PURIFICATION OF โพลีแซคคาไรด์ โปรตี

PURIFICATION OF โพลีแซคคาไรด์ โปรตีน คอนจูเกต"


FILED OF THE การประดิษฐ์:
The การประดิษฐ์นี้ relates to the field of purification of โพลีแซคคาไรด์ protein
5 คอนจูเกต for use as vaccines.


BACKGROUND
Bacterial infections continue to be one of the major cause of diseases inflicting infants
and children, particularly in developing countries (Osrin, David et al. (2004) Current 10 Opinion in Infectious Diseases 17(3): 217-224; Thayer, Durrane, and Zaidi, Anita
K.M. (2009) Pediatric Infectious Disease Journal 28(1): S3-S9; Saez-Llorens, Xavier
et al. 2003 Lancet 361 (9375): 2139-2148; Thapar, Nikhil et al. 2004 Lancet
363 (9409): 641-653). The most common pathogens are Haemophilus influenzae type
b, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis (Pollard, Andrew J. et al. (2009) 15 Nature Reviews Immunology 9(3): 213-220), Staphylococcus aureus, Shigella,
Salmonella, Vibrio cholerae etc. A large number of children die each year as a result
of such infections.

โพลีแซคคาไรด์ antigens have been one of the major components of bacterial vaccines 20 used to prevent diseases associated with Haemophilus influenzae, Neisseria
meningitidis, Streptococcus pneumoniae (Larry K Pickering et al. (1985) Infectious
Diseases Newsletter 4(11): 84-87), and Salmonella enterica serovar Typhi (Hessel L
et al. (1999) Eur J Clin Microbiol & Infect Dis., 18(9): 609-620). However, most of
the bacterial โพลีแซคคาไรด์ are T-cell independent antigens preventing development 25 of memory B-cells leading to poor immune response to such antigens in children
below two years and elderly persons. Covalent conjugation of โพลีแซคคาไรด์ antigens
to protein carrier bestows them the ability to generate humoral response, and impart
them the capabilities of T-cell dependent antigens. Such คอนจูเกต have been proven
to be efficient in preventing diseases caused by bacterial pathogens. โพลีแซคคาไรด์ 30 คอนจูเกต vaccines have been licensed for use in many parts of the world for more
than two decades (Adams, William G. et al. (1993) JAMA 269(2): 221-226).




2
PCT-1424
Purification of โพลีแซคคาไรด์ โปรตีน คอนจูเกต has always been a challenge. Such คอนจูเกต are known to be associated with contaminants such as un-reacted โพลีแซคคาไรด์ (free โพลีแซคคาไรด์), un-reacted carrier protein (free protein), low
molecular weight คอนจูเกต, and other chemicals used for affecting conjugation such 5 as linkers, coupling agents etc. Such contaminants are highly undesirable in a product
which is intended for use as a vaccine. For example, a high amount of free
โพลีแซคคาไรด์ is undesirable in a vaccine composition as it might interfere with the
immunological function of the คอนจูเกต (Peeters, C.A.M. et al. (1992) Vaccine
10(12): 833-840). The contaminants often differ in molecular size, ionic charges and 10 hydrophobicity making it difficult to employ single โครมาโทกราฟี step to achieve
the purity levels desired for it to be used as vaccine.

โพลีแซคคาไรด์ โปรตีน คอนจูเกต have often been purified from impurities or
contaminants by various standard techniques such as density gradient centrifugation, 15 ultrafiltration with ammonium sulfate fractionation (US 6,146,902), ethanol
precipitation, gel filtration or size exclusion โครมาโทกราฟี, hydrophobic interaction
โครมาโทกราฟี or ion exchange โครมาโทกราฟี.

Ion exchange โครมาโทกราฟี has been mostly found suitable to purify the 20 โพลีแซคคาไรด์, but it has not been found appropriate to purify คอนจูเกต and more
particularly when the คอนจูเกต are to be purified on a larger scale. Simon, Raphael
(W02012061400) describes a process for โพลีแซคคาไรด์ โปรตีน คอนจูเกต
purification by binding the คอนจูเกต to ion exchange matrix and eluting it
subsequently to obtain the purified คอนจูเกต. Such processes also results in binding 25 of the free โพลีแซคคาไรด์ as the คอนจูเกต often exhibit charges similar to the free
โพลีแซคคาไรด์ making the purification of คอนจูเกต difficult.

โพลีแซคคาไรด์ โปรตีน คอนจูเกต may also be purified using an adsorption method based on hydrophobicity, which will adsorb the คอนจูเกต but not the free
30 โพลีแซคคาไรด์ as the latter tends to be less hydrophobic, by using a high
concentration of salt (Lees, Andrew et al. W02011017101; Pawlowski, Andrzeg
(2000) Vaccine 18: 1873-1885). Such purification is achieved by exploiting the




3
PCT-1424
hydrophobic nature of the protein which is mainly governed by the proportion of the non-polar surface areas of the protein as well as their spatial distribution. If the คอนจูเกตd protein is less hydrophobic, hydrophobic interaction โครมาโทกราฟี may not be a preferred choice of purifying such คอนจูเกต.
5
Gel filtration โครมาโทกราฟี has been most commonly used to purify โพลีแซคคาไรด์
โปรตีน คอนจูเกต (Lees, Andrew et al. (1996) ' Vaccine 14(3): 190-198; Libon,
Christine (2002) Vaccine 20: 2174-2180; Jennings, H J and Lugowski, C. (1981) J.
Immunology 127: 1011-1018). However such techniques suffer from several
10 limitations. For example, purification using molecular sieving by gel filtration
โครมาโทกราฟี could only be achieved by sacrificing yields due to inadequate resolution of crude คอนจูเกต. Because of the narrow fractionation range, pooling of appropriate fraction containing the desired คอนจูเกต requires considerable skills. Any
error in collecting fraction could lead to significant loss of the คอนจูเกต or increases 15 the risk of association of contaminants with the คอนจูเกต as the คอนจูเกต and
contaminants separate at a very narrow range (see Fig la). Further, it requires large
amount of gel filtration matrix, and significantly increased process time, in addition to
the difficulties associated with column packing. All these factors lead to higher cost of
production which makes the vaccines unaffordable, limiting their wider use in
20 vaccination programs.

