Antibody labelling. The affinity pu

Antibody labelling. The affinity purified immunoglobulin
(IgG) was conjugated to colloidal gold (40 nm) according to the
methods, as described previously (Horisberger, 1989). The
optimal concentration of antibody for conjugation with colloidal
gold was determined by titrating aliquots of diluted IgG
with colloidal gold. The purified IgG was diluted to a concentration
of 0.1 mg/ml in sodium phosphate buffer (1 mM, pH 7.0).
The pH of colloidal gold solution and the diluted IgG was adjusted
to pH 8.0 with 0.1 M KCO3. Ten aliquots of variable concentrations
(0.01-0.1 mg/ml) of the diluted IgG were prepared
in 0.2 ml sodium phosphate buffer. Then, a series of diluted IgG
solution was added separately to 1 ml of the colloidal-gold solution,
as described previously (Li et al., 2013). After incubating the
mixture for 10 min, 0.1 ml of 10% NaCl was added to the tubes
and the absorbance was measured at 520 nm. The least amount
of protein required to stabilize the colloidal gold was identified
from the abscissa in the curve drawn from the concentration
and the absorbance. Aliquot (approximately 10 ml) of purified
IgG (0.1 mg/ml) was added drop-wise to l00 ml of colloidal-gold
solution (pH 8.0) followed by the addition of 10 ml of filtered
10% bovine serum albumin (BSA), pH 8.0 with gentle stirring
for 20-25 min. The solution was incubated for 10 min at 25°C
and centrifuged at 15,000 g for 30 min at 4°C.
The supernatant was discarded and the loose precipitate of gold conjugate was
re-suspended in 5 ml conjugate dilution buffer (1 mM Tris, 1%
ovalbumin, 1% sucrose, and 0.03% sodium azide) and stored at
4°C, as described previously (Lai et al., 2010).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การติดฉลากแอนติบอดี ความสัมพันธ์อิมมูโนบริสุทธิ์
(IgG) ถูกผันทองคอลลอยด์ (40 นาโนเมตร)
ตามวิธีการตามที่ระบุไว้ก่อนหน้านี้(Horisberger, 1989)
ความเข้มข้นที่เหมาะสมของแอนติบอดีสำหรับการผันกับคอลลอยด์ทองถูกกำหนดโดยวิเคราะห์การ aliquots ของ IgG เจือจางด้วยทองคอลลอยด์ IgG บริสุทธิ์จะถูกเจือจางความเข้มข้น0.1 mg / ml ในบัฟเฟอร์โซเดียมฟอสเฟต (1 มิลลิค่า pH 7.0). เป็นกรดเป็นด่างของสารละลายทองคอลลอยด์และ IgG เจือจางปรับค่าพีเอช8.0 กับ 0.1 M KCO3 สิบ aliquots ความเข้มข้นของตัวแปร(0.01-0.1 mg / ml) ของ IgG ปรับลดได้จัดทำใน 0.2 มล. โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ จากนั้นชุดของ IgG เจือจางแก้ปัญหาที่ถูกเพิ่มเข้ามาแยก1 มิลลิลิตรของการแก้ปัญหาคอลลอยด์ทองตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้(Li et al., 2013) หลังจากบ่มส่วนผสมเป็นเวลา 10 นาที, 0.1 มล. 10% โซเดียมคลอไรด์ถูกบันทึกอยู่ในท่อและการดูดกลืนแสงที่ถูกวัดที่520 นาโนเมตร จำนวนน้อยที่สุดของโปรตีนที่จำเป็นในการรักษาเสถียรภาพของทองคอลลอยด์ถูกระบุจากพิกัดในโค้งมาจากความเข้มข้นและดูดกลืนแสง aliquot (ประมาณ 10 มล.) ของบริสุทธิ์IgG (0.1 mg / ml) ถูกบันทึกหล่นฉลาดที่จะ l00 มลคอลลอยด์ทองวิธีการแก้ปัญหา(pH 8.0) ตามด้วยนอกเหนือจาก 10 มิลลิลิตรกรอง10% โปรตีนชนิดหนึ่งในซีรั่มวัว (BSA) พีเอช 8.0 กับกวนอ่อนโยน20-25 นาที วิธีการแก้ปัญหาที่ได้รับการบ่มเป็นเวลา 10 นาทีที่ 25 ° C และหมุนเหวี่ยงที่ 15,000 กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่ 4 ° C. สารละลายทิ้งและตะกอนหลวมผันทองอีกครั้งที่ลอยอยู่ในขนาด 5 ml ผันบัฟเฟอร์เจือจาง (1 มิลลิทริส, 1% ovalbumin ซูโครส 1% และ 0.03% โซเดียมเอไซด์) และเก็บไว้ที่4 องศาเซลเซียสในขณะที่อธิบายไว้ก่อนหน้า (Lai et al., 2010)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ฉลากแอนติบอดี affinity บริสุทธิ์อิมมูโนโกลบูลิน ( IgG conjugated กับ
) เป็นคอลลอยด์ทอง ( 40 nm ) ตาม
วิธีการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( horisberger , 1989 )
ที่เหมาะสมปริมาณแอนติบอดี ) กับ colloidal
ทองถูกกำหนดโดย titrating เฉยๆเมื่อ IgG
กับคอลลอยด์ทอง ทำให้เจือจางในความเข้มข้น IgG
0 .1 มก. / มล. ( 1 มิลลิเมตรในฟอสเฟตบัฟเฟอร์พีเอช 7.0 ) .
พีเอชของสารละลายที่เจือจางทองคอลลอยด์และ IgG เพื่อปรับ pH 8.0 ด้วย 0.1 M
kco3 . สิบของตัวแปร ( 0.01-0.1 เฉยๆ
10 mg / ml ) ของค่า IgG เตรียม
ใน 0.2 มล. โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ แล้วชุดของสารละลายเจือจาง IgG
เพิ่มแยก 1 มิลลิลิตรของสารละลายทองคอลลอยด์
ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( Li et al . , 2013 ) หลังจากการแช่
ผสมเป็นเวลา 10 นาที 10 % NaCl 0.1 มิลลิลิตรเติมหลอด
และค่าวัดที่ 520 nm . จํานวนน้อย
โปรตีนต้องทรงตัวทองคอลลอยด์ถูกระบุ
จากอักษรในโค้งที่วาดจากความเข้มข้นและค่า
. ส่วนที่หารลงตัว ( ประมาณ 10 มล. )
IgG บริสุทธิ์ ( 01 มก. / มล. ) เพิ่ม 100 มิลลิลิตรของสารละลายลดลง ปัญญาทอง
คอลลอยด์ ( pH 8.0 ) ตามด้วยนอกเหนือจาก 10 มิลลิลิตร กรอง
10% เซรั่มอัลบูมิวัว ( BSA ) pH 8.0 กับอ่อนโยนกวน
20-25 นาที สารละลายที่บ่มเป็นเวลา 10 นาทีที่ 25 ° C
ไฟฟ้าที่ 15 , 000 G สำหรับ 30 นาทีที่ 4 ° C .
น่านถูกทิ้งและตกตะกอนหลวมทองผันคือ
Re : 5 ml ) สารแขวนลอยในบัฟเฟอร์ ( 1 มิลลิเมตร หรือ 1 %
โอวัลบูมิน 1% ซูโครสและ 0.03 % โซเดียมไซด์ ) และเก็บไว้ที่
4 ° C , ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( ลาย et al . , 2010 )