The transient gene expression syste

The transient gene expression system using plant protoplasts has become widely used for highthroughput
analysis
and
functional
characterization
of
genes.
In
this
work
we
investigated
protoplast isolation and green fluorescent protein (GFP) transient transfection and their main affecting factors, such
as
mannitol
concentration
in
enzymolysis
solution,
enzymolysis
time,
and
glycol (PEG) concentration and transfection time, on ‘xintaimici’ cucumber. The results showed that when the enzyme
solution
had
1.5%
cellulase
R-10
(w/v),
0.4%
macerozyme
R-10
(w/v),
0.4
mM 2-morpholinoethanesulfonic acid, 10 mM CaCl
, 0.1% bovine serum albumin, and was at pH 5.8 with an enzymolysis time of 8 h, the protoplast yield was 6–7 × 10
2
6
/g fresh weight. Viability was about 90%. GFP was used as the reporter gene to measure protoplast transformation efficiency. When the concentration of
PEG4000
was
20%
and
transfection
time
was
20
or
30
min,
transformation
polyethylene
M
efficiency
than 50% and the green fluorescent signal could be detected in the cytoplasm, chloroplasts, and plasma membrane. We show here an efficient PEG-mediated cucumber protoplast transient expression system using GFP reporter gene, laying a technical foundation for future research in cucumber molecular biology.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ระบบแสดงยีนชั่วคราวใช้พลาสต์พืชกลายเป็นใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับ highthroughput วิเคราะห์ และ ทำงาน จำแนกลักษณะ ของ ยีน ใน นี้ ทำงาน เรา การตรวจสอบ protoplast แยกและกรี fluorescent โปรตีน (GFP) ชั่วคราว transfection และกระทบต่อหลักการปัจจัย เช่น เป็น mannitol ความเข้มข้น ใน enzymolysis แก้ปัญหา enzymolysis เวลา และ ไกลคอล (PEG) ความเข้มข้นและ transfection เวลา แตงกวา 'xintaimici' ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่าเมื่อเอนไซม์ วิธีการแก้ไขปัญหา มี 1.5% cellulase R-10 (w/v), 0.4% macerozyme R-10 (w/v), 0.4 กรด 2-morpholinoethanesulfonic มม. 10 มม. CaCl, 0.1% วัว serum albumin และที่ pH 5.8 มีเวลา enzymolysis ชม. 8 ผล protoplast ถูก 6-7 × 1026/g สดน้ำหนัก ชีวิตถูกประมาณ 90% GFP ใช้เป็นยีนข่าววัด protoplast แปลง efficiency เมื่อความเข้มข้นของ PEG4000 ถูก 20% และ transfection เวลา ถูก 20 หรือ 30 นาที การเปลี่ยนแปลง เอทิลีน M efficiency กว่า 50% และ fluorescent สีเขียว สัญญาณอาจถูกตรวจพบในไซโทพลาซึม chloroplasts และเยื่อ เราแสดงที่นี่รวมแตงกวามีหมุด protoplast นิพจน์ชั่วคราวระบบการใช้ยีน GFP ข่าว วางรากฐานทางเทคนิคสำหรับการวิจัยในอนาคตในแตงกวาอณูชีววิทยา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ระบบการแสดงออกของยีนชั่วคราวโดยใช้โปรโตพลาพืชได้กลายเป็นที่ใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับ highthroughput การวิเคราะห์และการทำงานลักษณะของยีน. ในการนี้การทำงานของเราตรวจสอบการแยกโปรโตพลาและชั้นสีเขียวโปรตีนuorescent (GFP) transfection ชั่วคราวและปัจจัยที่มีผลกระทบต่อหลักของพวกเขาเช่นเป็นแมนนิทอลความเข้มข้นในenzymolysis การแก้ปัญหา , enzymolysis เวลาและไกลคอล(PEG) ความเข้มข้นและเวลา transfection ในแตงกวา 'xintaimici' ผลการศึกษาพบว่าเมื่อเอนไซม์โซลูชั่นที่มี1.5% เซลลูR-10 (w / v) 0.4% macerozyme R-10 (w / v) 0.4 มิลลิกรด 2 morpholinoethanesulfonic 10 มิลลิแคลเซียมคลอไรด์, 0.1% โปรตีนชนิดหนึ่งในซีรั่มวัว และได้รับการที่ pH 5.8 ที่มีเวลา enzymolysis 8 ชั่วโมงผลผลิตโปรโตพลาเป็น 6-7 × 10 2 6 / กรัมน้ำหนักสด มีชีวิตเป็นประมาณ 90% GFP ถูกใช้เป็นยีนนักข่าวในการวัดการเปลี่ยนแปลงโปรโตพลาประสิทธิภาพการไฟ เมื่อความเข้มข้นของPEG4000 เป็น20% และtransfection เวลาเป็น20 หรือ30 นาที, การเปลี่ยนแปลงของเอทิลินM ciency EF ไฟกว่า50% และสัญญาณ uorescent ชั้นสีเขียวจะได้รับการตรวจพบในพลาสซึม, คลอโรพลาและพลาสม่าเมมเบรน เราจะแสดงที่นี่ EF ไฟเพียงพอแตงกวา PEG-พึ่งโปรโตพลาระบบการแสดงออกชั่วคราวโดยใช้ยีน GFP นักข่าว, การวางรากฐานทางเทคนิคสำหรับการวิจัยในอนาคตในแตงกวาอณูชีววิทยา