝรั่งเศส) [2]ลักษณะทางพันธุกรรมดีเอ็นเอการแยกและการทำให้บริสุทธิ์ดีเอ็นเอจีโนมทั้งหมด 46 สายพันธุ์การสกัดตามวิธีการและ khoodo jaufeerally-fakim [17] มีการเปลี่ยนแปลงเพียงเล็กน้อย pcr กล่องพิมพ์ลายนิ้วมือจีโนม
Gulsah Çanakçı adiguzel, mustafa atasever
รอม Biotechnol ผนัง. ฉบับ 14 ไม่มี 1, 4130-4138 (2009) 4132
dna (75 ng) ก็จะถูกใช้ pcr a1r กล่องไพรเมอร์ (CTA cgg CAA GGC แก๊กแก๊ก GCT กรัม) เป็น versalovic ตอัล [14] อธิบาย แต่ละปฏิกิริยา pcr 27 ไมโครลิตรมี 5 ไมโครลิตร 5 ×บัฟเฟอร์ gitschier (ม. 1 (NH4) 2SO4, 1 เมตร tris-hcl (ph 8.8) 1 เมตร MgCl2, 0.5 เมตร EDTA (ph 8.8) และ 14.4 เมตรβ-mercapto เอทานอลเพิ่ม น้ำกลั่นสองจนถึง 200 มล. ) 0.6 mg / ml BSA (ซิก,-7906), 100% DMSO (ซิก, D-8418), 02 มิลลิเมตร dntp (ซิก, d7295) ไพรเมอร์ 0.5 ไมโครเมตร oligonucleotide 1 หน่วยของ taq dna โพลิเมอร์ (ซิก, d1806) และน้ำกลั่น pcr amplifications ได้ดำเนินการใน dna Cycler ความร้อน (Techne, touchgene, สหราชอาณาจักร) ที่มีขั้นตอน denaturation เริ่มต้น (95 ° C, 7 นาที) ตามด้วย 30 รอบของ denaturation (94 ° C, 1 นาที), การหลอม (53 องศาเซลเซียส 1 นาที) และนามสกุล (65 ° C, 8 นาที),และขั้นตอนสุดท้ายของการขยายเดียว (65 ° C, 16 นาที) ชิ้นส่วนที่ถูกขยายส่วนที่เหลือที่ 1.5% w / v เจล agarose ระหว่าง 200 นาทีที่แรงดันคงที่จาก 40 v 0.5 × tae (tris-acetat EDTA) ที่ 4 องศาเซลเซียส เครื่องหมายอ้างอิง 10 กิโลไบต์ (ซิก, d7058) ถูกนำมาใช้เพื่อให้ได้มาตรฐานต่อไปนี้การย้อมสีที่มีโบรไมด์ ethidium และการมองเห็นโดยการใช้ระบบชีวภาพการวิเคราะห์ภาพ doc กับแพคเกจการวิเคราะห์ Unisoft (cambrige, สหราชอาณาจักร) การวิเคราะห์ข้อมูลทุกรูปแบบลายนิ้วมือกล่อง pcr ถูกเปลี่ยนเป็นตัวอักษรเมทริกซ์ไบนารี ('1 'สำหรับการแสดงและ '0' การขาดของวงดนตรีในตำแหน่งโดยเฉพาะอย่างยิ่ง) และวิเคราะห์โดยใช้โปรแกรม spss (spss, รุ่น 12.0 สำหรับ Windows )ข้อมูลถูกนำมาใช้ในการคำนวณ Jaccard (1908) ความคล้ายคลึงกัน [18] ทั้งหมดของการทดลองในการศึกษานี้ได้รับซ้ำแล้วซ้ำอีกอย่างน้อยสองครั้ง

ผลลักษณะฟีโนไทป์ของห้องปฏิบัติการสายพันธุ์แบคทีเรียที่แยกในการศึกษานี้ถูกยัดเยียดให้รูปร่างต่างๆชีวภาพเคมีและการทดสอบทางสรีรวิทยา ผลการศึกษาพบว่าทุกสายพันธุ์เป็นแกรมบวก catalase เชิงลบผลของรูปร่างชีวภาพเคมีและการศึกษาทางสรีรวิทยาของจุลินทรีย์เช่นการผลิตก๊าซจากกลูโคสการพัฒนาของความร้อนที่แตกต่างกันและอัตราเกลือ, การเปลี่ยนรูปร่างของเซลล์จะแสดงในตารางที่ 1

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Phenotypic และสมบัติจีโนไทป์ของแบคทีเรียกรดแลกติกที่แยกต่างหากจากตุรกีไส้กรอกหมักแห้ง
