In biology, a branched DNA assay is

In biology, a branched DNA assay is a signal amplification assay (as opposed to a target amplification assay) that is used to detect nucleic acid molecules.

From the base up, a branched DNA assay begins with a dish or some other solid support (e.g., a plastic dipstick). The dish is peppered with small, single stranded DNA molecules (or chains) that 'stick up' into the air. These are known as capture probe DNA molecules. Next, an extender DNA molecule is added. Each extender has two domains, one that hybridizes to the capture DNA molecule and one that "hangs out" in the air. The purpose of the extender is two-fold. First, it creates more available surface area for target DNA molecules to bind, and second, it allows the assay to be easily adapted to detect a variety of target DNA molecules.

Once the capture and extender molecules are in place and they have hybridized, the sample can be added. Target molecules in the sample will bind to the extender molecule. So we have a base peppered with capture probes, which are hybridized to extender probes, which in turn are hybridized to target molecules.

At this point, signal amplification takes place. A label extender DNA molecule is added that has two domains (similar to the first extender). The label extender hybridizes to the target and to a pre-amplified molecule. The preamplifier molecule has two domains. First, it binds to the label extender and second, it binds to the amplifier molecule. An example amplifier molecule is an oligonucleotide chain bound to the enzyme alkaline phosphatase.

Diagrammatically, we have Base -> Capture Probe -> Extender -> Target -> label extender -> pre-amplifier -> amplifier

The assay can be used to detect and quantify many types of RNA or DNA target. In the assay, branched DNA is mixed with a sample to be tested. The detection is done using a non-radioactive method and does not require preamplification of the nucleic acid to be detected. The assay entirely relies on hybridization. Enzymes are used to indicate the extent of hybridization but are not used to manipulate the nucleic acids. Thus, small amounts of a nucleic acid can be detected and quantified without a reverse transcription step (in the case of RNA) and/or PCR. The assay can be run as a high throughput assay, unlike quantitative Northern-blotting or the RNAse-protection assay, which are labor-intensive and thus difficult to perform on a large number of samples. The other major high throughput technique employed in the quantification of specific RNA molecules is quantitative PCR, after reverse transcription of the RNA to cDNA.