The complexity associated with conjugation process usually results in highly
heterogeneous array of contaminants often differing in physical and chemical
properties such as molecular size, ionic charges, hydrophobicity etc. These factors 25 have made the separation based on single principle of โครมาโทกราฟี inadequate to
achieve the required degree of purification for the คอนจูเกต to be used as vaccine.
Therefore, sometimes more than one โครมาโทกราฟี steps have been used to purify
โพลีแซคคาไรด์ โปรตีน คอนจูเกต. Fattom, Ali et al. (Infection and Immunity (1988)
56(9): 2292-2298) describes a two step process of purifying a โพลีแซคคาไรด์ protein 30 คอนจูเกต โดยที่ the คอนจูเกต is partially purified over a gel filtration matrix
followed by capturing onto a hydrophobic medium to obtain the purified คอนจูเกต.




4
PCT-1424
Such methods compromises overall yield of the คอนจูเกต due to multiple โครมาโทกราฟี steps and also results in increased process time.

Thus production of significant quantities of โพลีแซคคาไรด์ โปรตีน คอนจูเกต for use 5 in vaccines has been hindered due to complexities in the prior art processes leading to
low yields and high cost of production. Therefore, there is a need to develop alternate
method of purification of โพลีแซคคาไรด์ โปรตีน คอนจูเกต which offers ease of
manufacture, which is less time consuming, and at the same time offering good yields.
The การประดิษฐ์นี้ provides an unexpectedly efficient method of removing 10 impurities or contaminants from โพลีแซคคาไรด์ โปรตีน คอนจูเกต, employing mixed
mode โครมาโทกราฟี (Orlovsky, Vlad et al (2011) โครมาโทกราฟี Today, 4(3) 24-
28; W02005082483; W02009131526, W02010005364). This surprisingly effective method addresses the long-standing problems associated with the prior art processes
used to purify โพลีแซคคาไรด์ โปรตีน คอนจูเกต. The process of the การประดิษฐ์ is 15 operationally simple, easily scalable, requires fewer resources, and offers greater
yields and product of consistent quality.