ยอมรับตีพิมพ์ 1 กันยายน 2008 รับ 11 พฤศจิกายน 2008
ADIGUZEL CANAKCI GULSAH * MUSTAFA ATASEVER อาตาเติร์กมหาวิทยาลัย คณะสัตวแพทยศาสตร์ แผนกอาหารวิทยาศาสตร์ และ เทคโนโลยี 25700, Erzurum ตุรกี [e-mail], adiguzel.gulsah@gmailcom * Corresponding ผู้เขียน โทร: 90 442 231 3974 โทรสาร: 90 442 218 3647 อยู่อีเมล์: [e-mail] และ [e-mail] (G. ADIGUZEL)
นามธรรม
โฟร์ตี้ 6 สายพันธุ์ของแบคทีเรียกรดแลกติก (LAB) แยกต่างหากจากตุรกีหมักไส้กรอก (sucuk) ระบุตามการจำแนกไทป์ และจีโนไทป์ภายใต้รหัสฟีโนไทป์ และจีโนไทป์ จำแนกไทป์ของ LAB กันแยกต่างหากจากไส้กรอกแห้งตุรกีร้าถูกตามสัณฐานวิทยาทั่วไป ทดสอบสรีรวิทยา และระบบ API สมบัติจีโนไทป์ของห้องปฏิบัติเป็นไปตามองค์ประกอบซ้ำ ๆ ที่พบในกลุ่มของ Streptcococcus pneumoniae (กล่อง-PCR) สร้างความแตกต่างในระดับชนิด ชนิดย่อย และต้องใช้ถูกสุด isolates ระบุสายกันทำแล็บพันธุ์เกี่ยวข้องกับไส้กรอกแห้งตุรกีร้าเป็นแลคโตบาซิลลัส plantarum, Pediococcus pentosaceus, Lactococcus lactis ssp. lactis, L. curvatus ssp. curvatus เทนเซอร์ L., L. fermentum, Weisella viridescens, L. delbrueckii ssp. delbrueckii ปริมาณ confusa, L. collinoides และ Leuconostoc mesenteroides ssp. mesenteroides / dextranicum จึงสามารถสรุปได้จากข้อมูลเหล่านี้ว่าพืชหลักในไส้กรอกแลคโตบาซิลลัสสายพันธุ์และสายพันธุ์ของ (L. plantarum)
คำสำคัญ: ไส้กรอกแห้ง fermente ตุรกี จำแนกไทป์ จีโนไทป์ จำแนก แลคโตบาซิลลัส Leuconostoc, Lactococcus, Pediococccus
แนะนำ
ไส้กรอกหมักมีราคาสูงสุดของการผลิตและปริมาณการใช้วัสดุเนื่องจากความสูงค่าจัด รสชาติที่แตกต่าง และเนื้อดี ไส้กรอกหมัก รสชาติ สอดคล้อง กลิ่น และสีขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาของแบคทีเรีย สาร เคมีชีวภาพ และเอนไซม์ในระบบในระหว่างการครบกำหนดมีรูปร่าง [1, 2] โดยเฉพาะอย่างยิ่งในระหว่างรอบระยะเวลาการผลิต การใช้วัฒนธรรมเริ่มต้นสามารถให้ทั้งรับประกันความปลอดภัยของอาหาร และสีที่ต้องการ และกลิ่นที่จุดสิ้นสุดของระยะสั้นครบกำหนด [3] กิจกรรมจุลินทรีย์เป็นปัจจัยสำคัญในการพัฒนาคุณภาพครบกำหนดของไส้กรอกหมัก แบคทีเรียกรดแลกติก (LAB) และไมโครมีชีวิตของ Staphylococcus มีบทบาทหลักในวันครบกำหนด [3-6] ห้องปฏิบัติการที่มีบทบาทสำคัญในกระบวนการหมักและการเก็บรักษาเนื้อสัตว์โดยเฉพาะ และรับเทคโนโลยีสำคัญ ได้ พวกเขาจะสามารถลดค่า pH ด้วยกรดผลิต ผลิต bacteriocins เพื่อป้องกันการเจริญเติบโตของอุบัติ และจุลินทรีย์เน่าเสีย มีความหลากหลาย โดยการปรับเปลี่ยนวัตถุดิบให้ได้รับคุณสมบัติทางประสาทสัมผัสใหม่ ปรับปรุงความปลอดภัย เสถียรภาพและอายุการเก็บรักษาผลิตภัณฑ์เนื้อ [7] เป็นที่รู้จักกันดีว่า ห้องปฏิบัติ แลคโตบาซิลลัสเฉพาะ แทนพืชหลักขึ้นอยู่กับสภาพแวดล้อมที่เหมาะสมสำหรับตัวเองในไส้กรอกวัสดุ โดยถึงราคาสูงหลังจาก 24-28 ชั่วโมงระยะเวลาครบกำหนด [8,9]