Several different short single-stranded DNA molecules (oligonucleotides) are used in a branched DNA-assay. The capture and capture-extender oligonucleotide bind to the target nucleic acid and immobilize it on a solid support. The label oligonucleotide and the branched DNA then detects the immobilized target nucleic acid. The immobilization of the target on a solid support makes extensive washing easier, which reduces false positive results. After binding of the target to the solid support it can be detected by branched DNA which is coupled to an enzyme (e.g. alkaline phosphatase). The branched DNA binds to the sample nucleic acid by specific hybridization in areas which are not occupied by capture hybrids. The branching of the DNA allows for very dense decorating of the DNA with the enzyme, which is important for the high sensitivity of the assay[citation needed]. The enzyme catalyzes a reaction of a substrate which generates light (detectable in a luminometer). The amount of light emitted increases with the amount of the specific nucleic acid present in the sample. The design of the branched DNA and the way it is hybridized to the nucleic acid to be investigated differs between different generations of the bDNA assay.[1] Despite the fact that the starting material is not preamplified, bDNA assays can detect less than 100 copies of HIV-RNA per mL of blood.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ชีววิทยา การวิเคราะห์ดีเอ็นเอแบบแยกสาขาเป็นการสัญญาณขยายทดสอบ (ตรงข้ามกับมีเป้าหมายขยาย assay) ที่ใช้ในการตรวจหาโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกจากฐานค่า การวิเคราะห์ดีเอ็นเอแบบแยกสาขาเริ่มต้น ด้วยจานหรือบางอื่น ๆ แข็งสนับสนุน (เช่น dipstick พลาสติก) จานเป็น peppered กับเล็ก โมเลกุลดีเอ็นเอที่ตกค้างเดี่ยว (หรือกลุ่ม) ที่ 'ติดค่า' ไปในอากาศ เหล่านี้จะเรียกว่าจับโมเลกุลดีเอ็นเอโพรบ ถัดไป โมเลกุลดีเอ็นเอเป็น extender จะเพิ่ม แต่ละ extender ได้โดเมนที่สอง ที่ hybridizes โมเลกุลดีเอ็นเอจับและหนึ่งที่ "แฮงออก" ในอากาศ วัตถุประสงค์ของ extender สองพับได้ ครั้งแรก เป็นสร้างพื้นที่ว่างเพิ่มเติมสำหรับโมเลกุลดีเอ็นเอเป้าหมายผูก และสอง จะช่วยให้การวิเคราะห์เพื่อนำไปตรวจหาโมเลกุลดีเอ็นเอเป้าหมายที่หลากหลายประยุกต์ได้ง่ายเมื่อโมเลกุลจับและ extender อยู่ในสถานที่ และพวกเขาได้ผสมพันธุ์ สามารถเพิ่มตัวอย่าง เป้าหมายโมเลกุลจากตัวอย่างจะผูกกับโมเลกุล extender เพื่อให้เรามีฐาน peppered กับจับคลิปปากตะเข้ ซึ่งจะเป็นการ extender