SUMMARY OF THE การประดิษฐ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทำให้บริสุทธิ์ของโพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกต"ยื่นของการประดิษฐ์:การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับด้านการทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีนโพลีแซคคาไรด์คอนจูเกต 5 สำหรับใช้เป็นค่าวัคซีนพื้นหลังต่อการติดเชื้อแบคทีเรียเป็นสาเหตุสำคัญของโรค inflicting ทารก และ เด็ก โดยเฉพาะอย่างยิ่งในประเทศกำลังพัฒนา (Osrin, al. และ David (2004) ปัจจุบัน 10 ความคิดเห็นในโรค 17(3): 217-224 ท่าที Durrane และ Zaidi อนิตา กิโลเมตร (2009) โรคติดเชื้อเด็กสมุด 28(1): S3-S9 Saez-Llorens, Xavier ร้อยเอ็ด al. 2003 Lancet 361 (9375): 2139-2148 Thapar, Lancet Nikhil et al. 2004 363 (9409): 641-653) โรคพบบ่อยที่สุดคือ Haemophilus influenzae ชนิด บี อุณหภูมิ pneumoniae, Neisseria meningitidis (Pollard แอนดรูว์เจ.เอ็ด al. (2009) 15 ธรรมชาติเห็นภูมิคุ้มกันวิทยา 9(3): 213-220), Staphylococcus หมอเทศข้างลาย Shigella สาย cholerae ผลฯลฯ จำนวนเด็กตาย ในแต่ละปีดังนั้น ของการติดเชื้อดังกล่าวโพลีแซคคาไรด์ antigens ได้รับหนึ่งในส่วนประกอบที่สำคัญของแบคทีเรียรู้ 20 ใช้ในการป้องกันโรคที่เกี่ยวข้องกับ Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis อุณหภูมิ pneumoniae (Infectious Larry K Pickering et al. (1985) ข่าวโรค 4(11): 84-87), และซัล enterica serovar Typhi (Hessel L และ al. (1999) Eur J Clin Microbiol & Dis. การติดเชื้อ 18(9): 609-620) อย่างไรก็ตาม ส่วนใหญ่ของ โพลีแซคคาไรด์แบคทีเรียมี antigens อิสระ T เซลล์ป้องกันพัฒนา 25 ชั้นนำบีเซลล์หน่วยความจำการตอบสนองภูมิคุ้มกันไม่ดีเช่น antigens ในเด็ก ต่ำกว่า 2 ปีและผู้สูงอายุคนนั้น Covalent conjugation ของโพลีแซคคาไรด์ antigens กับโปรตีน ขนส่ง bestows พวกเขาสามารถสร้างผลตอบรับ humoral และสอน ให้ความสามารถของเซลล์ T antigens ขึ้น คอนจูเกตดังกล่าวได้รับการพิสูจน์ ให้มีประสิทธิภาพในการป้องกันโรคที่เกิดจากโรคเชื้อแบคทีเรีย รู้คอนจูเกต 30 โพลีแซคคาไรด์ได้รับอนุญาตให้ใช้ในหลายส่วนของโลกเพิ่มเติม กว่าสองทศวรรษ (Adams, 269(2) จามา William G. et al. (1993): 221-226) 2PCT-1424ทำให้บริสุทธิ์ของโพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกตได้รับความท้าทายเสมอ คอนจูเกตดังกล่าวทราบว่าจะเกี่ยวข้องกับสารปนเปื้อนเช่นต่ำไม่ reacted โพลีแซคคาไรด์ (ฟรีโพลีแซคคาไรด์), ผู้ขนส่งไม่ reacted โปรตีน (protein ฟรี),คอนจูเกตน้ำหนักโมเลกุล และสารเคมีอื่น ๆ ที่ใช้สำหรับกระทบ conjugation เช่น 5 เป็น linkers, coupling ตัวแทนเป็นต้น สารปนเปื้อนดังกล่าวมีผลอย่างมากในผลิตภัณฑ์ ซึ่งมีวัตถุประสงค์สำหรับใช้เป็นวัคซีน ตัวอย่าง จำนวนเงินสูงของฟรี โพลีแซคคาไรด์เป็นผลในองค์ประกอบของวัคซีนอาจรบกวนการ ภูมิคุ้มกันทำงานของคอนจูเกต (Peeters วัคซีน C.A.M. et al. (1992) 10(12): 833-840) สารปนเปื้อนมักจะแตกต่างกันในโมเลกุลขนาด ค่า ionic และ hydrophobicity 10 ที่ทำให้มันยากเพื่อว่าจ้างขั้นตอนโครมาโทกราฟีที่เดียวเพื่อให้บรรลุระดับความบริสุทธิ์ที่ต้องการสำหรับที่จะใช้เป็นวัคซีนมักจะได้บริสุทธิ์โพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกตที่ได้จากสิ่งสกปรก หรือ สารปนเปื้อน โดยเทคนิคต่าง ๆ มาตรฐาน centrifugation ไล่ระดับความหนาแน่น การ 15 ultrafiltration ด้วยคุณสมบัติของสารแอมโมเนียซัลเฟต (สหรัฐ 6,146,902) เอทานอล ฝน เจลอาบน้ำ หรือขนาดแยก โครมาโทกราฟี โต้ตอบ hydrophobic โครมาโทกราฟีโครมาโทกราฟีหรือแลกเปลี่ยนไอออนโครมาโทกราฟีแลกเปลี่ยนไอออนส่วนใหญ่พบเหมาะบริสุทธิ์ 20 โพลีแซคคาไรด์ แต่ก็ไม่พบที่เหมาะสมต้องทำคอนจูเกตและอื่น ๆ โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อคอนจูเกตที่ได้จะบริสุทธิ์ในวงกว้าง Simon ราฟาเอล (W02012061400) อธิบายขั้นตอนการโพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกต ทำให้บริสุทธิ์ โดยผูกคอนจูเกตการแลกเปลี่ยนไอออนเมตริกซ์ และ eluting มัน ต่อมาจะได้รับคอนจูเกตบริสุทธิ์ เช่นประมวลผลในรวม 25 โพลีแซคคาไรด์ฟรีเป็นคอนจูเกตมักจะแสดงคล้ายกับการฟรีค่าธรรมเนียม โพลีแซคคาไรด์การทำให้บริสุทธิ์ของคอนจูเกตยากโพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกตอาจยังให้บริสุทธิ์โดยใช้วิธีดูดซับตาม hydrophobicity ซึ่งจะชื้นคอนจูเกตแต่ไม่ฟรีโพลีแซคคาไรด์ 30 เป็นหลังมีแนวโน้มจะน้อย hydrophobic โดยมากความเข้มข้นของเกลือ (ลีส์ แอนดรูว์ et al. W02011017101 Pawlowski, Andrzegวัคซีน (2000) 18:1873-1885) ทำ โดย exploiting ฟอกดังกล่าว 3PCT-1424ลักษณะ hydrophobic ของโปรตีนซึ่งส่วนใหญ่เป็นไปตามสัดส่วนของพื้นที่ผิวไม่ใช่ขั้วโลกของโปรตีนรวมทั้งการกระจาย ถ้าโปรตีน คอนจูเกตd เป็น hydrophobic น้อย โครมาโทกราฟี hydrophobic โต้ไม่ได้เลือกทำให้บริสุทธิ์เช่นคอนจูเกต5เจลอาบน้ำโครมาโทกราฟีมักใช้ต้องทำการโพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกต (ลีส์ แอนดรูว์ et al. (1996) ' วัคซีน 14(3): 190-198 Libonคริ (2002) วัคซีน 20:2174-พัก 2180 เจเอช Jennings และ Lugowski, J. C. (1981)ภูมิคุ้มกันวิทยา 127:1011-1018) อย่างไรก็ตาม เทคนิคดังกล่าวประสบจากหลายจำกัด 10 ตัวอย่าง ทำให้บริสุทธิ์โดยใช้โมเลกุล sieving โดยเจลอาบน้ำเพียงบรรลุโครมาโทกราฟี โดยเสียสละผลผลิตเนื่องจากความละเอียดคอนจูเกตดิบไม่เพียงพอ เพราะช่วงแคบแยกส่วน ร่วมกันของเศษส่วนที่เหมาะสมที่ประกอบด้วยคอนจูเกตระบุต้องการทักษะมาก ใด ๆข้อผิดพลาดในการเก็บรวบรวมเศษส่วนอาจทำให้สูญเสียคอนจูเกตหรือเพิ่มขึ้น 15 ของสมาคมสารปนเปื้อนกับคอนจูเกตที่เป็นคอนจูเกตการ และ แยกสารปนเปื้อนในช่วงแคบมาก (ดูฟิกลา) เพิ่มเติม มันต้องใหญ่ จำนวนเมทริกซ์กรองเจ และเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเวลา ในการนี้ ปัญหาที่เกี่ยวข้องกับคอลัมน์ที่บรรจุ ปัจจัยเหล่านี้ทำให้ต้นทุนสูง ผลิตซึ่งทำให้รู้ข้าวยากหมากแพง จำกัดการใช้กว้างขวางมากขึ้นใน20 โปรแกรมวัคซีนความซับซ้อนที่เกี่ยวข้องกับ conjugation ประมวลผลปกติผลสูง หลากหลายแตกต่างกันมักจะแตกต่างกันในทางกายภาพและเคมีสารปนเปื้อน คุณสมบัติขนาดโมเลกุล ค่า ionic, hydrophobicity ฯลฯ 25 ปัจจัยเหล่านี้ได้ทำการแยกตามหลักการเดียวของโครมาโทกราฟีที่ไม่เพียงพอเพื่อ บรรลุระดับฟอกสำหรับคอนจูเกตที่จะใช้เป็นวัคซีนจำเป็น ดังนั้น การใช้โครมาโทกราฟีบางครั้งมากกว่าหนึ่งขั้นตอนต้องทำการ โพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกต Fattom, al. และอาลี (ติดเชื้อและภูมิคุ้มกัน (1988) 56(9): 2292-2298) อธิบายกระบวนการขั้นตอนที่สองคอนจูเกตโดยที่โปรตีน 30 โพลีแซคคาไรด์คอนจูเกตบางส่วนบริสุทธิ์ผ่านเมทริกซ์เจลเครื่องกรองทำให้บริสุทธิ์ ตามจับไปกลาง hydrophobic รับคอนจูเกตบริสุทธิ์ 4PCT-1424รับวิธีการดังกล่าวโดยรวมผลผลิตของคอนจูเกตหลายขั้นตอนโครมาโทกราฟีและยังผลในการเพิ่มจึง ผลิตปริมาณสำคัญของโพลีแซคคาไรด์คอนจูเกตโปรตีนสำหรับใช้ 5 รู้ได้ถูกผู้ที่ขัดขวางเนื่องจากความซับซ้อนในกระบวนศิลปะก่อนที่นำไปสู่ ผลผลิตต่ำและต้นทุนสูงการผลิต ดังนั้น มีความจำเป็นในการพัฒนาอื่น วิธีการทำให้บริสุทธิ์ของคอนจูเกตโปรตีนโพลีแซคคาไรด์ซึ่งมีความสะดวกในการ ผลิต ซึ่งเป็นผลผลิตดีจึงเวลาน้อยใช้เวลา นาน และ ที่เหมือนกัน การประดิษฐ์นี้ช่วยให้วิธีการอย่างมีประสิทธิภาพโดยไม่คาดคิดของการเอาสิ่งสกปรกหรือสารปนเปื้อน 10 จากโพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกต ใช้ผสมโหมดโครมาโทกราฟี (Orlovsky โครมาโทกราฟี Vlad et al (2011) วันนี้ 4(3) 24-28 W02005082483 W02009131526, W02010005364) วิธีนี้มีประสิทธิภาพจู่ ๆ อยู่ปัญหายาวนานที่เกี่ยวข้องกับกระบวนการศิลปะก่อนใช้โพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกตบริสุทธิ์ กระบวนการการประดิษฐ์ 15 operationally ง่าย สามารถปรับได้ ต้องการทรัพยากรน้อยกว่า และมากกว่า ผลผลิตและผลิตภัณฑ์มีคุณภาพสม่ำเสมอสรุปการประดิษฐ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การทำให้บริสุทธิ์ของโพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกต "ยื่นของการประดิษฐ์: การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับด้านการทำให้บริสุทธิ์ของโพลีแซคคาไรด์โปรตีน5 คอนจูเกตเพื่อใช้เป็นวัคซีนภูมิหลังการติดเชื้อแบคทีเรียยังคงเป็นหนึ่งในสาเหตุสำคัญของการก่อให้เกิดโรคในทารกและเด็กโดยเฉพาะอย่างยิ่งในประเทศกำลังพัฒนา(Osrin เดวิด, et al (2004) ปัจจุบัน 10 ความเห็นในโรคติดเชื้อ 17 (3):. 