Phenotypic และสมบัติจีโนไทป์ของแบคทีเรียกรดแลกติกที่แยกต่างหากจากตุรกีไส้กรอกหมักแห้ง
Rom. Biotechnol Lett. ปี 14 หมายเลข 1, 4130-4138 (2009) 4131
ไทป์วิธีใช้ระบุถึงความสำคัญสำหรับเทคโนโลยีห้องปฏิบัติการ อย่างไรก็ตาม วิธีการเหล่านี้ไม่เพียงพอที่จะกำหนดลักษณะย่อยชนิดและสายพันธุ์ในสกุล ดังนั้น วิธีใหม่ได้ถูกพัฒนาขึ้นอยู่กับคุณสมบัติ genotypical และใช้ได้อย่างมีประสิทธิภาพสำหรับข้อกำหนดของแบคทีเรีย [10,11] วิธีการที่ใช้ในการศึกษาปัจจุบันของห้องปฏิบัติการลำดับ 16S rRNA, ribotyping โปรตีน profilling และ electrophoresis ฟิลด์สูงเจ (PFGE) มีอย่างใดอย่างหนึ่งเกินไปลำบาก และมีข้อจำกัดในอำนาจ resolving หรือต้องใช้วิธี species-specific ดังนั้น วิธีการที่แพร่หลายเหมาะสำหรับห้องปฏิบัติการด้วยกำลัง resolving สูงทั้งชนิดและระดับ intraspecies จะเป็นเครื่องมือที่มีคุณค่าสูง ในการนี้ PCR-ใช้ genomic fingerprinting เทคนิคเชื่อว่ามีศักยภาพมากที่สุด และง่ายต่อการดำเนินการ [6,12,13] นำคำซ้ำ DNA องค์ เช่นองค์ประกอบซ้ำ Extragenic Palindromic (แทน) Enterobacterial ซ้ำ Intragenic มติ (เอริค) องค์ประกอบและองค์ประกอบของกล่องดูเหมือนจะถูกนำไปเผยแพร่ใน genomes ของแบคทีเรียกลุ่มต่าง ๆ ขยาย PCR ของซ้ำ ๆ แบคทีเรียองค์ในดีเอ็นเอ (ตัวแทน-PCR) เป็นที่รู้จักอย่างผลเทคนิคมีลักษณะต่อไปนี้: (1) ต่ำต้นทุน ความ (2) การประมงทะเลพลังงานสูง (3) เหมาะสูงสูงของสายพันธุ์ และ (4) เครื่องมือที่เชื่อถือได้สำหรับการจัดประเภท และการพิมพ์หลากหลายของแบคทีเรียแบคทีเรียแกรมลบ และแบคทีเรียแกรมบวกบาง [13-15] วัตถุประสงค์หลักของเอกสารนี้คือ ลักษณะของแล็บที่แยกต่างหากจากตุรกีไส้กรอกหมัก ด้วยวิธีไทป์ และ เพื่อค้นหาถ้าข้อมูลนี้สนับสนุนกล่อง-PCR ลายมีจีโนไทป์พิมพ์วิเคราะห์วิธี
วัสดุและวิธีการ
ตัวอย่างตัวอย่างไส้กรอกห้าได้รับมาจากตลาดค้าปลีกและโรงฆ่าจากเมืองต่าง ๆ ตัวอย่างได้ดำเนินการห้องปฏิบัติการ และเก็บไว้ในตู้เย็น พวกเขาใช้การแยกรหัสของห้องปฏิบัติการ การแยกแบคทีเรียกรดแลกติกที่ถูกเอาปลอกไส้กรอก aseptically สำหรับการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยา ตัวอย่าง 25 กรัมถูกเตรียม โดย homogenizing น้ำ 225 physiological น้ำเกลือ [0.85 NaCl % (เมอร์ค 1.06404.1000)] แผงประดับหน้าเป็นอก (ปฏิบัติ Blender แผงประดับหน้าอก 400 แพทย์เวิร์ด ลอนดอน สหราชอาณาจักร) ใน 1 นาที เพิ่มเติม delusions ทศนิยมถูกเตรียมจากส่วนผสม homogenized เป็นกลุ่มนี้ ใช้บ่มสภาพแยกและรหัสของห้องปฏิบัติการ: เดอแมน Ragosa Sharpe