2.3. Carotenoid extraction and HPLC

2.3. Carotenoid extraction and HPLC analysis
Carotenoids were extracted according to the procedure of
Meléndez-Martínez et al. (2009) with some modifications. Orange
juice (15 mL) was mixed with 30 mL of extraction solvent (hexane/
ethanol/acetone, 50/25/25 (v/v/v), containing 0.1% butylated
hydroxytoluene (BHT) (w/v)) for 2 min at 11,000 rpm (Ultra-Turrax
mixer-IKA T25; IKA Werke GmbH & Co., Staufen, Germany). The
mixture was centrifuged for 10 min at 6200g at 4 C. A 10-mL aliquot
of supernatant containing carotenoids was transferred in a
separatory funnel and washed 4 times with 10 mL aqueous NaCl
(10%) to remove any trace of acetone. After 1 h of saponification
with 15 mL of 10% (w/v) ethanolic KOH (containing 0.1% (w/v)
BHT), the extract was washed 4 times with 10 mL aqueous NaCl
(10%). The obtained hexane layer was filtered through a 0.20-lm
syringe filter (Chromafil PET-20/25; Macherey-Nagel, Düren,
Germany) and 4 mL of the extract were concentrated to dryness
in a rotary evaporator at 30 C. Prior to injection (20 lL) in the
HPLC system, the carotenoid extract was redissolved in 200 lL of
methanol-acetone mixture (2/1 (v/v), containing 0.1% (w/v) BHT).
All samples were extracted in sextuplicate and under subdued light
to avoid carotenoid degradation.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3. carotenoid สกัดและวิเคราะห์ HPLCCarotenoids ที่แยกตามขั้นตอนของMeléndez Martínez et al. (2009) มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง สีส้มน้ำ (15 mL) ถูกผสมกับ 30 มล.ของตัวทำละลายสกัด (เฮกเซน /เอทานอล/อะซิโตน 50/25/25 (v/v/v), ประกอบด้วย 0.1% butylated(บาท) (w/v) hydroxytoluene) สำหรับ 2 นาทีที่ 11000 rpm (Ultra-Turraxเครื่องผสม-IKA T25 IKA Werke GmbH & Co., Staufen เยอรมนี) ที่ส่วนผสมถูก centrifuged สำหรับ 10 นาทีที่ 6200g ที่ค. 4 ส่วนลงตัว 10 mLของ supernatant ประกอบด้วย carotenoids ถูกถ่ายโอนในการseparatory กรวย และล้าง 4 ครั้ง ด้วย 10 mL อควี NaCl(10%) เอาร่องอะซิโตน หลังจาก 1 ชั่วโมงของสะพอนิฟิมี 15 mL 10% (w/v) เกาะ ethanolic (0.1% (w/v) ประกอบด้วยบาท), สารสกัดจากการถูกล้าง 4 ครั้ง ด้วย 10 mL อควี NaCl(10%) เฮกเซนได้รับชั้นที่ถูกกรองผ่าน 0.20-lmเข็มตัวกรอง (Chromafil PET-20/25 Macherey-Nagel, Dürenประเทศเยอรมนี) และ 4 mL ของสารสกัดเข้มข้นเพื่อความแห้งกร้านใน evaporator โรตารี่ที่ 30 C. ก่อนฉีด (20 lL) ในการระบบ HPLC สารสกัด carotenoid ที่ redissolved ใน 200 จะของผสมเมทานอลอะซีโตน (2/1 (v/v), ประกอบด้วย 0.1% (w/v) บาท)ตัวอย่างทั้งหมดถูกสกัด ใน sextuplicate และภาย ใต้แสงปราบเพื่อหลีกเลี่ยงการลด carotenoid