217-224; เธเออร์ Durrane และ Zaidi, แอนนิต้าKM (2009) โรคติดเชื้อในเด็กวารสาร 28 (1): S3-S9; Saez-Llorens ซาเวียร์et al, 2003 มีดหมอ 361 (9375).. 2139-2148; ธาปาร์, Nikhil et al, 2004 มีดหมอ363 (9409). 641-653) เชื้อโรคพบมากที่สุดคือ Haemophilus influenzae ชนิดB, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis (. พอลลาร์, แอนดรูเจ, et al (2009) 15 ความคิดเห็นธรรมชาติวิทยา 9 (3): 213-220) เชื้อ Staphylococcus aureus, Shigella, Salmonella, Vibrio cholerae ฯลฯ จำนวนมากของเด็กที่ตายในแต่ละปีเป็นผลมาจากการติดเชื้อดังกล่าว. โพลีแซคคาไรด์แอนติเจนได้รับหนึ่งในองค์ประกอบที่สำคัญของวัคซีนเชื้อแบคทีเรีย 20 ใช้ในการป้องกันโรคที่เกี่ยวข้อง กับ Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae (แลร์รี่พิกเคอริ K et al, (1985) ติดเชื้อโรคจดหมายข่าว4 (11): 84-87) และ Salmonella enterica serovar typhi (Hessel L.., et al (1999) Eur J Clin Microbiol และการติดเชื้อ Dis 18 (9): 609-620) แต่ส่วนใหญ่ของแบคทีเรียโพลีแซคคาไรด์เป็น T-cell แอนติเจนอิสระป้องกันการพัฒนาของหน่วยความจำ 25 B-เซลล์ที่นำไปสู่การตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกันยากจนแอนติเจนดังกล่าวในเด็กด้านล่างสองปีและผู้สูงอายุ ผันโควาเลนต์ของโพลีแซคคาไรด์แอนติเจนผู้ให้บริการโปรตีนพวกเขามอบความสามารถในการสร้างการตอบสนองของร่างกายและบอกพวกเขาความสามารถของT-cell แอนติเจนขึ้นอยู่กับ ดังกล่าวคอนจูเกตได้รับการพิสูจน์แล้วว่ามีประสิทธิภาพในการป้องกันโรคที่เกิดจากแบคทีเรีย โพลีแซคคาไรด์ 30 คอนจูเกตวัคซีนได้รับอนุญาตสำหรับการใช้งานในหลายส่วนของโลกมานานกว่าสองทศวรรษ(อดัมส์, วิลเลียมกรัม, et al (1993) JAMA 269 (2):. 221-226 ). 2 PCT-1424 บริสุทธิ์ของโพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกตได้เสมอความท้าทาย ดังกล่าวคอนจูเกตเป็นที่รู้จักกันจะเกี่ยวข้องกับการปนเปื้อนเช่นยกเลิกปฏิกิริยาโพลีแซคคาไรด์ (ฟรีโพลีแซคคาไรด์) เพชรรัตน์ยกเลิกปฏิกิริยา (โปรตีนฟรี) ต่ำน้ำหนักโมเลกุลคอนจูเกตและสารเคมีอื่น ๆ ที่ใช้ในการส่งผลกระทบต่อการเชื่อมต่อกันเช่น 5 linkers ตัวแทนมีเพศสัมพันธ์ ฯลฯ สารปนเปื้อนที่ไม่พึงประสงค์ดังกล่าวเป็นอย่างมากในผลิตภัณฑ์ซึ่งมีวัตถุประสงค์เพื่อใช้เป็นวัคซีน ตัวอย่างเช่นจำนวนเงินที่สูงของฟรีโพลีแซคคาไรด์ที่ไม่พึงประสงค์ในองค์ประกอบวัคซีนในขณะที่มันอาจจะรบกวนการทำงานของฟังก์ชั่นของระบบภูมิคุ้มกันของคอนจูเกต(Peeters, CAM et al. (1992) วัคซีน10 (12) : 833-840) สารปนเปื้อนมักจะแตกต่างกันในขนาดโมเลกุลค่าใช้จ่ายอิออนและ 10 hydrophobicity ทำให้มันยากที่จะจ้างงานเดียวโครมาโทกราฟีขั้นตอนเพื่อให้บรรลุระดับความบริสุทธิ์ที่ต้องการเพื่อให้มีการใช้เป็นวัคซีน. โพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอน จูเกตได้รับมักจะบริสุทธิ์จากสิ่งสกปรกหรือสารปนเปื้อนโดยใช้เทคนิคมาตรฐานต่างๆเช่นการปั่นแยกลาดหนาแน่น15 กรองที่มีการแยกแอมโมเนียมซัลเฟต (US 6146902) เอทานอลเร่งรัดการยกเว้นการกรองเจลหรือขนาดโครมาโทกราฟีปฏิสัมพันธ์ชอบน้ำโครมาโทกราฟีหรือการแลกเปลี่ยนไอออนโครมาโทกราฟี. แลกเปลี่ยนไอออนโครมาโทกราฟีได้รับพบว่าส่วนใหญ่เหมาะในการชำระล้าง 20 โพลีแซคคาไรด์ แต่ก็ยังไม่ได้พบ ที่เหมาะสมในการชำระล้างคอนจูเกตและอื่น ๆโดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อมีการคอนจูเกตจะต้องบริสุทธิ์ในระดับขนาดใหญ่ ไซมอน, ราฟาเอล(W02012061400) อธิบายกระบวนการสำหรับโพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกตทำให้บริสุทธิ์โดยผูกพันคอนจูเกตไอออนที่จะแลกเปลี่ยนและเมทริกซ์เคลือบมันต่อมาที่จะได้รับบริสุทธิ์คอนจูเกต กระบวนการดังกล่าวยังส่งผลให้มีผลผูกพัน 25 ของฟรีโพลีแซคคาไรด์เป็นคอนจูเกตมักจะแสดงค่าใช้จ่ายที่คล้ายกับฟรีโพลีแซคคาไรด์ทำให้การทำให้บริสุทธิ์ของคอนจูเกตที่ยากลำบาก. โพลีแซ คคาไรด์โปรตีนคอนจูเกตนอกจากนี้ยังอาจทำให้บริสุทธิ์โดยใช้วิธีการดูดซับขึ้นอยู่กับไฮโดรซึ่งจะดูดซับคอนจูเกต แต่ไม่ฟรี30 โพลีแซคคาไรด์เป็นหลังมีแนวโน้มที่จะไม่ชอบน้ำน้อย โดยใช้สูงความเข้มข้นของเกลือ(ลีแอนดรู et al, W02011017101; Pawlowski, Andrzeg. (2000) วัคซีน 18: 1873-1885) การทำให้บริสุทธิ์ดังกล่าวจะทำได้โดยการใช้ประโยชน์จาก3 PCT-1424 ธรรมชาติน้ำของโปรตีนซึ่งเป็นหน่วยงานหลักโดยสัดส่วนของพื้นที่ผิวที่ไม่มีขั้วของโปรตีนเช่นเดียวกับการกระจายของพวกเขา ถ้าคอนจูเกตงโปรตีนชอบน้ำน้อยกว่าการทำงานร่วมกันกับน้ำโครมาโทกราฟีไม่อาจจะเป็นทางเลือกที่ดีของบริสุทธิ์เช่นคอนจูเกต. 5 กรองเจลโครมาโทกราฟีได้รับการใช้กันมากที่สุด ในการชำระล้างลีแซโพคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกต(ลีแอนดรู, et al (1996) 'วัคซีน 14 (3):. 190-198; Libon, คริสติน (2002) วัคซีน 20: 2174-2180; เจนนิงส์ ฮยอนจุงและ Lugowski, C. (1981) เจภูมิคุ้มกัน127: 1011-1018) แต่เทคนิคดังกล่าวต้องทนทุกข์ทรมานจากหลาย ๆ10 ข้อ จำกัด ยกตัวอย่างเช่นการทำให้บริสุทธิ์โดยใช้ sieving โมเลกุลโดยการกรองเจลโครมาโทกราฟีเท่านั้นที่สามารถทำได้โดยการเสียสละอัตราผลตอบแทนที่เกิดจากการความละเอียดไม่เพียงพอของน้ำมันดิบคอนจูเกต เพราะในช่วงที่แยกแคบร่วมกันของส่วนที่มีความเหมาะสมที่ต้องการคอนจูเกตต้องใช้ทักษะมาก ใด ๆ ที่ผิดพลาดในการจัดเก็บภาษีส่วนจะนำไปสู่การสูญเสียที่สำคัญของคอนจูเกตหรือเพิ่มขึ้น15 ความเสี่ยงของความสัมพันธ์ของสารปนเปื้อนที่มีคอนจูเกตเป็นคอนจูเกตและสารปนเปื้อนที่แยกต่างหากในช่วงแคบมาก(ดูรูปลา) . นอกจากนี้จะต้องมีขนาดใหญ่ปริมาณของเมทริกซ์กรองเจลและระยะเวลาดำเนินการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญนอกเหนือไปจากปัญหาที่เกี่ยวข้องกับการบรรจุคอลัมน์ ปัจจัยทั้งหมดเหล่านี้นำไปสู่ค่าใช้จ่ายที่สูงขึ้นของการผลิตซึ่งจะทำให้วัคซีน unaffordable ที่ จำกัด การใช้งานกว้างใน 20 โปรแกรมการฉีดวัคซีน. ความซับซ้อนเกี่ยวข้องกับกระบวนการผันมักจะส่งผลให้สูงอาร์เรย์ที่แตกต่างกันของสารปนเปื้อนมักจะแตกต่างกันในทางกายภาพและเคมีคุณสมบัติเช่นขนาดโมเลกุลค่าใช้จ่ายอิออนไฮโดร ฯลฯ ปัจจัยเหล่านี้ได้ทำ 25 แยกบนพื้นฐานของหลักการเดียวของโครมาโทกราฟีไม่เพียงพอที่จะบรรลุระดับที่จำเป็นของการทำให้บริสุทธิ์สำหรับคอนจูเกตที่จะใช้เป็นวัคซีน. ดังนั้นบางครั้งมากกว่า หนึ่งโครมาโทกราฟีขั้นตอนที่จะนำมาใช้ในการชำระล้างโพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกต Fattom อาลีอัลเอต (การติดเชื้อและมีภูมิคุ้มกันโรค (1988) 56 (9): 2292-2298) อธิบายกระบวนการขั้นตอนที่สองของบริสุทธิ์โพลีแซคคาไรด์โปรตีน 30 คอนจูเกตโดยที่คอนจูเกตเป็นเพียงบางส่วนบริสุทธิ์มากกว่าเจล เมทริกซ์กรองตามด้วยการจับลงบนกลางน้ำที่จะได้รับบริสุทธิ์คอนจูเกต. 4 PCT-1424 วิธีการดังกล่าวบั่นทอนผลผลิตโดยรวมของคอนจูเกตอันเนื่องมาจากหลายโครมาโทกราฟีขั้นตอนและยังส่งผลในขั้นตอนที่เพิ่มขึ้น เวลา. ดังนั้นปริมาณการผลิตที่สำคัญของโพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกตสำหรับการใช้งาน 5 ในวัคซีนได้รับการขัดขวางเนื่องจากความซับซ้อนในกระบวนการศิลปะก่อนนำไปสู่ผลตอบแทนต่ำและค่าใช้จ่ายสูงในการผลิต ดังนั้นจึงมีความจำเป็นในการพัฒนาทางเลือกวิธีการทำให้บริสุทธิ์ของโพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกตซึ่งมีความสะดวกในการผลิตซึ่งจะเสียเวลาน้อยลงและในเวลาเดียวกันที่นำเสนออัตราผลตอบแทนที่ดี. การประดิษฐ์นี้ ให้เป็นวิธีที่มีประสิทธิภาพโดยไม่คาดคิดของการลบ 10 สิ่งสกปรกหรือสารปนเปื้อนจากโพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกตจ้างผสมโหมดโครมาโทกราฟี(Orlovsky วลาด, et al (2011) โครมาโทกรา ฟีวันนี้ 4 (3) 24 28 W02005082483; W02009131526, W02010005364) นี้วิธีที่มีประสิทธิภาพที่น่าแปลกใจที่อยู่ในปัญหาที่ยาวนานที่เกี่ยวข้องกับกระบวนการศิลปะก่อนนำมาใช้ในการชำระล้างโพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกต กระบวนการของการประดิษฐ์ที่มีความเรียบง่ายในการดำเนินงาน 15 ปรับขนาดได้อย่างง่ายดายต้องใช้ทรัพยากรน้อยลงและมีมากขึ้นอัตราผลตอบแทนและผลิตภัณฑ์ที่มีคุณภาพสม่ำเสมอ. สรุปการประดิษฐ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การโพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกต "


ยื่นของการประดิษฐ์ :
การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับด้านการคอนจูเกตโปรตีน
โพลีแซคคาไรด์ 5 เพื่อใช้เป็นวัคซีน



หลังการติดเชื้อแบคทีเรียยังคงเป็นหนึ่งในสาเหตุสำคัญของโรคที่ก่อให้เกิดทารก
และเด็กโดยเฉพาะในประเทศกำลังพัฒนา ( osrin เดวิด et al . ( 2004 ) ปัจจุบัน 10 ความคิดเห็นในโรคติดเชื้อ 17 ( 3 ) : 217-224 ; เทเยอร์ durrane และเพิ่มเติม , แอนนิต้า
กิโลเมตร ( 2009 ) กุมารเวชศาสตร์โรคติดเชื้อวารสาร 29 ( 1 ) : s3-s9 ; saez llorens เซเวียร์
et al . 2003 Lancet 361 ( 9375 ) : 2139-2148 ; thapar นิค , et al . 2547 มีดหมอ
363 ( 9409 ) : 641-653 )เชื้อโรคที่พบบ่อยที่สุดคือ Ha98574 ประเภท
B Streptococcus pneumoniae Need for Speed series ( Pollard , Andrew J et al . ( 2009 ) 15 ธรรมชาติรีวิววิทยาภูมิคุ้มกัน 9 ( 3 ) : 213-220 ) , Staphylococcus aureus , Vibrio cholerae เชื้อชิเกลลา
, , ฯลฯ จำนวนมากของเด็กที่ตายในแต่ละปีผล