Agar (เมอร์ค) 2-3 วันที่ 30° C (anaerobe) สำหรับห้องปฏิบัติการ [16] สัณฐานวิทยาเซลล์จำแนกไทป์ของ isolates ทั้งหมดถูกกำหนดโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ Isolates ถูกกรัม - สีทดสอบ catalase ผลิต และ preliminarily ระบุตามคุณสมบัติเช่นการผลิตก๊าซคาร์บอนไดออกไซด์จากกลูโคส ไทป์ เจริญเติบโตที่อุณหภูมิแตกต่างกันรวมทั้งความสามารถในการเติบโตในความเข้มข้นแตกต่างกันและค่า pH ในเดอแมน Ragosa ซุป Sharpe (นาง) รูปแบบการหมักน้ำตาลของ isolates แล็บถูกกำหนดใช้ในแถบทดสอบ API 50 CHL (bioMérieux ฝรั่งเศส) [2] สมบัติจีโนไทป์ดีเอ็นเอแยกและฟอกรวม genomic DNA ของสายพันธุ์ 46 ถูกแยกตามวิธีการของ Khoodo และ Jaufeerally-Fakim [17] มีปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ลายกล่อง PCR Genomic พิมพ์
GULSAH CANAKCI ADIGUZEL, MUSTAFA ATASEVER
Rom. Biotechnol Lett. ปี 14 หมายเลข 1, 4130-4138 (2009) 4132
ดีเอ็นเอ (75 ng) ถูกยัดเยียดให้ PCR ที่ใช้รองพื้นกล่อง A1R (CTA CGG ซีเอเอโฮ GGC GAC GCT GAC G) เป็น Versalovic และ al. [14] อธิบาย แต่ละปฏิกิริยา PCR 27 µl อยู่ 5 µl 5 × Gitschier บัฟเฟอร์ (1 M (NH4) 2SO4, 1 M ตรี-HCl (pH 8.8), 1 M MgCl2, 0.5 M EDTA (pH 8.8) และเอทานอ 14.4 M β-mercapto-ลเพิ่มห้องน้ำกลั่นจนถึง 200 มล), 0.6 mg/ml บีเอสเอ (ซิก A-7906), 100% DMSO (ซิก D-8418), 0dNTP 2 มม. (ซิก D7295), 0.5 µM oligonucleotide พื้น Taq DNA พอลิเมอเรส (ซิก D1806) และน้ำกลั่น 1 หน่วย PCR amplifications ถูกดำเนินการที่ดีเอ็นเอความร้อน cycler (Techne, Touchgene, UK) มีการ denaturation เริ่มต้น (95° C, 7 นาที), ตาม ด้วยรอบ 30 denaturation (94° C, 1 นาที) การอบเหนียว (53° C, 1 นาที) และส่วนขยาย (65° C, 8 นาที), และขั้นตอนสุดท้ายขยายเดียว (65° C, 16 นาที) ชิ้นส่วนเอาต์ได้แบ่งบนวุ้น 1.5% w/v agarose ระหว่าง 200 นาทีที่แรงดันไฟฟ้าคงที่ 40 V ใน 0.5 ×เต้ (ตรี Acetat EDTA) ที่ 4 องศาเซลเซียส เครื่องหมายอ้างอิง 10-kb (ซิก D7058) ถูกใช้เพื่อให้มาตรฐาน วิธีย้อมสีโบรไมด์ ethidium และแสดงภาพประกอบเพลง โดยใช้ระบบวิเคราะห์เอกสารภาพชีวภาพกับแพคเกจการวิ Unisoft (Cambrige, UK) รูปแบบข้อมูลวิเคราะห์ทั้งหมดกล่อง-PCR รอยนิ้วมือได้เปลี่ยนเป็นเมทริกซ์ฐานสองอักขระ ('1' สำหรับการ) และ '0' สำหรับการขาดงานของวงที่ตำแหน่งใด และวิเคราะห์ โดยใช้โปรแกรมโปรแกรม (โปรแกรม รุ่น 12.0 สำหรับ Windows) ข้อมูลที่ใช้ในการคำนวณที่คล้าย (1908) Jaccard [18] ทั้งหมดของการทดลองในการศึกษานี้ได้ซ้ำสองน้อย
ผล