คลิปปากตะเข้ ซึ่งจะถูกผสมพันธุ์กับโมเลกุลเป้าหมายจุดนี้ ขยายสัญญาณเกิดขึ้น มีเพิ่มโมเลกุลดีเอ็นเอใน extender สำหรับป้ายชื่อที่มีโดเมนที่สอง (คล้ายกับ extender แรก) ป้าย extender hybridizes เป้าหมาย และโมเลกุลเอาต์ก่อน โมเลกุลเครื่องขยายกำลังสัญญาณมีสองโดเมน แรก binds กับ extender ป้ายและสอง มัน binds กับโมเลกุลขยาย เป็นตัวอย่างขยายโมเลกุลเป็นโซ่ oligonucleotide การผูกเอนไซม์อัลคาไลน์ฟอสฟาเตสDiagrammatically เรามีฐาน -> จับโพรบ Extender -> -> เป้าหมาย -> extender ป้ายชื่อ -> เครื่องขยายเสียงก่อน -> เพาเวอร์แอมป์สามารถใช้การทดสอบการตรวจสอบ และกำหนดปริมาณหลายชนิดของอาร์เอ็นเอหรือดีเอ็นเอเป้าหมาย วิเคราะห์ ผสมดีเอ็นเอแบบแยกสาขา มีตัวอย่างที่จะทดสอบ ทำการตรวจสอบโดยใช้วิธีการไม่ใช่กัมมันตรังสี และต้อง preamplification ของกรดนิวคลีอิกจะพบ การวิเคราะห์ทั้งหมดอาศัย hybridization เอนไซม์ถูกใช้เพื่อบ่งชี้ขอบเขตการ hybridization แต่ไม่ใช้ในการสร้างกรดนิวคลีอิก ดังนั้น จำนวนกรดนิวคลีอิกขนาดเล็กสามารถตรวจพบ และ quantified โดย transcription ย้อนขั้นตอน (ในกรณีของอาร์เอ็นเอ) หรือ PCR ได้ สามารถรันการทดสอบเป็นการทดสอบอัตราความเร็วสูง ซึ่งแตกต่างจากเชิงปริมาณเหนือ blotting วิธีหรือการทดสอบป้องกัน RNAse, labor-intensive และจึงยากที่จะดำเนินการในจำนวนตัวอย่างขนาดใหญ่ อื่น ๆ อัตราความเร็วสูงที่สำคัญเทคนิคการว่าจ้างในการนับของเฉพาะอาร์เอ็นเอโมเลกุลคือ PCR เชิงปริมาณ หลัง transcription กลับของอาร์เอ็นเอกับ cDNAหลายแตกต่างสั้น ๆ เดียวควั่น DNA โมเลกุล (oligonucleotides) ใช้ในการวิเคราะห์ดีเอ็นเอแบบแยกสาขา Oligonucleotide จับและจับ extender ผูกกับกรดนิวคลีอิกเป้าหมาย และ immobilize สนับสนุนแข็ง Oligonucleotide ป้ายชื่อและดีเอ็นเอแบบแยกสาขาตรวจพบกรดนิวคลีอิกเอนไซม์เป้าหมาย ตรึงโปเป้าหมายสนับสนุนแข็งทำให้ละเอียดซักผ้าง่ายขึ้น ซึ่งลดผลบวกปลอม หลังจากรวมเป้าหมายที่จะสนับสนุนแข็ง มันสามารถพบดีเอ็นเอแบบแยกสาขาที่ควบคู่ไปเป็นเอนไซม์ (เช่นอัลคาไลน์ฟอสฟาเตส) Binds กับกรดนิวคลีอิกตัวอย่างดีเอ็นเอแบบแยกสาขา โดยเฉพาะ hybridization ในพื้นที่ซึ่งไม่ได้ครอบครอง โดยจับลูกผสม สาขาของดีเอ็นเอช่วยให้การผสมหนาแน่นมากของดีเอ็นเอด้วยเอนไซม์ ซึ่งเป็นสิ่งสำคัญสำหรับความไวสูงของวิเคราะห์ [ต้องการอ้างอิง] เอนไซม์นี้ catalyzes ปฏิกิริยาของพื้นผิวที่สร้างแสง (อาสาในการ luminometer) จำนวนของแสงขึ้นกับจำนวนของกรดนิวคลีอิกระบุอยู่ในตัวอย่างที่ปล่อยออกมา การออกแบบของดีเอ็นเอแบบแยกสาขาและวิธีมันจะผสมพันธุ์กับกรดนิวคลีอิกจะถูกตรวจสอบที่แตกต่างระหว่างรุ่นต่าง ๆ ของการทดสอบ bDNA [1] มีความจริงที่ไม่มีวัสดุเริ่มต้น preamplified, bDNA assays สามารถตรวจสอบสำเนาของอาร์เอ็นเอชไอวีต่อมล.ของเลือดน้อยกว่า 100