ของเชื้อดังกล่าวโพลีแซคคาไรด์แอนติเจนได้รับหนึ่งในองค์ประกอบหลักของแบคทีเรียวัคซีนใช้ป้องกันโรคที่เกี่ยวข้องกับ Ha98574 ไนซีเรียสายพันธุ์ Streptococcus pneumoniae ,
, K ( Larry Pickering et al . ( 1985 ) ติดเชื้อโรค .
4 ( 11 ) : 84-87 ) และ Salmonella enterica ซีโรวาร์ไทฟอยด์ ( เฮสเซิล L
et al . ( 1999 ) EUR J Clin ธนิดา เหรียญทอง B Sc &ติดเชื้อโรค .18 ( 9 ) : 609-620 ) แต่ส่วนใหญ่แล้ว
โพลีแซคคาไรด์แบคทีเรียจากแอนติเจนอิสระป้องกันการพัฒนาของบี - 25 หน่วยความจำายากจนภูมิคุ้มกันแอนติเจนดังกล่าวในเด็ก
ด้านล่างสองปีและผู้สูงอายุคน การรวมกันของการโพลีแซคคาไรด์แอนติเจน
ผู้ให้บริการโปรตีนให้พวกเขามีความสามารถในการสร้างการตอบสนอง humoral ,และแจกจ่าย
พวกเขาความสามารถของจากขึ้นอยู่กับแอนติเจน คอนจูเกตดังกล่าวได้รับการพิสูจน์แล้วว่ามีประสิทธิภาพในการป้องกัน
โรคที่เกิดจากแบคทีเรียเชื้อโรค โพลีแซคคาไรด์ 30 คอนจูเกตวัคซีนได้รับใบอนุญาตสำหรับการใช้งานในส่วนต่างๆของโลกมานานกว่าสองทศวรรษ
( อดัมส์ , วิลเลียมกรัม et al . ( 1993 ) Jama 269 ( 2 ) : 221-226 ) .