ไทป์คุณสมบัติของห้องปฏิบัติการสายพันธุ์แบคทีเรียที่แยกต่างหากในการศึกษานี้ได้อยู่ภายใต้การทดสอบ morphologic ไบโอเคมี และ physiologic ต่าง ๆ ผลพบว่า สายพันธุ์ทั้งหมดถูกลบ catalase บวก กรัม ผลของการศึกษา morphologic ไบโอเคมี และ physiologic ของไมโครสิ่งมีชีวิตเช่นการผลิตก๊าซจากน้ำตาลกลูโคส พัฒนาความร้อนแตกต่างกันและอัตราเกลือ สัณฐานวิทยาของเซลล์จะแสดงในตารางที่ 1

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

phenotypic และ genotypic แสดงลักษณะของเชื้อแบคทีเรียชนิดตะกั่วกรดแบบซีลเกี่ยวกับนมแยกออกจากตุรกีแห้งปุ๋ยหมัก ชีวภาพ ไส้กรอก
ได้รับสำหรับการประกาศ,วันที่ 1 กันยายน 2008 ได้รับการยอมรับ,วันที่ 11 พฤศจิกายน, 2008
gulsah canakci adiguzel *, Mustafa Shopping Centre atasever Ataturk เพื่อมาถึงมหาวิทยาลัย,คณะสัตวแพทย์ศาสตร์,กรมวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีอาหาร, 25700 , erzurum ,ตุรกี; [e-mail] , adiguzel . gulsah @ gmail .COM *ที่เกี่ยวข้องผู้เขียน. โทร: 90442231 3974 โทรสาร 904422183647 . ที่อยู่อีเมลและ [e-mail] [e-mail] ( G . ความตึงเครียด adiguzel )

สี่สิบเป็นนามธรรมหกของเกี่ยวกับนมกรดแบคทีเรีย( LAB )แยกต่างหากจากไส้กรอกหมักแบบตุรกี( sucuk )ได้รับการระบุว่าตาม phenotypic ของพวกเขาและคุณลักษณ์ genotypic ต้องตกอยู่ในการระบุตัวตนและ phenotypic genotypicแสดงลักษณะ phenotypic ที่โดดเด่นในห้องปฏิบัติการแยกออกจากไส้กรอกแห้งแบบตุรกีหมักที่ใช้ในระบบ API และการทดสอบทางสรีรวิทยาจากสนามแม่เหล็กรูปร่างลักษณะของหินทั่วไป แสดงลักษณะ genotypic ที่ใช้ในห้องปฏิบัติการเป็นองค์ประกอบซ้ำๆที่พบในยีนของ streptcococcus pneumoniae (ช่องทำเครื่องหมาย - pcr ) ความแตกต่างในระดับสายพันธุ์และความเมื่อยล้า subspecies เป็นไปได้สำหรับที่แยกความตึงเครียดจากห้องปฏิบัติการเต็มไปด้วยประโยชน์ใช้สอยโดดเด่นที่เกี่ยวข้องกับไส้กรอกแห้งแบบตุรกีหมักที่ได้รับการระบุว่าเป็นแลคโตบาซิลลัส( Lactobacillus ) plantarum pediococcus pentosaceus lactococcus lactis ssp. lactis แอลแอล curvatus ssp. curvatus is short and the art long แอลแอล fermentum weisella viridescens delbrueckii ssp. delbrueckii W . confusa แอล collinoides และ leuconostoc mesenteroides ssp. mesenteroides / dextranicumสามารถที่จะสรุปได้จากข้อมูลเหล่านี้ว่าพันธุ์ไม้ที่มีในไส้กรอกมีแลคโตบาซิลลัส( Lactobacillus )สายพันธุ์และความหลากหลายของพื้นที่( plantarum แอล)
คีย์เวิร์ดไส้กรอก fermente แห้งแบบตุรกีแสดงลักษณะ phenotypic แสดงลักษณะ genotypic แลคโตบาซิลลัส( Lactobacillus ) leuconostoc lactococcus pediococccus แนะนำ