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในทางชีววิทยาการทดสอบดีเอ็นเอแยกเป็นการทดสอบการขยายสัญญาณ (เมื่อเทียบกับการขยายเป้าหมายการทดสอบ) ที่จะใช้ในการตรวจจับโมเลกุลของกรดนิวคลีอิก. จากฐานขึ้นเป็นทดสอบดีเอ็นเอกิ่งเริ่มต้นด้วยอาหารหรือการสนับสนุนที่มั่นคงอื่น ๆ (เช่น เป็น dipstick พลาสติก) จานเป็นพริกไทยกับขนาดเล็กโมเลกุลดีเอ็นเอควั่นเดียว (หรือกลุ่ม) ที่ 'ติดขึ้นไปในอากาศ เหล่านี้เรียกว่าการจับโมเลกุลดีเอ็นเอสอบสวน ถัดไปโมเลกุลดีเอ็นเอขยายจะถูกเพิ่ม ขยายแต่ละคนมีสองโดเมนหนึ่งที่ hybridizes กับโมเลกุลดีเอ็นเอจับและหนึ่งที่ "แฮงค์ออก" ในอากาศ วัตถุประสงค์ของการขยายที่เป็นสองเท่า ก่อนจะสร้างพื้นที่ผิวอื่น ๆ สำหรับโมเลกุลดีเอ็นเอเป้าหมายที่จะผูกและสองจะช่วยให้การทดสอบที่จะดัดแปลงได้ง่ายในการตรวจสอบความหลากหลายของโมเลกุลดีเอ็นเอเป้าหมาย. เมื่อโมเลกุลของการจับภาพและขยายอยู่ในสถานที่และพวกเขาได้ไฮบริดที่ ตัวอย่างที่สามารถเพิ่ม โมเลกุลเป้าหมายในตัวอย่างจะผูกกับโมเลกุลขยาย ดังนั้นเราจึงมีฐานพริกไทยกับฟิวส์จับภาพที่มีการไฮบริดที่จะ Extender ฟิวส์ซึ่งจะมีการไฮบริดที่จะกำหนดเป้าหมายโมเลกุล. ณ จุดนี้การขยายสัญญาณที่จะเกิดขึ้น โมเลกุลดีเอ็นเอขยายฉลากจะมีการเพิ่มที่มีสองโดเมน (คล้ายกับขยายแรก) ขยายฉลาก hybridizes ไปยังเป้าหมายและโมเลกุลก่อนขยาย โมเลกุล preamplifier มีสองโดเมน ก่อนจะผูกกับขยายฉลากและสองก็จับกับโมเลกุลของเครื่องขยายเสียง . ตัวอย่างโมเลกุลเครื่องขยายเสียงเป็นห่วงโซ่ oligonucleotide ผูกไว้กับเอนไซม์ฟอสฟาอัลคาไลน์diagrammatically เรามีฐาน -> Probe จับ -> Extender -> เป้าหมาย -> ขยายฉลาก -> ก่อนเครื่องขยายเสียง -> เครื่องขยายเสียงทดสอบที่สามารถใช้ในการตรวจสอบและจำนวนหลายประเภทของ RNA หรือดีเอ็นเอเป้าหมาย ในการทดสอบดีเอ็นเอแยกเป็นผสมกับตัวอย่างที่จะทดสอบ การตรวจสอบจะกระทำโดยใช้วิธีการที่ไม่กัมมันตรังสีและไม่จำเป็นต้อง preamplification ของกรดนิวคลีอิกที่จะถูกตรวจพบ การทดสอบทั้งหมดขึ้นอยู่กับการผสมข้ามพันธุ์ เอ็นไซม์จะใช้ในการระบุขอบเขตของการผสมข้ามพันธุ์ แต่ไม่ได้ใช้ในการจัดการกับกรดนิวคลีอิก ดังนั้นจำนวนเงินที่เล็ก ๆ ของกรดนิวคลีสามารถตรวจพบและวัดโดยไม่ต้องมีขั้นตอนการถอดรหัสย้อนกลับ (ในกรณีของอาร์เอ็นเอ) และ / หรือวิธี PCR การทดสอบสามารถทำงานเป็นผ่านการทดสอบสูงแตกต่างจากภาคเหนือปริมาณซับหรือทดสอบ RNase ป้องกันที่มีแรงงานมากและยากจึงจะดำเนินการในจำนวนมากของกลุ่มตัวอย่าง เทคนิคอื่น ๆ ผ่านที่สำคัญสูงที่ใช้ในการวัดปริมาณของโมเลกุล RNA ที่เฉพาะเจาะจงคือ PCR เชิงปริมาณหลังจากการถอดรหัสย้อนกลับของอาร์เอ็นเอที่จะ cDNA. หลายที่แตกต่างกันเพียงครั้งเดียวเกลียวสั้นโมเลกุลดีเอ็นเอ (oligonucleotides) จะถูกนำมาใช้ในกิ่งดีเอ็นเอทดสอบ จับและ oligonucleotide จับขยายผูกไว้กับกรดนิวคลีเป้าหมายและทำให้คลื่อมันเกี่ยวกับการสนับสนุนที่แข็งแกร่ง oligonucleotide ฉลากและ DNA แยกแล้วตรวจพบเป้าหมายกรดนิวคลีตรึง ตรึงเป้าหมายในการสนับสนุนที่เป็นของแข็งที่กว้างขวางทำให้ซักผ้าได้ง่ายขึ้นซึ่งจะช่วยลดผลบวกปลอม หลังจากที่มีผลผูกพันของเป้าหมายการสนับสนุนที่แข็งแกร่งที่จะสามารถตรวจพบโดยการแยกดีเอ็นเอซึ่งเป็นคู่กับเอนไซม์ (เช่นอัลคาไลน์ฟอสฟา) ดีเอ็นเอแยกผูกกับกรดนิวคลีตัวอย่างโดยการผสมข้ามพันธุ์เฉพาะในพื้นที่ที่ไม่ได้ครอบครองโดยการจับภาพลูกผสม แยกของดีเอ็นเอช่วยให้การตกแต่งหนาแน่นมากของดีเอ็นเอที่มีเอนไซม์ซึ่งเป็นสิ่งสำคัญสำหรับความไวสูงของการทดสอบ [อ้างจำเป็น] เอนไซม์กระตุ้นปฏิกิริยาของพื้นผิวที่สร้างแสง (ที่ตรวจพบใน luminometer ก) ปริมาณของแสงที่ปล่อยออกมาเพิ่มขึ้นกับปริมาณของกรดนิวคลีอิกที่เฉพาะเจาะจงในตัวอย่าง การออกแบบของดีเอ็นเอกิ่งและวิธีที่จะไฮบริดกับกรดนิวคลีอิกที่จะตรวจสอบความแตกต่างระหว่างรุ่นที่แตกต่างของการทดสอบ bDNA. [1] แม้จะมีความจริงที่ว่าวัสดุที่เริ่มต้นไม่ได้ preamplified ที่ตรวจ bDNA สามารถตรวจสอบได้น้อยกว่า 100 ชุด เอชไอวี-RNA ต่อมิลลิลิตรของเลือด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ชีววิทยา , ดีเอ็นเอทดสอบสัญญาณ ( กิ่ง ) ( ตรงข้ามกับเป้าหมาย ( ต่อ ) ที่ใช้ในการตรวจหากรดนิวคลีอิกโมเลกุล