pct-1424 2การโพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกตเสมอมีความท้าทาย คอนจูเกตดังกล่าวเป็นที่รู้จักกันเพื่อให้สามารถเชื่อมโยงกับสิ่งปนเปื้อน เช่น ยูเอ็นปฏิกิริยาโพลีแซคคาไรด์ ( โพลีแซคคาไรด์ฟรี ) , และปฏิกิริยาโปรตีนขนส่ง ( โปรตีนน้ำหนักโมเลกุลต่ำ ฟรี ) , คอนจูเกต
,และสารเคมีอื่น ๆที่มีผลต่อการใช้เช่น 5 เป็น linkers ตัวแทน coupling ฯลฯ เช่นสารปนเปื้อนเป็นอย่างสูงที่ไม่พึงประสงค์ในผลิตภัณฑ์
ซึ่งมีวัตถุประสงค์เพื่อใช้เป็นวัคซีน ตัวอย่างเช่น วงเงินสูง โพลีแซคคาไรด์ฟรี
เป็นที่ไม่พึงประสงค์ในวัคซีนองค์ประกอบมันอาจรบกวนการทำงานของคอนจูเกต
วิทยาภูมิคุ้มกัน ( PEETERS c.a.m. , et al .( 1992 ) วัคซีน
10 ( 12 ) : 833-840 ) สารปนเปื้อนต่างๆมักจะแตกต่างกันในค่าใช้จ่ายและขนาดโมเลกุล ไอออน 10 ไม่ชอบทำให้ยากที่จะจ้างเดียวโครมาโทกราฟีขั้นตอนเพื่อให้บรรลุระดับที่ต้องการ
บริสุทธิ์เพื่อใช้เป็นวัคซีน . . . . .

โพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกตมักจะมีสิ่งสกปรกหรือ
บริสุทธิ์จากสารปนเปื้อน โดยเทคนิคมาตรฐานต่างๆ เช่น ความหนาแน่นของการปั่น 15 กรองด้วยแอมโมเนียม ซัลเฟต ( ( เรา 6146902 ) ด้วยเอทานอล
gel filtration หรือขนาดไม่โครมาโทกราฟีโครมาโทกราฟีปฏิสัมพันธ์ ,
)

หรือโครมาโทกราฟีแลกเปลี่ยนไอออนโครมาโทกราฟีแลกเปลี่ยนไอออนได้ค้นพบส่วนใหญ่เหมาะที่จะชำระ 20 โพลีแซคคาไรด์ แต่มันไม่เจอที่เหมาะสมให้คอนจูเกตมากขึ้น
โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อคอนจูเกตจะบริสุทธิ์ในระดับขนาดใหญ่ ไซมอน ราฟาเอล
( w02012061400 ) ได้อธิบายถึงกระบวนการโพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกต
บริสุทธิ์โดยการจับกับไอออนแลกเปลี่ยนคอนจูเกตเมทริกซ์และ hexane มัน
ต่อมาได้รับคอนจูเกตบริสุทธิ์ . กระบวนการดังกล่าวยังมีผลในการจับ 25 ของโพลีแซคคาไรด์ฟรี เช่น คอนจูเกตมักจะจัดแสดงค่าใช้จ่ายคล้ายกับฟรี
โพลีแซคคาไรด์การฟอกคอนจูเกตยาก

โพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกตอาจบริสุทธิ์ใช้วิธีการดูดซับขึ้นอยู่กับบรรจุภัณฑ์ ซึ่งจะดูดซับคอนจูเกตแต่ไม่ฟรี
30 โพลีแซคคาไรด์เป็นหลังมีแนวโน้มที่จะ ) ให้น้อยลง โดยใช้เกลือความเข้มข้นสูง
( ลีส์ แอนดรู et al . w02011017101 ; pawlowski andrzeg
( 2000 ) , วัคซีน 18 : 1873-1885 )เช่นผลิตโดย exploiting