ไส้กรอกหมักมีอัตราสูงสุดของการผลิตและการ บริโภค เนื่องจากมีมูลค่าสูงรสชาติสารอาหารและเนื้อดีของพวกเขา ในรสชาติไส้กรอกหมักเครื่องอุ่นน้ำมันหอมอย่างต่อเนื่องและสีขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาที่เกิดจากสาร enzymatic และ. BIO - เคมิคอลเกิดจากเชื้อแบคทีเรียในช่วงอายุที่มีรูปทรง 1,2 [] โดยเฉพาะในช่วงเวลาการผลิตในการใช้วัฒนธรรม, Starter , Starter สามารถจัดให้บริการรับประกันความ ปลอดภัย ด้านอาหารและเครื่องอุ่นน้ำมันหอมและสีที่ต้องการเมื่อสิ้นสุดระยะเวลาในระยะทางสั้นๆเพื่อไปที่ครบกำหนดไถ่ถอนทั้ง[ 3 ] การทำงานของจุลินทรีย์เป็นปัจจัยที่สำคัญในการพัฒนาที่ครบกำหนดไถ่ถอนและ คุณภาพ ของไส้กรอกหมัก เกี่ยวกับนมเชื้อแบคทีเรียชนิดตะกั่วกรดแบบซีล( LAB )และ Micro - ทางร่างกายของ staphylococcus มีบทบาทหลักในวันครบกำหนด[ 3-6 3-6 3-6 3-6 ]เป็นห้องแล็บที่โดยเฉพาะมีบทบาทสำคัญในกระบวนการผลิตและการรักษาเนื้อหมักและเป็นที่ยอมรับความสำคัญทางด้านเทคโนโลยี ห้องพักมีความสามารถในการผลิตที่ลดลงค่า pH ของน้ำกรดเกี่ยวกับนมผลิต bacteriocins เพื่อป้องกันไม่ให้การขยายตัวของจุลชีพ pathogenic spoilage และจัดให้บริการความหลากหลายของการปรับเปลี่ยนวัตถุดิบในการได้รับทรัพย์สินไม่แข็งแรงใหม่การปรับปรุงความ ปลอดภัยเสถียรภาพ และอายุของเนื้อ ผลิตภัณฑ์ [ 7 ]. เป็นที่ทราบกันดีว่าห้องปฏิบัติการในแลคโตบาซิลลัส( Lactobacillus )อย่างใดอย่างหนึ่งเป็นพันธุ์ไม้ที่มีขึ้นอยู่กับ สภาพแวดล้อม ที่เหมาะสมได้ด้วยตัวเองในไส้กรอกโดยไปถึงอัตราดอกเบี้ยที่สูงขึ้นหลังจาก 24-28 24-28 24-28 ชั่วโมงของวันครบกำหนดระยะเวลา[ 8,9 ]
phenotypic และ genotypic แสดงลักษณะของแบคทีเรียกรดเกี่ยวกับนมแยกออกจากกรวยยัดไส้กรอกหมักแห้งแบบตุรกี
ROM biotechnol . พวกเล็ท.. 14 ฉบับที่ 1 4130-4138 ( 2009 ) 4131
วิธีการ phenotypic แตกต่างกันจะใช้เพื่อระบุเทคโนโลยีที่สำคัญที่สุดสำหรับหมักห้องปฏิบัติการ. แต่ถึงอย่างไรก็ตามวิธีการนี้ไม่เพียงพอที่จะแสดงลักษณะคณะอนุกรรมการ - สายพันธุ์และพันธุ์ในพืชที่ ดังนั้นวิธีการใหม่ได้รับการพัฒนาขึ้นอยู่กับคุณสมบัติ genotypical และใช้งานได้อย่างมี ประสิทธิภาพ สำหรับความละเอียดของแบคทีเรียที่[ 10,11 ] วิธีการที่ใช้สำหรับการศึกษาในปัจจุบันที่ในห้องปฏิบัติการเช่น electrophoresis ใด Intense Pulsed Light - ฟิลด์และเจล 16 S rrna การจัดลำดับ ribotyping profilling โปรตีน( pfge )มีมากเกินไปไม่ว่าจะทำงานหนักและจำกัด(มหาชน)ในการแก้ไขหรือต้องใช้วิธีการชนิดที่เฉพาะ ดังนั้นวิธีการที่เป็นสากลเหมาะสำหรับห้องปฏิบัติการที่มีอำนาจการแก้ไขสูงทั้งในระดับสายพันธุ์และ intraspecies ที่จะใช้เป็นเครื่องมือที่มีค่าเป็นอย่างมาก ในการนี้เทคนิค fingerprinting pcr - ใช้ genomic เชื่อว่ามี ศักยภาพ มากที่สุดและได้รับความสะดวกในการดำเนินการ[ 6,12,13 ] สงวนไว้เป็นส่วนประกอบดีเอ็นเอเดิมซ้ำๆเช่นซ้ำๆ extragenic palindromic (ซ้ำ)องค์ประกอบส่วนประกอบ enterobacterial ซ้ำๆ intragenic ฉันทามติ( Eric Young )และองค์ประกอบกล่องดูเหมือนจะเป็นที่ยอมรับอย่างกว้างขวาง genomes กระจายในที่เกิดจากเชื้อแบคทีเรียในกลุ่มต่างๆ ใช้การขยายเสียง pcr ขององค์ประกอบดีเอ็นเอซ้ำไปซ้ำมาเกิดจากเชื้อแบคทีเรีย(ซ้ำ - pcr )ได้เป็นที่รู้จักกันในด้านเทคนิค pcr - เรียบง่ายซึ่งมีลักษณะดังต่อไปนี้( 1 )มีต้นทุนต่ำ( 2 )เลือกปฏิบัติสูง( 3 )ความเหมาะสมสำหรับระดับสูงที่ความเร็วในการรับส่งข้อมูลในด้านพันธุ์และ( 4 )เครื่องมือที่เชื่อถือได้สำหรับจำแนกการพิมพ์และความหลากหลายของแบคทีเรียกรัมบวกและบางกรัมบวก[ 13 - 15 ] วัตถุประสงค์หลักของเอกสารนี้คือการกำหนดลักษณะห้องปฏิบัติการที่ถูกแยกออกจากกรวยยัดไส้กรอกหมักแบบตุรกีด้วยวิธีการ phenotypic และเพื่อค้นหาว่าข้อมูลนี้ได้รับการสนับสนุนโดยกล่อง - pcr fingerprinting genotypic ที่การวิเคราะห์วิธีการ

วิธีการและวัสดุตัวอย่างตัวอย่างสิบห้ากรวยยัดไส้กรอกได้จากพ่อค้าเนื้อและตลาดค้าปลีกจากเมืองต่างๆแตกต่างกันไป ตัวอย่างนี้ได้ถูกหามออกมายังห้องทดลองและได้รับการดูแลรักษาให้อยู่ในตู้เย็น พวกเขาได้ถูกนำมาใช้สำหรับการระบุตัวตนและการแยกในห้องปฏิบัติการ ระบบขจัดเสียงรบกวนของแบคทีเรียกรดเกี่ยวกับนมหลากชนิดตั้งแต่ไส้กรอกที่ถูกลบออก aseptically สำหรับใช้ในการวิเคราะห์ทดสอบด้านจุลชีววิทยาที่ 25 กรัมลิ้มลองได้จัดเตรียมโดยการผสมให้เข้ากันกับ 225 ในทางสรีรศาสตร์น้ำเกลือน้ำ[ 0.85 NaCl %( merck 1.06404.1000 )]ในที่หมัดโดน(ในห้องปฏิบัติการเครื่องปั่นผ้าปิดท้อง 400 , Seward ทางการแพทย์, London , UK )สำหรับ 1 นาทีอีกสิบมายาคติได้เตรียมความพร้อมจากนี้สดพร่องมันเนยเป็นการผสมผสานกันระหว่าง. เงื่อนไขต่อไปนี้แสดงระยะฟักตัวของการระบุตัวตนและระบบขจัดเสียงรบกวนในห้องปฏิบัติการได้ถูกนำมาใช้de ชาย ragosa sharpe สาหร่ายทะเล( merck )สำหรับผู้ใช้บริการ 2-3 2-3 2-3 วันที่ 30 ° C (บัคเตรีจำพวกที่ไม่ต้องการอากาศหายใจ)สำหรับห้องปฏิบัติการ[ 16 ] แสดงลักษณะรูปร่างลักษณะของหินเซลล์ phenotypic ของแยกทั้งหมดเป็นการใช้กล้องจุลทรรศน์ แยกเป็นกรัม - แต้มสีและได้รับการทดสอบแล้วสำหรับการผลิต catalase และได้รับการระบุว่าจากคุณสมบัติของ phenotypic เช่นการผลิตก๊าซคาร์บอนจากน้ำตาลกลูโคสในเบื้องต้นอัตราการขยายตัวที่มี อุณหภูมิ ที่แตกต่างกันและความสามารถที่จะเติบโตในสาขาวิชาต่างๆของโซเดียมคลอไรด์และ pH ใน de ชาย ragosa sharpe (นาง)น้ำซุป. รูปแบบหมักน้ำตาลในห้องปฏิบัติการแยกเป็นการใช้ API 50 chl แถบการทดสอบ( biomérieux ฝรั่งเศส)[ 2 ]ระบบขจัดเสียงรบกวนดีเอ็นเอดีเอ็นเอและคุณลักษณ์ genomic รวมทำน้ำบริสุทธิ์ genotypic ของ 46 พันธุ์ได้ถูกแยกออกมาตามวิธีการของ khoodo และ jaufeerally-fakim [ 17 ]ด้วยการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ช่องทำเครื่องหมาย pcr genomic fingerprinting canakci adiguzel