จากฐานขึ้นเป็นกิ่งดีเอ็นเอการทดสอบเริ่มต้นด้วยจานทึบหรือบางอื่น ๆสนับสนุน ( เช่น บ้าอำนาจ พลาสติก ) จานเป็นพริกไทยกับเล็กเดี่ยวเกลียวดีเอ็นเอของโมเลกุล ( หรือโซ่ ) ว่า ' ติด ' ในอากาศเหล่านี้จะเรียกว่าจับดีเอ็นเอโมเลกุล ต่อไปเป็นสารโมเลกุลดีเอ็นเอจะถูกเพิ่ม แต่ละ Extender ได้ 2 โดเมน ที่ hybridizes เพื่อจับโมเลกุลดีเอ็นเอและหนึ่งที่ " แฮงค์ " ในอากาศ จุดประสงค์ของ Extender เป็นสองเท่า ก่อนจะสร้างพื้นที่เพิ่มเติมพร้อมใช้งานสำหรับดีเอ็นเอโมเลกุลเป้าหมายเพื่อผูกมัด และ สองมันช่วยให้แบคทีเรียที่จะปรับได้อย่างง่ายดายเพื่อตรวจสอบความหลากหลายของโมเลกุลของดีเอ็นเอเป้าหมาย

เมื่อจับภาพและสารโมเลกุลอยู่ในสถานที่และพวกเขาสามารถ ตัวอย่างสามารถเพิ่ม เป้าหมายของตัวอย่างจะผูกกับสารโมเลกุล ดังนั้นเราจึงมีฐานพริกไทยกับฟิวส์จับ ซึ่งสามารถที่จะยืดวัด ซึ่งจะเป็นเป้าหมาย

) โมเลกุลณจุดนี้ ขยายสัญญาณเกิดขึ้น ฉลากสารโมเลกุลดีเอ็นเอเพิ่มว่ามี 2 โดเมน ( คล้ายกับ Extender ก่อน ) ฉลากสาร hybridizes ไปยังเป้าหมาย และก่อนโมเลกุลถูกขยายขึ้น การลดการอักเสบ โมเลกุลมี 2 โดเมน ครั้งแรก มันผูกกับป้ายชื่อ Extender และสอง มันผูกกับแอมป์โมเลกุลตัวอย่างโมเลกุลเป็นเครื่องขยายเสียง ซึ่งโซ่ผูกกับเอนไซม์อัลคาไลน์ ฟอสฟาเตส

diagrammatically เรามีฐาน - > - > - > จับสอบสวน Extender เป้าหมาย - > - > ปรีแอมป์ป้าย Extender - > แอมป์