3

) pct-1424 ธรรมชาติของโปรตีน ซึ่งส่วนใหญ่เป็นไปตามสัดส่วนของพื้นที่ผิวไม่มีขั้วของโปรตีน รวมทั้งการกระจายทางพื้นที่ของพวกเขา . ถ้าคอนจูเกต D เป็น hydrophobic โปรตีนน้อยลง ปฏิสัมพันธ์โครมาโทกราฟี ) อาจเป็นทางเลือกที่ต้องการของบริสุทธิ์เช่นคอนจูเกต
5
.โครมาโทกราฟีกรองเจลได้ถูกใช้กันมากในการฟอกโพลีแซคคาไรด์
โปรตีนคอนจูเกต ( ลีส์ แอนดรู et al . ( 1996 ) ' วัคซีน 14 ( 3 ) : 190-198 ; ประ
คริสติน ( 2002 ) , วัคซีน 20 : 2174-2180 ; เจนนิงส์ , H J และ lugowski , C . ( 2524 ) J .
วิทยาภูมิคุ้มกัน 127 : 1011-1018 ) อย่างไรก็ตาม เทคนิคดังกล่าวประสบหลาย
10 ข้อจํากัด ตัวอย่างเช่นการใช้โมเลกุลตะแกรงกรองบำบัดน้ำเสียโดยโครมาโทกราฟี
เจลสามารถทําได้โดยการเสียสละผลผลิตไม่เพียงพอ เนื่องจากความละเอียดของดิบคอนจูเกต . เพราะในช่วงการ แคบ รวมเศษส่วนที่เหมาะสมที่มีคอนจูเกตที่ต้องการต้องใช้ทักษะมาก
ใด ๆข้อผิดพลาดในการรวบรวมเศษสามารถนำไปสู่การสูญเสียที่สำคัญของคอนจูเกตหรือเพิ่ม 15 ความเสี่ยงของสมาคมสารปนเปื้อนด้วยคอนจูเกตเป็นคอนจูเกต
) และแยกในช่วงแคบมาก ( ดูรูปลา ) ต่อไปก็ต้องใช้ปริมาณมาก
ของเมทริกซ์ gel filtration และเพิ่มขึ้นกระบวนการเวลา นอกจาก
ปัญหาที่เกี่ยวข้องกับการบรรจุคอลัมน์ ปัจจัยเหล่านี้ทำให้ต้นทุนการผลิตวัคซีน
ซึ่งทำให้ unaffordable สูง จำกัด ของพวกเขากว้างใช้ในโปรแกรมวัคซีน
20

ความซับซ้อนที่เกี่ยวข้องกับกระบวนการการรวมกันโดยปกติผลลัพธ์สูง
ต่างกันอาร์เรย์ของสารปนเปื้อนมักจะแตกต่างกันในทางกายภาพและเคมี
คุณสมบัติเช่นขนาดโมเลกุลอิออน ค่า ความไม่ชอบ เป็นต้น ปัจจัยเหล่านี้ได้ทำให้การแยกบนหลักการเดียวของโครมาโทกราฟีไม่เพียงพอที่จะบรรลุระดับที่ต้องการ
บริสุทธิ์สำหรับคอนจูเกตเพื่อใช้เป็นวัคซีน
ดังนั้นบางครั้งขั้นตอนมากกว่าหนึ่งโครมาโทกราฟีได้ถูกใช้เพื่อชำระ
โพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกต .fattom , Ali et al . การติดเชื้อและภูมิคุ้มกัน ( 1988 )
56 ( 9 ) : 2292-2298 ) ได้อธิบายถึงกระบวนการขั้นตอนที่สองของบริสุทธิ์เป็นโพลีแซคคาไรด์โปรตีน 30 คอนจูเกตโดยที่คอนจูเกตคือที่บริสุทธิ์บางส่วนผ่าน gel filtration เมทริกซ์
ตามด้วยจับลงบนกลาง ) เพื่อให้ได้โปรตีนคอนจูเกต .






pct-1424 4วิธีการประนีประนอม ผลผลิตโดยรวมของคอนจูเกตเนื่องจากขั้นตอนโครมาโทกราฟีหลายและยังส่งผลในการเพิ่มกระบวนการเวลา

ดังนั้นการผลิตปริมาณสําคัญโพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกตสำหรับใช้ในวัคซีนถูกขัดขวางเนื่องจากความซับซ้อนในศิลปะก่อนกระบวนการนำไปสู่
ผลผลิตต่ำ และต้นทุนการผลิตสูงดังนั้น ต้องมีการพัฒนาทางเลือก
วิธีการฟอกคอนจูเกตโปรตีนโพลีแซคคาไรด์ซึ่งมีความสะดวก
ผลิต ซึ่งจะเสียเวลาน้อยลงและในเวลาเดียวกันเสนอดี ผลผลิต
การการประดิษฐ์นี้ให้วิธีที่มีประสิทธิภาพโดยไม่คาดคิดเอา 10 สิ่งสกปรกหรือสารปนเปื้อนจากโพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกต ใช้โครมาโทกราฟีโหมดผสม
( Orlovsky วลาด et al ( 2011 ) โครมาโทกราฟีวันนี้ , 4 ( 3 ) 24 - 28 w02005082483
; ; w02009131526 w02010005364 , )วิธีที่มีประสิทธิภาพอย่างแปลกใจนี้เน้นปัญหาระยะยาวที่เกี่ยวข้องกับศิลปะก่อนกระบวนการ
ใช้ฟอกโพลีแซคคาไรด์โปรตีนคอนจูเกต . กระบวนการของการประดิษฐ์ 15 ดี ง่าย ยืดหยุ่นได้ง่าย ต้องใช้ทรัพยากรน้อยลง และมีผลิตภัณฑ์คุณภาพและผลผลิตมากขึ้น



ที่สอดคล้องกันบทสรุปของการประดิษฐ์