gulsah Mustafa Shopping Centre atasever
ROM biotechnol . พวกเล็ท.. 14 ฉบับที่ 1 4130-4138 ( 2009 ) 4132
ดีเอ็นเอ( 75 ไนจีเรีย)ถูก pcr เพื่อใช้ประโยชน์จากเชื้อปะทุที่กล่องที่ 1 R ( CTA cgg CAA GGC เม็ดผงถ่านกัมมันต์( GAC ) gct G )เป็น versalovic et al . [ 14 ]อธิบายไว้ แต่ละห้อง 27 μ L pcr ปฏิกริยาที่อยู่ 5 μ L 5 × gitschier Buffer ( 1 ม.( NH 4 ) 2 so4 , 1 ม.บริษัททริสเรทติ้งจำกัด - HCL /( PH 8.8 ), 1 m mgcl2 , 0.5 ม. edta ( PH 8.8 )และ 14.4 ม.เฉพาะ - mercapto - เอทานอลเพิ่มคู่น้ำกลั่นจนกว่า 200 มล.), 0.6 มก./มล. BSA (ซิกมา, ที่ -7906 ), 100% dmso ( Six Sigma , D -8418 ), 0 .2 ม.ม. dntp ( Six Sigma D 7295 ) 0.5 μ m oligonucleotide เชื้อปะทุ 1 ชุดของดีเอ็นเอ taq polymerase ( Six Sigma D 1806 )และน้ำกลั่น amplifications pcr นั้นดำเนินการในดีเอ็นเอ cycler ระบายความร้อน( techne touchgene UK )ที่มีขั้นตอนที่ denaturation ครั้งแรก( 95 ° C 7 นาที)ตามด้วย 30 รอบของ denaturation ( 94 ° C 1 นาที) annealing ( 53 ° C 1 นาที)และการขยายเวลา( 65 ° C 8 นาที)และขั้นตอนสุดท้ายการขยายตัวเดียว( 65 ° C 16 นาที) ที่แอมพลิฟายเองก็ fractionated บนที่ 1.5% w / v agarose เจลในระหว่าง 200 นาทีที่ให้แรงดันไฟฟ้าคงที่ 40 V ใน 0.5 x เทควันโด( tris-acetat edta )ที่ 4 ° C เครื่องหมาย 10 - KB อ้างอิง(ซิกมา D 7058 )ได้ถูกใช้เพื่ออนุญาตให้มาตรฐานต่อไปนี้เกิดรอยเปื้อนควรมีการสร้าง ภาพ และไม่น่าทึ่ง ethidium โดยใช้ BIO doc ภาพ การวิเคราะห์ระบบพร้อมด้วยแพ็คเกจการวิเคราะห์ unisoft ( cambrige สหราชอาณาจักร) การวิเคราะห์ข้อมูลทั้งหมดกล่อง - pcr รอยนิ้วมือได้ถูกเปลี่ยนไปสู่รูปแบบไบนารีที่ตัวอักษร Matrix Storage Technology (' 1 'สำหรับการประชุมและ' 0 'สำหรับที่ไม่มีที่คลื่นความถี่ที่เฉพาะตำแหน่ง)และมีการวิเคราะห์โดยการใช้โปรแกรม spss ( spss ,เวอร์ชั่น 12.0 สำหรับ Windows )ข้อมูลจะถูกใช้ในการคำนวณ jaccard ( 1908 )อย่างเดียวกัน[ 18 ] การทดลองในการศึกษาทั้งหมดนี้ก็เกิดขึ้นซ้ำอีกอย่างน้อยสองครั้ง คุณลักษณ์ phenotypic

ผลการทดสอบพันธุ์เชื้อแบคทีเรียที่แยกต่างหากในการศึกษานี้เป็นการทดสอบการเปลี่ยนแปลง - เคมีและในทางสรีรศาสตร์ BIO morphologic ต่างๆ ผลที่ได้แสดงให้เห็นว่าความตึงเครียดทั้งหมดเป็นกรัม catalase ในเชิงบวกลบผลที่ได้จากการศึกษา Bio - เคมีและในทางสรีรศาสตร์ morphologic ของ micro - ทางร่างกายเช่นการผลิตก๊าซจากน้ำตาลกลูโคสในการพัฒนาที่แตกต่างกันของความร้อนและอัตราเกลือรูปร่างลักษณะของหินเซลล์จะแสดงอยู่ในตารางที่ 1