( สามารถใช้ตรวจจับและวัดหลายประเภทของ RNA หรือ DNA เป้าหมาย ในการทดสอบย่อยดีเอ็นเอ , ผสมกับตัวอย่างที่จะทดสอบการตรวจสอบโดยใช้วิธีการที่ไม่ใช่กัมมันตรังสี และไม่ต้องใช้ preamplification ของกรดนิวคลีอิกที่จะตรวจพบ ( ทั้งหมดที่อาศัยในลูกผสม เอนไซม์ที่ใช้ในการระบุขอบเขตของเบส แต่ไม่ใช้เพื่อจัดการกับกรดนิวคลีอิก . ดังนั้นจำนวนเงินขนาดเล็กของกรดนิวคลีอิกสามารถตรวจพบและ quantified โดยไม่ย้อนกลับตามขั้นตอน ( ในกรณีของ RNA ) และ / หรือ PCR ( สามารถใช้เป็นวิธีที่มีอัตราความเร็วสูง ซึ่งแตกต่างจากวิธีเชิงปริมาณทางภาคเหนือหรือเลสป้องกัน assay ซึ่งเป็นแรงงานเข้มข้น จึงยากที่จะแสดงเป็นจำนวนมากของกลุ่มตัวอย่างอื่น ๆหลักสูง throughput เทคนิคที่ใช้ในการบอกจำนวนของโมเลกุล RNA PCR หลังจากกลับเฉพาะปริมาณของ mRNA ซึ่งวิธี

หลายๆเดียวเกลียวดีเอ็นเอของโมเลกุล ( โอลิโกนิวคลีโอไทด์ ) จะใช้ในการแยกดีเอ็นเอของแบคทีเรีย จับและยึด Extender ซึ่งผูกกับเป้าหมายกรดนิวคลีอิกและควบคุมไว้ได้ ในการสนับสนุนที่เป็นของแข็งฉลาก ซึ่งตรวจพบดีเอ็นเอและกิ่งแล้วตรึงเป้าหมายกรดนิวคลีอิก การตรึงเป้าหมายในการสนับสนุนที่แข็งแกร่งทำให้ซักผ้าได้ง่ายขึ้นอย่างละเอียด ซึ่งลดบวกเท็จ หลังจากผูกของเป้าหมายของแข็งสนับสนุนมันสามารถตรวจพบโดยแยกดีเอ็นเอซึ่งเป็นคู่กับเอนไซม์ ( เช่นวันวาเลนไทน์ )พระกิ่งที่ผูกกับตัวอย่างดีเอ็นเอกรดนิวคลีอิกไฮบริ โดยเฉพาะในพื้นที่ซึ่งไม่ได้ครอบครองโดยลูกผสมในการจับภาพ แตกแขนงของดีเอ็นเอให้หนาแน่นผสมของดีเอ็นเอด้วยเอนไซม์ ซึ่งเป็นสิ่งสำคัญสำหรับความไวสูง ( [ อ้างอิงที่จำเป็น ] เอนไซม์ที่กระตุ้นปฏิกิริยาของพื้นผิวซึ่งจะสร้างแสง ( พบในลูมิโนมิเตอร์ )ปริมาณของแสงที่ปล่อยออกมาเพิ่มขึ้น จํานวนเฉพาะกรดนิวคลีอิกปัจจุบันในตัวอย่าง การออกแบบของกิ่งดีเอ็นเอและวิธีมันผสมพันธุ์กับกรดนิวคลีอิกควรแตกต่างระหว่างรุ่นที่แตกต่างกันของ bdna ( . . . [ 1 ] แม้จะมีความจริงที่ว่าเริ่มไม่ preamplified วัสดุ ,bdna ) สามารถตรวจพบน้อยกว่า 100 แผ่น hiv-rna ต่อมิลลิลิตรของเลือด