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 การสกัดและการวิเคราะห์ carotenoid HPLC
Carotenoids
สกัดตามขั้นตอนของMeléndez-Martínez et al, (2009) ที่มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง ออเรนจ์น้ำ (15 มิลลิลิตร) ผสมกับ 30 มิลลิลิตรสกัดด้วยตัวทำละลาย (เฮกเซน / เอทานอล / อะซีโตน 50/25/25 (v / v / v) ที่มี 0.1% butylated hydroxytoluene (BHT) (w / v)) สำหรับ 2 นาทีที่ 11,000 รอบต่อนาที (อัลตร้า Turrax ผสม-T25 IKA; IKA Werke GmbH & Co, Staufen, เยอรมนี) ส่วนผสมที่ถูกปั่นเป็นเวลา 10 นาทีที่ 6200g ที่ 4 ซี aliquot 10 มิลลิลิตรของสารละลายที่มีนอยด์ถูกย้ายในช่องทางseparatory และล้างครั้งที่ 4 ที่มี 10 มิลลิลิตรน้ำโซเดียมคลอไรด์(10%) ที่จะลบร่องรอยของอะซิโตนใด ๆ หลังจาก 1 ชั่วโมงของการสะพอกับ15 มิลลิลิตร 10% (w / v) เอทานอลเกาะ (ที่มี 0.1% (w / v) บาท) สารสกัดถูกล้างครั้งที่ 4 ที่มี 10 มิลลิลิตรน้ำโซเดียมคลอไรด์(10%) ชั้นเฮกเซนได้ถูกกรองผ่าน-0.20 ไมครอนกรองเข็มฉีดยา(Chromafil PET-20/25; Macherey-แจคกี้Düren, เยอรมนี) และ 4 มิลลิลิตรของสารสกัดเข้มข้นแห้งในเครื่องระเหยแบบหมุนที่30 องศาเซลเซียสก่อนที่จะฉีด (20 LL) ในระบบHPLC, สารสกัด carotenoid ถูก redissolved 200 LL ของผสมเมทานอล-อะซิโตน(2/1 (v / v) ที่มี 0.1% (w / v) บาท). ตัวอย่างทั้งหมดถูกสกัดใน sextuplicate และ ภายใต้แสงถูกทำให้อ่อนลงเพื่อหลีกเลี่ยงการย่อยสลายcarotenoid

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 การสกัดแคโรทีนและแคโรทีนอยด์การวิเคราะห์
HPLC สกัดตามขั้นตอนของ
เมลจาก ndez มาร์ตีเนซ et al . ( 2009 ) มีการปรับเปลี่ยน น้ำส้ม
( 15 มิลลิลิตร ) ผสมกับ 30 มล. ( ตัวทำละลายสกัดเฮกเซน /
เอทานอล / อะซิโตน , 50 / 25 / 25 ( ปริมาตร / ปริมาตร / ปริมาตร ) ที่ประกอบด้วย 0.1% butylated
เรตไฮดรอกซีโทลูอีนเปรียบเทียบ ( บาท ) ( w / v ) สำหรับ 2 นาทีที่ 11 , 000 รอบต่อนาที ( Ultra turrax
ผสม t25 อิกะ ; อิกะ werke GmbH & Co . ,Staufen , เยอรมนี )
ผสมไฟฟ้าสำหรับ 10 นาทีที่ 6200g 4 C 10 ml ส่วนลงตัว
ของที่มีแคโรทีนอยด์สูง ถูกส่งตัวไปในตัว
ช่องทางและล้าง 4 ครั้งกับ 10 มิลลิลิตร สารละลาย NaCl
( 10% ) เพื่อลบร่องรอยของอะซิโตน หลังจาก 1 ชั่วโมงของการออกซิเดชันทางเคมี
15 ml 10 % ( w / v ) ( เกาะ ( ที่ประกอบด้วย 0.1% ( w / v )
บาท )สารล้าง 4 ครั้งกับ 10 มิลลิลิตร สารละลาย NaCl
( 10% ) นำน้ำกรองผ่านชั้น 0.20-lm
เข็มตัวกรอง ( chromafil pet-20 / 25 ; macherey นาเกล , D üเรน
เยอรมนี ) และ 4 มิลลิลิตร สารสกัดเข้มข้นแห้งระเหยแบบหมุน
ในที่ 30 องศาเซลเซียสก่อนการฉีด ( 20
ll ) ในระบบ HPLC , สารแคโรทีนอยด์เป็น redissolved ใน 200 จะ
ผสมเมทานอลอะซีโตน ( 2 / 1 ( v / v ) ที่ประกอบด้วย 0.1% ( w / v ) บาท )
ตัวอย่างทั้งหมดถูกสกัดใน sextuplicate ภายใต้แสงเพื่อหลีกเลี่ยงการปราบ




ในการย่อยสลาย